本文選題：多重?cái)?shù)字PCR　切入點(diǎn)：血漿游離DNA　出處：《復(fù)旦學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)》2016年06期

【摘要】：目的建立多重?cái)?shù)字PCR體系檢測(cè)血漿細(xì)胞游離DNA(cell-free DNA,cfDNA)中KRAS第2外顯子12、13密碼子的7種突變。方法構(gòu)建7種KRAS突變型質(zhì)粒用以建立多重?cái)?shù)字PCR檢測(cè)體系,以靈敏度、特異度和動(dòng)態(tài)范圍為主要參數(shù)評(píng)估體系的性能。利用該體系檢測(cè)15例手術(shù)可切除的胰腺導(dǎo)管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)患者血漿cfDNA中KRAS第2外顯子12、13密碼子突變情況,并與ARMs的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比對(duì)。結(jié)果自建的多重?cái)?shù)字PCR在0.01%~10%的動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)線性良好。兩個(gè)檢測(cè)體系的靈敏度分別可達(dá)到0.025%和0.043%。15名PDAC患者組織中KRAS突變的陽性率達(dá)到100%。數(shù)字PCR檢測(cè)血漿cfDNA所得的結(jié)果與組織結(jié)果的匹配率達(dá)到40%,ARMs檢測(cè)組織和血漿cfDNA結(jié)果的匹配率為20%。15例樣本中使用多重?cái)?shù)字PCR檢測(cè)到血漿cfDNA的最低豐度達(dá)到0.09%。結(jié)論多重?cái)?shù)字PCR具備高靈敏度和特異性,可用于準(zhǔn)確定量外周血cfDNA中KRAS相關(guān)突變的水平。
[Abstract]:Objective to establish a multiplex digital PCR system for the detection of 7 mutations in codon 12 of KRAS exon 2 in plasma cell free DNA(cell-free DNA. Methods Seven KRAS mutants were constructed to establish a multiplex digital PCR detection system. Specificity and dynamic range were the main parameters to evaluate the performance of the system. The mutation of codon 1213 in exon 2 of KRAS in plasma of 15 patients with resectable pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) was detected. The results were compared with the results of ARMs. Results the linear range of the self-made multiplex digital PCR was 0.0110%. The sensitivity of the two detection systems could reach 0.025% and 0.043%, respectively. The positive rate of KRAS mutation in the tissues of 15 PDAC patients was up to 0.043%. The matching rate between the results of digital PCR detection of plasma cfDNA and tissue results was 40. The matching rate of tissue and plasma cfDNA results was 20. 15 samples. The lowest abundance of plasma cfDNA detected by multi digital PCR was 0. 09%. Conclusion\\\; Heavy digital PCR has high sensitivity and specificity. It can be used to accurately quantify the level of KRAS related mutations in peripheral blood cfDNA.
【作者單位】： 復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院檢驗(yàn)科;復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院普外科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(81572064) 上海市衛(wèi)生計(jì)生系統(tǒng)重要薄弱學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目(2015ZB0201)~~
【分類號(hào)】：R440

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本文編號(hào)：1664829