本文關(guān)鍵詞： 超快速液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜 尿液 氯胺酮 去甲氯胺酮 消除規(guī)律 駕駛相關(guān)心理　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：(1)采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(UFLC-MS/MS)法測定人尿液中氯胺酮及其代謝產(chǎn)物去甲氯胺酮的濃度建立簡單快速、科學(xué)有效、特異性好、準(zhǔn)確度高、穩(wěn)定性好的UFLC-MS/MS法同時測定人尿液中氯胺酮及其代謝產(chǎn)物去甲氯胺酮的濃度,建立氯胺酮濫用人群戒斷過程中尿液氯胺酮、去甲氯胺酮的平均濃度-時間曲線模型,求出曲線模型方程并研究其在體內(nèi)的消除規(guī)律。(2)采用PsyTech心理實驗系統(tǒng)研究氯胺酮濫用對駕駛相關(guān)心理的影響建立完善的心理實驗以測試氯胺酮濫用人群和非藥物濫用人群反應(yīng)時、速度知覺和注意集中性等駕駛相關(guān)心理,以研究吸食氯胺酮后對駕駛相關(guān)心理的影響；結(jié)合氯胺酮濫用人群戒斷過程中尿液氯胺酮、去甲氯胺酮的濃度變化特點,以研究氯胺酮、去甲氯胺酮濃度變化對駕駛相關(guān)心理的影響。方法：(1)測定人尿液中氯胺酮及其代謝產(chǎn)物去甲氯胺酮濃度：①尿液樣品處理方法：向1mL待測尿液中分別加入100μl氯胺酮內(nèi)標(biāo)工作液(100.0ng/mL KET-D4溶液),2mL0.01mol/L硼酸鈉緩沖液,3mL乙酸乙酯,渦旋30s混勻,離心15min (5000rpm),取上清置于試管中,氮氣吹干,100μl流動相(乙腈：0.1%甲酸+20mmol/L乙酸銨水溶液=75：25(v/v))溶解殘留物,渦旋30s混勻,取5μl進(jìn)樣分析。②質(zhì)譜分析：氯胺酮、去甲氯胺酮和KET-D4在正離子檢測方式下,采用ESI源,主要生成[M+H]+準(zhǔn)分子離子,分別為m/z238.20、m/z224.25和m/z242.30。選擇性對準(zhǔn)分子離子[M+H]+進(jìn)行產(chǎn)物離子掃描,獲得氯胺酮的主要碎片為m/z125.25和m/z207.25,去甲氯胺酮的主要碎片為m/z125.25和179.30,用于定性分析；其中m/z207.25和m/z179.30,響應(yīng)較強,作為多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)的定量離子,用于定量分析。KET-Dd的主要碎片離子為m/z129.25,將m/z129.25作為定量分析時的監(jiān)測離子。③色譜條件：預(yù)柱：RRLC在線過濾器(Agilent,Germany)；色譜柱：Shim-pack FC-ODS超快速色譜柱(150mm×2mm I.D.3um):流動相：乙腈：0.1%甲酸+20mmol/L乙酸銨水溶液=75：25(v/v)；流速：0.3mL/min:柱溫：40℃；進(jìn)樣量：5μl。④實驗對象的選擇及樣品采集：本課題的實驗對象為廣州某自愿戒毒機(jī)構(gòu)的22名氯胺酮濫用個體,入院時簽署知情同意書并填寫《氯胺酮自評量表》�；颊邚娜朐浩鹬脸鲈�,每日清晨九時由其管床護(hù)士負(fù)責(zé)收集其尿中段尿液10mL于50mL離心管中,嚴(yán)格控制尿液采集時間,尿液采集后置于-20℃冰箱保存。⑤尿液樣品分析：未知尿液樣品的測定按“尿液樣品處理方法”項下操作,每天建立一條標(biāo)準(zhǔn)曲線,同時分析質(zhì)控樣品,并以同批的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各時點樣品中氯胺酮、去甲氯胺酮和質(zhì)控樣品的濃度,由質(zhì)控樣品的結(jié)果決定當(dāng)日數(shù)據(jù)的取舍,質(zhì)控樣品的相對偏差應(yīng)在±15%范圍內(nèi)。⑥數(shù)據(jù)處理：將采集同一住院天數(shù)、不同氯胺酮濫用個體的尿液樣本濃度數(shù)據(jù)的平均值與住院天數(shù)列表并作圖,通過SPSSl7.0統(tǒng)計分析軟件分別對其尿液中的氯胺酮、去甲氯胺酮平均濃度與時點進(jìn)行曲線擬合,并建立尿液中氯胺酮、去甲氯胺酮的平均濃度-時間曲線模型,求出曲線模型方程。