發(fā)布時間：2020-08-28 02:58

【摘要】：目的:建立化療大鼠壓瘡模型和普通大鼠壓瘡模型,提取大鼠血液和受壓皮膚和肌肉組織,通過酶聯(lián)免疫法(Elisa)檢測血漿hs-CRP(超敏C)蛋白水平、免疫印跡(WB)檢測血清及組織液中的TNF-a(腫瘤壞死因子)、IL-6(白細(xì)胞介素-6)蛋白表達(dá),結(jié)合病理切片光鏡觀察進(jìn)行組間比對,研究化療大鼠壓瘡的易感性,以及TNF-a、IL-6和hs-CRP蛋白在大鼠模型中的表達(dá)及作用機(jī)制,探討壓瘡發(fā)生的影響因素,尋找可以預(yù)測化療大鼠壓瘡發(fā)生的敏感指標(biāo),為臨床化療病人壓瘡的預(yù)防提供借鑒。方法:將80只健康SD大鼠隨機(jī)分為空白組(n=10只)、實(shí)驗(yàn)對照組(n=30)和實(shí)驗(yàn)組(n=40)。實(shí)驗(yàn)對照組使用壓力裝置作用于大鼠的股薄肌,施予34.7k Pa壓強(qiáng),施壓2 h和移除0.5 h的方式模擬缺血再灌注過程,以2.5 h為一個循環(huán),30只大鼠對應(yīng)進(jìn)行2、3、4個I/R(缺血-再灌注)循環(huán)建立不同程度損傷的大鼠壓瘡模型,而實(shí)驗(yàn)組先通過腹腔注射5-FU(氟尿嘧啶),按首次劑量125mg·kg-1,次日起連續(xù)3d維持62.5mg·kg-1·d-1劑量建立化療模型,觀察大鼠期間外部體征變化�；熌Ｐ徒⒊晒笤龠M(jìn)行2、3、4個I/R循環(huán)建立大鼠壓瘡模型,壓瘡模型的制作方法與實(shí)驗(yàn)對照組一致,空白組同期飼養(yǎng),不做任何處理。實(shí)驗(yàn)后三大組大鼠分別進(jìn)行眼眶采血和受壓組織提取,全血分別加入抗凝管和干燥管離心提取上清液,部分受壓組織搗碎研磨后加入蛋白裂解液裂解,離心,加入蛋白上樣緩沖液,100℃加溫4 min變性后-80℃冰箱保存待檢測,用Elisa檢測血漿中的hs-CRP蛋白含量,WB(免疫印跡)檢測血清及組織液中的TNF-a、IL-6蛋白表達(dá)量,而受壓的皮膚和部分組織用于HE染色,病理切片光鏡觀察進(jìn)行組間比較。結(jié)果:1、肉眼及光鏡觀察:在同一壓強(qiáng)(34.7k Pa)和同一缺血再灌注循環(huán)次數(shù)下(I/R2、I/R3、I/R4)下,化療組大鼠在皮膚受壓后壓紅范圍較普通壓瘡組大鼠大,且皮膚周圍出現(xiàn)紅點(diǎn)較多�；熃M大鼠復(fù)層上皮結(jié)構(gòu)普遍變薄,層次不清,重度損傷時部分上皮結(jié)構(gòu)消失。皮膚附屬結(jié)構(gòu)更少,受壓時真皮膠原易出現(xiàn)變性、重度損傷時溶解較嚴(yán)重,炎性細(xì)胞浸潤更明顯,看不到脂肪顆粒,血管充血瘀滯,血管壁變厚,腫大。在同等10倍鏡下視野中普通壓瘡組只能觀察到皮膚或肌肉組織,而化療組由于表皮變薄,耐受性降低,在同一視野下可同時觀察到皮膚和肌肉組織,表皮與真皮、皮膚與肌肉組織剝離情況較明顯,肌肉組織間隙增寬,更易出現(xiàn)溶解斷裂情況。根據(jù)皮膚肌肉組織光鏡下的分級標(biāo)準(zhǔn)將大鼠進(jìn)行損傷程度分級,統(tǒng)計每組輕度損傷、中度損傷、重度損傷的例數(shù)并進(jìn)行組間比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=62.309,P0.01),其中實(shí)驗(yàn)組(即化療組)大鼠出現(xiàn)重度損傷的總例數(shù)為13例,實(shí)驗(yàn)對照組為3例,實(shí)驗(yàn)組出現(xiàn)的重度損傷大鼠的例數(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于實(shí)驗(yàn)對照組。2、以化療大鼠化療結(jié)束后第7天的體質(zhì)量(X1)、紅細(xì)胞(X2)、白細(xì)胞(X3)、血小板(X4)計數(shù)為自變量,皮膚肌肉損傷程度分級Y為因變量進(jìn)行多元逐步回歸分析,分析大鼠皮膚肌肉損傷程度的影響因素,其中白細(xì)胞計數(shù)這個自變量P0.05,擬合方程成立。此時40只化療白細(xì)胞的計數(shù)均低于正常組及實(shí)驗(yàn)前計數(shù)的30%以上,回歸方程Y=4.918-0.298·X3,可認(rèn)為白細(xì)胞計數(shù)低于正常30%以上是皮膚肌肉損傷加重的主要影響因素。3、在同一壓強(qiáng)(34.7kPa)和同一缺血再灌注循環(huán)(I/R2、I/R3、I/R4)次數(shù)下,化療+I/R組大鼠較I/R組和空白組大鼠血漿hs-CRP蛋白含量更高,組間比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4、在同一壓強(qiáng)(34.7k Pa)和同一缺血再灌注循環(huán)(I/R2、I/R3、I/R4)次數(shù)下,化療+I/R組大鼠血清及組織液中TNF-α的條帶普遍要比空白組和I/R組條帶粗,灰度值更高,表達(dá)量也普遍比后兩者高,其次到I/R組,組間比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。5、在同一壓強(qiáng)(34.7k Pa)和同一缺血再灌注循環(huán)(I/R2、I/R3、I/R4)次數(shù)下,I/R4組及化療+I/R4組大鼠血清中IL-6的條帶普遍要比空白組和其它實(shí)驗(yàn)組條帶粗,其中單純I/R組普遍比化療+I/R組表達(dá)量高,組間比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),經(jīng)研究推測與化療組血液中的白細(xì)胞等免疫細(xì)胞減少導(dǎo)致IL-6分泌減少原因有關(guān)。而在大鼠組織液中IL-6的條帶,化療+I/R組普遍比單純I/R組及空白組條帶粗,表達(dá)量更高,組間比較(P0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義。6、與皮膚損傷程度的spearman相關(guān)分析當(dāng)中,大鼠血漿hs-CRP蛋白與皮膚損傷程度呈高度相關(guān)(相關(guān)系數(shù)為r=0.860,P0.01);大鼠血清及組織液TNF-α的表達(dá)量變化與與皮膚損傷程度呈中度相關(guān)(相關(guān)系數(shù)分別為:r1=0.320,P0.01;r2=0.657,P0.01);大鼠血清及組織液IL-6的表達(dá)量變化與與皮膚損傷程度分別呈低度、中度相關(guān)(相關(guān)系數(shù)分別為:r3=0.294,P0.01;r4=0.467,P0.01)。在本研究中,大鼠血漿hs-CRP和組織液TNF-a表達(dá)量變化與皮膚損傷的相關(guān)性更大。結(jié)論:1、與空白組,普通壓瘡組大鼠相比較,化療后的大鼠皮膚受壓后更容易破損,皮膚耐受性更低,組織損傷程度更重,該損傷加重與化療大鼠鱗狀上皮結(jié)構(gòu)缺失、皮下脂肪層缺失有關(guān)外,也與大鼠缺血再灌注之后誘發(fā)機(jī)體應(yīng)激反應(yīng),炎性因子表達(dá)量增高有關(guān),hs-CRP、TNF-a、IL-6被釋放出來共同參與炎癥反應(yīng),且hs-CRP的含量及TNF-a的表達(dá)量均高于非化療組大鼠。2、化療藥物輸注之后,當(dāng)白細(xì)胞計數(shù)低于正常的30%以上時,大鼠免疫力降低,發(fā)生壓瘡的風(fēng)險將會增高。3、血漿中hs-CRP蛋白含量及組織液中的TNF-a的表達(dá)量變化,對壓瘡的發(fā)生有一定的預(yù)測作用。兩個指標(biāo)含量或表達(dá)量越高,壓瘡發(fā)生的風(fēng)險更大。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R472
【圖文】：

