【摘要】：目的,對四種快速新型的沙門氏菌檢測方法進行評估、比較及其臨床應(yīng)用研究,同時探索能夠?qū)ι抽T氏菌快速鑒定、分型、分析的最佳方法并建立和優(yōu)化臨床標(biāo)本檢測流程。方法,以生化反應(yīng)聯(lián)合血清凝集法為標(biāo)準(zhǔn)方法分別對膠體金法、質(zhì)譜法、16Sr DNA法、CLSPT法結(jié)果、方法學(xué)、臨床應(yīng)用進行研究、比較和評估。應(yīng)用沙門氏菌膠體金法試劑對65例臨床腹瀉患者糞便標(biāo)本(其中沙門菌屬感染20例,非沙門菌感染45例)及44株純培養(yǎng)的沙門菌屬菌懸液進行檢測,評價膠體金試劑的檢測性能。同時應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight Mass Spectrometry,MALDI-TOF-MS)16Sr DNA、CLSPT(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats locus spacer pair typing,CLSPT)方法對上述分離和純培養(yǎng)的64株已知的沙門菌進行檢測,統(tǒng)計鑒定符合率,并對各方法進行比較分析。結(jié)果,膠體金法敏感性100%,特異性98.7%,準(zhǔn)確度99.3%,最低檢出限1×106 cfu·ml-1;試劑可實現(xiàn)A~E不同亞群沙門氏菌檢測,與其他腸道腹瀉致病菌無交叉反應(yīng),且在4℃和37℃避光保存6個月,檢測結(jié)果未發(fā)生改變。該檢測試劑聯(lián)合快速亞硒酸鹽胱氨酸(SC)增菌液能夠很好的提高沙門菌檢出率。質(zhì)譜技術(shù),質(zhì)譜儀對沙門菌的屬水平鑒定率達(dá)100%(64/64);血清型水平上,腸炎沙門菌符合率97.22%(35/36),鼠傷寒沙門菌為100%(17/17)。CLSPT結(jié)果,擴增片段在750bp左右,64株沙門菌經(jīng)CLSPT方法檢測結(jié)果腸炎沙門菌34株,堿基匹配率為97%-100%,鑒定符合率94.44%(34/36);鼠傷寒沙門符合率100%(17/17)。甲型副傷寒100%(2/2),乙型副傷寒100%(2/2)。16sr DNA結(jié)果,PCR片段堿基長度1500bp左右,檢測出腸炎沙門菌35株,堿基匹配率為99%-100%,鑒定符合率97.22%(35/36);鼠傷寒沙門菌17株,鑒定符合率100%(17/17)。四種方法在屬水平鑒定符合率無顯著差異(P0.05),在種水平上MALDI-TOF-MS、16Sr DNA、CLSPT方法鑒定符合率無顯著差異(P0.05),三種方法有較高的一致率,和比較滿意的一致性。膠體金法與質(zhì)譜技術(shù)法最為節(jié)省時間(見表4-9)。如兩種方法聯(lián)合應(yīng)用可為臨床提供快速準(zhǔn)確報告,具有重要意義。結(jié)論,膠體金法使用非常方便,檢測速度非�？�,但只能將沙門菌鑒定到屬水平;質(zhì)譜技術(shù)無論在屬水平還是種水平都有較好的鑒定結(jié)果,且具有強大的數(shù)據(jù)分析能力,速度也非常快;CLSPT基于成簇的規(guī)律間隔的短回文重復(fù)序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)分型方法的改進方法,即CRISPR位點間隔序列分型(CLSPT)法分析位點簡化、簡單方便、準(zhǔn)確率高,但結(jié)果影響因素多檢測時間長;16sr DNA法,雖然很快很準(zhǔn)但對沙門氏菌種間堿基分辨率較差。膠體金法和MALDI-TOF-MS法均為目前最為快速的沙門菌檢測方法,膠體金法最適用于快速初篩檢測且準(zhǔn)確可靠,可為臨床提供快速的初步報告,為患者的快速診療提供主要方向,質(zhì)譜技術(shù)最適用于快速鑒定、分型、數(shù)據(jù)分析,可快速的為臨床提供詳細(xì)的病原信息及分析工具,如兩者聯(lián)合應(yīng)用,可互為補充,大大提高臨床標(biāo)本的檢測速度、靈敏度和特異度,具有廣闊的應(yīng)用前景。
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本文編號：2139521