本文選題：耐碳青霉烯類腸桿菌　切入點(diǎn)：KPC　出處：《大連醫(yī)科大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：目的:由于臨床上抗生素的不合理使用,使得耐碳青霉烯腸桿菌逐年增多。研究我院耐碳青霉烯類腸桿菌科細(xì)菌的耐藥機(jī)理,以及基因分型,進(jìn)行分子流行病學(xué)調(diào)查,為我院預(yù)防和控制耐碳青霉烯類腸桿菌的感染和暴發(fā)流行及指導(dǎo)臨床合理用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:篩選2011年1月到2014年11月大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院,對(duì)亞胺培南、美羅培南、厄他培南耐藥的97株腸桿菌科菌株(即耐碳青霉烯腸桿菌CRE)。用西門子Microscan Walkway96SI全自動(dòng)藥敏檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)菌鑒定,常規(guī)藥敏檢測(cè),對(duì)初篩的產(chǎn)碳青霉烯酶菌株進(jìn)行改良Hodge實(shí)驗(yàn);提取細(xì)菌基因組DNA,PCR擴(kuò)增碳青霉烯酶基因(KPC、VIM、IMP、GES、OXA-48等);對(duì)整合子、ISCR1耐藥元件及其攜帶的可變區(qū)耐藥基因、復(fù)雜性整合子進(jìn)行檢測(cè),PCR陽(yáng)性產(chǎn)物測(cè)序(可變區(qū)陽(yáng)性產(chǎn)物先用限制性內(nèi)切酶Hinf I酶切,選取不同類型的酶切圖譜的產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序),從而了解我院CRE整合子、ISCR1攜帶耐藥基因的類型及分布特征;對(duì)臨床分離的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌、大腸埃希菌,建立ERIC-PCR基因分型方法,進(jìn)行分子流行病學(xué)研究,為臨床控制細(xì)菌感染及院感監(jiān)測(cè)提供指導(dǎo)依據(jù)。結(jié)果:1.97株耐碳青霉烯類腸桿菌中,包括69株肺炎克雷伯菌,20株大腸埃希菌,3株產(chǎn)酸克雷伯菌,2株奇異變形桿菌,1株產(chǎn)氣腸桿菌,1株枸櫞酸桿菌,1株聚團(tuán)桿菌。2.39株細(xì)菌改良Hodge實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性。3.碳青霉烯酶基因擴(kuò)增結(jié)果顯示:32株細(xì)菌KPC基因陽(yáng)性、陽(yáng)性率為33%;21株細(xì)菌VIM基因陽(yáng)性、陽(yáng)性率為21.6%;9株細(xì)菌IMP基因陽(yáng)性,陽(yáng)性率為9.3%。GES、OXA-48基因均為陰性。4.97株CRE中,62株細(xì)菌Int I陽(yáng)性,陽(yáng)性率為63.9%;46株Int I可變區(qū)陽(yáng)性, 陽(yáng)性率為74.2%;int I可變區(qū)攜帶的耐藥基因盒組合方式有5種:32株攜帶aad A1,2株攜帶dfr A15,6株aac6+arr3+drf27+aad A16,2株aac6,4株aad A2+aad B。5.56株細(xì)菌orf513陽(yáng)性,陽(yáng)性率為57.7%。其中16株ISCR攜帶的耐藥基因陽(yáng)性,陽(yáng)性率為28.6%,ISCR可變區(qū)攜帶的耐藥基因盒的組成方式為三種:2株肺炎克雷伯菌攜帶ISCR+qnr B6+qac E1+sul I,4株肺炎克雷伯菌攜帶ISCR+qnr A1+qac E1+sul I,其余10株攜帶ISCR+qnr B2+qac E1+sul I,包括7株肺炎克雷伯菌,一株大腸埃希菌,一株枸櫞酸桿菌,一株產(chǎn)酸克雷伯菌。6.同時(shí)攜帶整合子和ISCR的18株細(xì)菌中,有三株肺炎克雷伯菌既攜帶整合子可變區(qū)又含有ISCR可變區(qū),耐藥基因組合方式為:int I+aad A1+qac E1+sul I+ISCR+qnr B2+qac E1+sul I。7.ERIC結(jié)果表示:耐碳青霉烯類肺炎克雷伯菌存在7個(gè)基因型在重癥ICU和急診科主要存在2種基因型,耐碳青霉烯酶大腸埃希菌存在8個(gè)基因型,均散在分布在臨床各個(gè)科室。結(jié)論:1.本研究中產(chǎn)碳青霉烯酶菌株主要為肺炎克雷伯菌和大腸埃希菌,碳青霉烯酶基因主要為KPC型和VIM型。2.本研究中整合子主要介導(dǎo)對(duì)氨基糖苷類抗生素的耐藥;ISCR主要介導(dǎo)喹諾酮類抗生素的耐藥;復(fù)雜性整合子介導(dǎo)多重耐藥。本研究中耐碳青霉烯類腸桿菌整合子、ISCR耐藥元件陽(yáng)性的菌株,并沒(méi)有攜帶碳青霉烯酶基因。3.本研究中耐碳青霉烯類腸桿菌科細(xì)菌主要分布在重癥醫(yī)學(xué)科和急診科,以耐碳青霉烯酶的肺炎克雷伯桿菌為局部流行爆發(fā)趨勢(shì)。
[Abstract]:Objective: the clinical antibiotics, the carbapenem resistant Enterobacteriaceae increased year by year. The mechanism of carbapenem resistance in Enterobacteriaceae bacteria in our institute, and genotype, molecular epidemiology, and provide experimental basis for the prevention and control of carbapenem resistant Enterobacteriaceae the infection and outbreak and to guide clinical rational drug use. Methods: screening of the first Affiliated Hospital of Dalian Medical University from January 2011 to November 2014, to imipenem, meropenem, 97 strains of Enterobacteriaceae strains resistant to ertapenem (i.e. carbapenem resistant Enterobacteriaceae CRE). The bacteria were identified with the SIEMENS Microscan Walkway96SI automatic drug sensitive detection system, conventional drug susceptibility detection, modified Hodge experiment of carbapenemase Producing Strains Screening; bacterial genome DNA extracted from PCR carbapenemase genes were amplified by VIM (KPC, IMP, GES, OXA-48, etc. The integron, ISCR1); the resistance element and the variable region of drug resistance genes, complexity of integron were detected and sequenced PCR positive