23圖 1-1 正常 SD 大鼠 圖 1-2 大鼠化療停藥后第 1 天 圖 1-3 大鼠化療停藥后后第 7 天正常大鼠毛色光澤，目光有神，反應(yīng)靈敏，活動敏捷�；熗瓿赏Ｋ幒蟮牡� 1 天，大鼠活動量減少，眼神呆滯，反應(yīng)遲鈍，開始出現(xiàn)便溏血便的情況�；熗瓿赏Ｋ幒蟮牡� 7 天，大鼠萎靡，喜歡扎堆弓背，毛色枯槁，反應(yīng)遲鈍，大便便溏，體重減輕，腹部出現(xiàn)腹水。

23圖 1-1 正常 SD 大鼠 圖 1-2 大鼠化療停藥后第 1 天 圖 1-3 大鼠化療停藥后后第 7 天正常大鼠毛色光澤，目光有神，反應(yīng)靈敏，活動敏捷�；熗瓿赏Ｋ幒蟮牡� 1 天，大鼠活動量減少，眼神呆滯，反應(yīng)遲鈍，開始出現(xiàn)便溏血便的情況�；熗瓿赏Ｋ幒蟮牡� 7 天，大鼠萎靡，喜歡扎堆弓背，毛色枯槁，反應(yīng)遲鈍，大便便溏，體重減輕，腹部出現(xiàn)腹水。

23圖 1-1 正常 SD 大鼠 圖 1-2 大鼠化療停藥后第 1 天 圖 1-3 大鼠化療停藥后后第 7 天正常大鼠毛色光澤，目光有神，反應(yīng)靈敏，活動敏捷�；熗瓿赏Ｋ幒蟮牡� 1 天，大鼠活動量減少，眼神呆滯，反應(yīng)遲鈍，開始出現(xiàn)便溏血便的情況�；熗瓿赏Ｋ幒蟮牡� 7 天，大鼠萎靡，喜歡扎堆弓背，毛色枯槁，反應(yīng)遲鈍，大便便溏，體重減輕，腹部出現(xiàn)腹水。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2806995