【摘要】：目的:萬古霉素是治療耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)感染的首選藥物。近年來,隨著萬古霉素臨床應(yīng)用增加,其敏感性逐漸減低,導(dǎo)致感染持續(xù)存在。異質(zhì)性萬古霉素中介金黃色葡萄球菌(hVISA,其表型敏感,但也存在耐藥亞群)的存在與持續(xù)性感染以及萬古霉素治療失敗高度相關(guān),但其具體機制尚不清楚。本研究通過將一株臨床分離的hVISA菌株10827用不同濃度梯度的萬古霉素進行體外誘導(dǎo),并檢測原代菌株與系列誘導(dǎo)菌株的生物膜形成能力及其生物膜形成相關(guān)基因的mRNA量,初步探討萬古霉素誘導(dǎo)金黃色葡萄球菌生物膜形成及其機制。方法:(1)將一株臨床菌株(菌株編號:10827,MIC為2μg/ml,經(jīng)過宏量E-test方法證實其為hVISA)用不同濃度梯度的萬古霉素進行連續(xù)傳代誘導(dǎo),用E-test方法檢測菌株的MIC值;(2)使用比色法檢測所有菌株的生長情況;(3)使用微量平板法檢測原代菌株及其系列誘導(dǎo)菌株的生物膜形成能力;(4)使用掃描電鏡觀察生物膜的微觀結(jié)構(gòu);(5)采用熒光定量PCR方法檢測生物膜形成相關(guān)基因的mRNA量。結(jié)果:(1)10827菌株通過體外誘導(dǎo)實驗獲得了一系列MIC值遞增的同源性菌株,根據(jù)萬古霉素的MIC值,分別命名為10827-V8、10827-V16和10827-V32;(2)系列誘導(dǎo)菌株與原代菌株相比,隨著萬古霉素MIC值的升高,細(xì)菌的生長速度逐漸降低,生物膜形成能力逐漸增強;(3)掃描電鏡顯示隨著萬古霉素MIC值的升高,細(xì)菌相互聚集成團,出現(xiàn)小梁狀生物膜結(jié)構(gòu)以及粗糙的細(xì)胞表面;(4)系列誘導(dǎo)菌株與原代菌株相比,隨著萬古霉素MIC值的升高,fnbA、icaA、atlA和sarA基因的的mRNA量逐漸增加,icaR基因的mRNA量逐漸減低。結(jié)論:(1)萬古霉素可以在體外誘導(dǎo)hVISA菌株的耐藥性增強,并且在誘導(dǎo)過程中,細(xì)菌的生物膜形成能力逐漸增加;(2)在萬古霉素誘導(dǎo)過程中,與生物膜初始黏附階段相關(guān)的fnbA、atlA和sarA基因以及與聚集和增殖階段相關(guān)的icaA、icaR和sarA基因的mRNA量增加,可能與生物膜形成有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R446.5

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本文編號：2459329