本文關鍵詞： 比較蛋白質(zhì)組學 肺炎支原體 大環(huán)內(nèi)酯類 耐藥　出處：《中國人民解放軍醫(yī)學院》2015年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的肺炎支原體(Mp)是社區(qū)獲得性肺炎(CAP)最常見致病原之一,目前世界范圍內(nèi)Mp對大環(huán)內(nèi)酯類藥物的耐藥形勢日趨嚴峻,但對其耐藥機制的深入研究還很少,多數(shù)研究只是針對基因水平上藥物結(jié)合位點的突變檢測以及流行病學方面的調(diào)查。本研究擬從蛋白質(zhì)水平探討Mp對大環(huán)內(nèi)酯類的耐藥機制,以期能鑒定注釋新的耐藥相關蛋白,并探討其相關的基因調(diào)控網(wǎng)絡。方法對Mp臨床分離株進行大環(huán)內(nèi)酯類的藥物敏感性測定。應用基于液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)的iTRAQ定量蛋白質(zhì)組組學技術(shù),對高MIC的臨床耐藥株和敏感株進行高通量蛋白質(zhì)測序及鑒定。運用比較蛋白質(zhì)組學原理,以敏感株為對照,找出2株臨床耐藥株共有的差異蛋白。再對這些差異蛋白進行包括GO、COG、KEGG、富集分析等的生物信息學分析,然后在大樣本的Mp菌株中,對目標差異蛋白進行RT-PCR驗證,最終確定可能與耐藥相關的潛在蛋白。結(jié)果本研究共鑒定出蛋白496種。敏感株FH和耐藥株S20比較差異表達蛋白為10種；敏感株FH和耐藥株S56比較差異表達蛋白有18種。這兩個比較組共有的差異蛋白為7種,且這7種蛋白無一出現(xiàn)在S20和S56比較組的差異蛋白中。通過生物信息學分析,確定了這些蛋白的分子功能和參與的代謝調(diào)控網(wǎng)絡,并進行富集分析,但未發(fā)現(xiàn)這7種差異蛋白與其他的大環(huán)內(nèi)酯類耐藥機制相關。對上述菌體差異蛋白,在53株Mp樣本中進行RT-PCR驗證,發(fā)現(xiàn)差異蛋白MPN480、MPN277的編碼基因在紅霉素耐藥菌株中的表達量較敏感株組同樣顯著上調(diào)。結(jié)論MPN480、MPN277可以作為蛋白質(zhì)水平上潛在的Mp耐藥分子標識,但尚需在更大的樣本中進一步驗證。本研究首次利用蛋白質(zhì)組學方法研究Mp耐藥機制,為耐大環(huán)內(nèi)酯類Mp的機制研究開辟新的領域。
[Abstract]:Objective Mycoplasma pneumoniae (MP) is one of the most common pathogens of community-acquired pneumonia (CPAP). At present, the drug resistance of MP to macrolides is becoming more and more serious, but the mechanism of drug resistance is seldom studied. Most studies have focused on mutation detection and epidemiological investigation of drug binding sites at the gene level. This study is intended to explore the mechanism of MP resistance to macrolides at the protein level in order to identify and annotate new drug-resistance related proteins. Methods the drug sensitivity of macrolides in clinical isolates of MP was determined. ITRAQ quantitative proteomics technique based on liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS / MS) was used. The high throughput protein sequencing and identification of clinical resistant and sensitive strains with high MIC were carried out. Using the principle of comparative proteomics, the sensitive strains were used as control. The differential proteins shared by two clinical resistant strains were identified. The differential proteins were analyzed by bioinformatics, including gocog, KEGG, enrichment analysis, and then the target differential proteins were tested by RT-PCR in a large sample of MP strains. Results in this study, 496 proteins were identified, and 10 differentially expressed proteins were identified between FH and S20. There were 18 differentially expressed proteins in FH and S56. There were 7 differentially expressed proteins in these two groups, and none of them appeared in the differential proteins of S20 and S56. The molecular function and metabolic regulatory network of these proteins were determined, and the enrichment analysis was carried out. However, the seven differential proteins were not found to be related to other macrolide resistance mechanisms. The expression of MPN480- MPN277 was also significantly up-regulated in erythromycin resistant strains by RT-PCR validation in 53 strains of MP. Conclusion MPN480- MPN277 can be used as a potential molecular marker of MP resistance at protein level. In this study, proteomics was used to study the mechanism of MP resistance for the first time, which opened up a new field for the study of the mechanism of macrolide resistance.
【學位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R446.5

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本文編號：1532206