【摘要】：目的:采用PCR擴(kuò)增和DNA序列分析技術(shù),檢測(cè)急性腹瀉患者分離的非傷寒沙門氏菌(NTS)毒力基因攜帶情況與特點(diǎn),探討感染人體的NTS菌株血清型、分子分型、耐藥表型與毒力基因攜帶的關(guān)系,為預(yù)防與控制NTS感染提供依據(jù)。方法:1、毒力基因檢測(cè):實(shí)驗(yàn)菌株為2012年~2013年分離自天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院腸道門診急性腹瀉患者糞便標(biāo)本的45株NTS,包括12個(gè)血清型、23個(gè)PFGE型和13個(gè)MLST型;以毒力島SPI1~5基因sitC、hilA、sseL、sifA、mgtC、siiE、sopB毒性質(zhì)�；騪rot6E、pefA、spvB和DNA毒素基因cdtB和調(diào)控基因phoP為目的基因,進(jìn)行PCR擴(kuò)增,并對(duì)cdtB陽性的菌株cdtB、pltA、pltB基因的全長(zhǎng)進(jìn)行擴(kuò)增。2、PCR產(chǎn)物序列分析:從每個(gè)目的基因的PCR擴(kuò)增陽性產(chǎn)物中隨機(jī)挑選1株進(jìn)行測(cè)序分析;對(duì)cdtB及其相關(guān)基因pltA和pltB進(jìn)行全長(zhǎng)擴(kuò)增測(cè)序,用BLAST和ClustalX分析其DNA序列以及推導(dǎo)出的氨基酸序列與GenBank中代表性菌株序列的相似性。3、毒力基因攜帶與抗菌藥物敏感性統(tǒng)計(jì)分析:使用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。毒力基因攜帶與對(duì)抗菌藥物的敏感性用Fisher精確計(jì)算進(jìn)行統(tǒng)計(jì),P0.05視為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果:1、45株NTS毒力基因檢出率依次為:sitC、hilA、mgtC、siiE、sopB、phoP100%,sseL、sifA97.78%,prot6E 31.11%,pefA、spvB 37.78%,cdt B 2.22%。與GenBank中對(duì)應(yīng)的參考序列相似性分別是sitC 98%、hil A 98%、siiE 99%、spvB 100%、prot6e100%、sifa99%、mgtc100%、sopb99%、ssel100%、pefa99%、phop100%、cdtb99%。2、毒力島基因:45株nts全部檢測(cè)到了sitc、hila、mgtc、siie、sopb;除了菌株406,其余44株都檢測(cè)到sifa基因;除了菌株25,其余44株都檢測(cè)到ssel基因。3、毒性質(zhì)粒基因:全部14株腸炎血清型沙門氏菌,無論pt型如何,都檢測(cè)到了位于質(zhì)粒上的毒力基因prot6e、spvb、pefa;全部9株鼠傷寒血清型沙門氏菌中,3株st19型檢測(cè)到spvb和pefa,prot6e則陰性,它們的pt型分別為pt04和pt20,而另外6株st34型都沒有得到以上3種基因陽性擴(kuò)增產(chǎn)物;其他血清型菌株也均未得到這3種基因陽性擴(kuò)增產(chǎn)物。4、cdtb基因:有1株格蘭扁血清型沙門氏菌檢測(cè)到了cdtb基因,測(cè)序結(jié)果顯示cdtb長(zhǎng)819bp,其相關(guān)基因plta長(zhǎng)729bp,pltb長(zhǎng)414bp;各編碼269aa、243aa、140aa長(zhǎng)的多肽鏈。序列比對(duì)結(jié)果顯示cdtb與genbank中的沙門氏菌的相似性在93.1%~99.5%,氨基酸序列相似性為92.6%~99.3%;plta與genbank中的沙門氏菌的同源性在81.5%~99.6%,氨基酸序列相似性為78.2%~100.0%;pltb與genbank中的沙門氏菌的同源性在64.3%~99.0%,氨基酸序列相似性為69.1%~100.0%。5、毒力基因與抗菌藥物敏感性的關(guān)系:萘啶酸的敏感性與prot6e、spvb、pefa相關(guān),p值均0.001;四環(huán)素的敏感性與prot6e、spvb、pefa相關(guān),p值分別是0.044、0.017、0.017;鏈霉素的敏感性與prot6e相關(guān),p值為0.046。其他抗菌藥物敏感性與本次檢測(cè)的毒力基因未見統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性。結(jié)論:1、所有實(shí)驗(yàn)菌株中都含有毒力島spi1~5代表性基因,spi1~5可能是非傷寒沙門氏菌感染人體所必需。2、毒性質(zhì)�；騪rot6e可能是腸炎血清型沙門氏菌的特有基因。鼠傷寒沙門氏菌攜帶毒性質(zhì)�；蚩赡芘cmlst分型有關(guān),應(yīng)高度警惕本地區(qū)mlst19型鼠傷寒沙門氏菌進(jìn)化為耐藥性更強(qiáng)、致病力更高的菌株。3、首次在格蘭扁血清型中發(fā)現(xiàn)了cdtB、pltA、pltB基因,其DNA序列和推導(dǎo)出的氨基酸序列與其他血清型NTS存在差異,對(duì)格蘭扁沙門氏菌致病性的影響值得進(jìn)一步研究。4,本地區(qū)NTS菌株攜帶毒力基因與耐藥表型有關(guān),可能存在二者位于同一遺傳元件共同播散的機(jī)制。
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【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R440

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1 張成龍;非傷寒沙門氏菌臨床株毒力基因初步分析[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

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本文編號(hào)：2398513