products (positive product of variable region first with restriction enzyme Hinf I digestion, product selection of different types of restriction maps were sequenced), so as to understand our CRE integron, ISCR1 carry the types and distribution characteristics of resistance genes; in clinical isolates of carbapenem resistant Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, established ERIC-PCR genotyping methods, molecular epidemiology, clinical control of bacterial infection and hospital infection monitoring provides guidance. Results: 1.97 strains of carbapenem resistant Enterobacteriaceae, including 69 strains of Klebsiella pneumoniae, 20 strains of Escherichia coli, 3 strains of Klebsiella oxytoca, 2 strains of Proteus mirabilis, 1 strains of Enterobacter aerogenes, 1 strains of Citrobacter strains, 1 strains of bacteria Bacillus.2.39 clusters modified Hodge test positive carbon.3. Carbapenem enzyme gene amplification results showed that 32 strains of bacteria KPC gene positive, the positive rate was 33%; 21 strains of bacteria VIM gene positive, the positive rate was 21.6%; 9 strains of bacteria IMP gene positive, the positive rate of 9.3%.GES and OXA-48 genes were negative.4.97 strains CRE, 62 strains of bacteria Int I positive, positive rate 63.9%; 46 strains of Int I variable region of positive, the positive rate was 74.2%; there are 5 kinds of resistance gene cassettes combinations with int I variable region: 32 strains carrying aad A1,2 strains carrying DFR aac6,4 strains of A15,6 strain aac6+arr3+drf27+aad A16,2 aad A2+aad B.5.56 bacterial strains were orf513 positive, the positive rate of 57.7%. among 16 strains of ISCR resistant gene carry a positive, positive rate was 28.6%. The composition of resistance gene cassette carrying the ISCR variable region into three kinds: 2 strains of Klebsiella pneumoniae carrying ISCR+qnr B6+qac E1+sul I, 4 Klebsiella pneumoniae strains carrying ISCR+qnr A1+qac E1+sul I, the remaining 10 strains carrying ISCR+qnr B2+qa C E1+sul I, including 7 strains of Klebsiella pneumoniae, a strain of Escherichia coli, a strain of Citrobacter, a strain of Klebsiella oxytoca.6. carrying integron and ISCR 18 strains of bacteria, three strains of Klebsiella pneumoniae carry integron variable region and a ISCR variable area resistance genes: int I+aad A1+qac combination E1+sul I+ISCR+qnr B2+qac E1+sul I.7.ERIC said: the results of carbapenem resistant Klebsiella pneumoniae are 7 genotypes in severe ICU and emergency department, there are 2 main genotypes of carbapenem resistant Escherichia coli in 8 genotypes were scattered in the distribution of the various clinical departments. Conclusion: 1. middle carbapenemase strains were mainly Klebsiella pneumoniae and Escherichia coli, carbapenemase genes were mainly KPC type and VIM type.2. integron in this study mainly mediated resistance to aminoglycoside antibiotics; ISCR mediated The resistance of quinolone antibiotics; complexity of integron Mediated Multidrug resistance. The study of carbapenem resistant Enterobacteriaceae strains resistant to ISCR integron positive elements, did not carry carbapenemase gene.3. in the study of carbapenem resistant Enterobacteriaceae bacteria mainly distributed in ICU and emergency department of the local epidemic outbreak trend to carbapenem resistant Klebsiella pneumoniae.

【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R446.5

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本文編號(hào)：1723773