本文選題：漢坦病毒 + 基因型��； 參考：《現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)》2016年02期

【摘要】：目的建立一種適應(yīng)漢坦病毒不同基因型別的通用實時熒光定量RT-PCR檢測方法。方法利用Beacon Designer7.5軟件設(shè)計引物和探針,以人工合成漢坦病毒5種具有代表性基因型別的L片段作為模板,進行實時熒光定量RT-PCR方法的建立,確定所建立方法的檢測限及靈敏度并對采集的112份鼠肺進行快速檢測。結(jié)果 5種模板RNA的Ct值與其稀釋濃度的對數(shù)存在良好的線性關(guān)系,以HTNV為例建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線為:y=-3.40x+46.8,R2=0.99,其最低檢出限為5.32 copies/μl,對于不同基因型別的漢坦病毒,其檢測最低限:HTNV為12.40 copies/μl、SEOV為5.32 copies/μl、PUUV為15.02 copies/μl、DOBV為22.14 copies/μl及SNV為24.26 copies/μl。對112份鼠肺樣本的病毒檢出率為17.86%,較巢式RT-PCR的檢出率(8.04%)高。結(jié)論建立的通用型實時熒光定量RT-PCR方法靈敏度高,檢測的廣譜性好,適合嚙齒類動物中攜帶的漢坦病毒的快速檢測。
[Abstract]:Objective to establish a universal real-time quantitative RT-PCR method for the detection of Hantavirus with different genotypes.Methods the primers and probes were designed by Beacon Designer7.5 software, and the L fragments of five representative genotypes of Hantavirus were used as template to establish a real-time fluorescence quantitative RT-PCR method.The detection limit and sensitivity of the established method were determined and rapid detection of 112 rat lungs was carried out.Results there was a good linear relationship between the Ct value of RNA and the logarithm of dilution concentration of the five templates. The standard curve of HTNV was established as follows: yyyang-3.40x 46.8R2O0.99.The lowest detection limit was 5.32 copies/ 渭 l, and the lowest detection limit was 5.32 copies/ 渭 l for different Hantavirus genotypes.The lowest detection limit was 12.40 copies/ / 渭 L SEOV, 5.32 copies/ / 渭 L PUUV, 15.02 copies/ / 渭 l-1 DOBV, 22.14 copies/ 渭 l and 24.26 copies/ 渭 l, respectively.The detection rate of virus in 112 lung samples of mice was 17.86, which was higher than that of nested RT-PCR.Conclusion the universal real-time fluorescent quantitative RT-PCR method has high sensitivity and good broad-spectrum detection. It is suitable for rapid detection of Hantavirus in rodents.
【作者單位】： 淮安市疾病預(yù)防控制中心;中國檢驗檢疫科學(xué)研究院衛(wèi)檢所;
【基金】：國家質(zhì)檢總局科技計劃項目(2011IK150) 淮安市預(yù)防醫(yī)學(xué)會科研基金(hayf201516)
【分類號】：R440;R511

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本文編號：1754447