本文選題：前列腺特異抗原 + 前列腺癌��； 參考：《分析化學(xué)》2016年08期

【摘要】：采用雜交瘤技術(shù)構(gòu)建抗前列腺特異抗原-α1-抗胰凝乳蛋白酶(Prostate specific antigen-α1-antichymotrypsin complex,PSA-ACT)單克隆抗體(單抗)細(xì)胞株,共獲得8株穩(wěn)定分泌PSA-ACT單抗的細(xì)胞株,純化后進(jìn)行免疫特性鑒定并做單抗配對(duì)。選擇其中一對(duì)單抗,采用辣根過(guò)氧化物酶(HRP)催化魯米諾(lumino)-H_2O_2化學(xué)發(fā)光體系,建立了測(cè)定人血清中PSA-ACT濃度的化學(xué)發(fā)光酶免疫分析方法(CLEIA)。對(duì)包被緩沖液、包被抗體濃度、酶標(biāo)抗體稀釋度、溫育時(shí)間、發(fā)光反應(yīng)時(shí)間和免疫反應(yīng)步驟等實(shí)驗(yàn)參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化。在最佳實(shí)驗(yàn)條件下,PSA-ACT濃度在5~40 ng/m L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(R~2=0.9943),檢出限為0.53 ng/m L,批內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為4.6%~6.6%,批間RSD為5.7%~8.0%,回收率為95.4%~104.2%,與游離前列腺特異性抗原F-PSA的交叉反應(yīng)率為0.6%。本方法簡(jiǎn)單、穩(wěn)定、靈敏、快速,為開(kāi)發(fā)檢測(cè)PSA-ACT的CLEIA試劑盒奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Hybridoma technique was used to construct prostate specific antigen- 偽 1-antichymotrypsin complex PSA-ACT monoclonal antibody cell lines. Eight cell lines secreting stable PSA-ACT monoclonal antibodies were obtained. A chemiluminescent enzyme immunoassay (CLEIA) for the determination of PSA-ACT in human serum was developed by using a pair of monoclonal antibodies and a chemiluminescence system of (lumino) / S _ 2O _ 2 catalyzed by horseradish peroxidase (HRP). The experimental parameters such as coating buffer concentration of coated antibody dilution of enzyme-labeled antibody incubation time luminescence reaction time and immunoreaction steps were optimized. Under the optimum experimental conditions, the concentration of PSA-ACT was linear in the range of 5o 40 ng/m / L (RPSA-ACT 0.9943), the detection limit was 0.53 ng/m / L, the relative standard deviation (RSD) was 4.6 ng/m / L, and the relative standard deviation (RSD) was 4.66.0.The recovery rate was 95.4104.22.The cross reaction rate with free prostate specific antigen F-PSA was 0.6m. The method is simple, stable, sensitive and rapid, which lays a foundation for the development of CLEIA kit for the detection of PSA-ACT.
【作者單位】： 昆明醫(yī)科大學(xué)附屬延安醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科;昆明醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科;
【基金】：云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究(昆醫(yī)聯(lián)合專項(xiàng))項(xiàng)目(No.2014FB077)資助
【分類號(hào)】：R446.6

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本文編號(hào)：2093137