(2)氯胺酮濫用對駕駛相關(guān)心理的影響：①實驗對象選擇及心理測試：以氯胺酮濫用人群作實驗組,非藥物濫用人群作對照組；對實驗組對象從入院起至出院每日清晨十時的反應(yīng)時、速度知覺和注意集中性等駕駛相關(guān)心理進(jìn)行測試并收集數(shù)據(jù),于同一時段采集并收集對照組對象的相關(guān)數(shù)據(jù)信息。②實驗內(nèi)容：包括對實驗組和對照組的反應(yīng)時、速度知覺和注意集中性等心理指標(biāo)進(jìn)行測試以及數(shù)據(jù)收集。其中反應(yīng)時包括：簡單反應(yīng)時(視覺簡單反應(yīng)時和聽覺簡單反應(yīng)時)、選擇反應(yīng)時(視覺選擇反應(yīng)時和聽覺選擇反應(yīng)時)、視覺反應(yīng)時(腳)和聽覺反應(yīng)時(腳)等。③心理測試方法：通過PsyTech-EP2009型心理實驗平臺進(jìn)行本次實驗。對實驗員進(jìn)行PsyTech-EP2009型心理實驗平臺操作培訓(xùn),并采用面對面的形式對實驗組和對照組對象進(jìn)行相關(guān)心理指標(biāo)測試。④簡單反應(yīng)時測試：視覺簡單反應(yīng)時：以“紅色”實心圓作為實驗材料,實驗對象使用2號反應(yīng)盒,紅色按鍵為反應(yīng)鍵,當(dāng)電腦屏幕上出現(xiàn)紅色圓時,立即做出反應(yīng)按下反應(yīng)鍵,每10次為一組,測試兩組。聽覺簡單反應(yīng)時：以“750Hz(中音)”純音作為實驗材料,實驗對象使用1號反應(yīng)盒,紅色按鍵為反應(yīng)鍵,當(dāng)聽到聲音時,立即做出反應(yīng)按下反應(yīng)鍵,每10次為一組,測試兩組。⑤選擇反應(yīng)時測試：視覺選擇反應(yīng)時：以紅、黃、綠和藍(lán)色四種顏色實心圓作為實驗材料,實驗時隨機(jī)呈現(xiàn),實驗對象使用2號反應(yīng)盒,根據(jù)屏幕呈現(xiàn)的不同顏色,按相對應(yīng)的顏色鍵,重復(fù)測試20次。聽覺選擇反應(yīng)時：以三種不同頻率的純音(高音：2000Hz、中音：750Hz和低音：350Hz)作為實驗材料,實驗時隨機(jī)呈現(xiàn),實驗對象使用1號反應(yīng)盒,根據(jù)聽到的聲音高低,按相應(yīng)的反應(yīng)鍵,重復(fù)測試30次。其中高音按“+”號鍵、低音按“一”號鍵、中音按“=”號鍵。⑥視覺反應(yīng)時(腳)測試：視覺反應(yīng)時(腳)測試通過實驗光反應(yīng)(腳)完成。以“紅色”實心圓作為實驗材料,實驗對象使用腳踏板,在紅色圓出現(xiàn)時盡快踩腳踏板,重復(fù)測試10次。⑦聽覺選擇反應(yīng)時(腳)測試：聽覺反應(yīng)時(腳)測試通過實驗聲反應(yīng)(腳)完成。以“750Hz(中音)”純音作為實驗材料,實驗對象使用腳踏板,在聽到聲音時盡快踩腳踏板,重復(fù)測試10次。⑧速度知覺測試：速度知覺測試通常以絕對誤差|x-s|來表示。實驗對象估計以2單位/秒速度運動(s=3906ms)的紅色亮點到達(dá)終點的時間,按1號反應(yīng)盒上的任意鍵作出反應(yīng)后,看到其判斷的誤差距離,可在下一次操作中調(diào)整自己的估計時間,重復(fù)測試20次。⑨注意集中性測試：注意集中性測試,通過劃消實驗完成,通常以工作效率(E)來表示。本實驗記錄實驗對象兩分鐘內(nèi)檢查由字母構(gòu)成的工作表中字母總數(shù)、劃消字母“B”的數(shù)目、錯劃字母“B”的數(shù)目和漏劃字母“B”的數(shù)目。⑩分析方法：對實驗組、對照組整體比較采用兩因素重復(fù)測量方差分析；實驗組、對照組組間比較采用單因素方差分析；實驗組、對照組組內(nèi)比較采用單因素重復(fù)測量方差分析和配對t檢驗；將同一住院天數(shù)、不同氯胺酮濫用個體的尿液樣本濃度數(shù)據(jù)的平均值分別與各項心理指標(biāo)作圖,然后通過SPSS17.0統(tǒng)計分析軟件分別對其尿液中的氯胺酮、去甲氯胺酮平均濃度與各項心理指標(biāo)進(jìn)行曲線擬合,并建立尿液中氯胺酮、去甲氯胺酮的濃度-心理指標(biāo)曲線模型,求出曲線模型方程。結(jié)果：(1)測定人尿液中氯胺酮及其代謝產(chǎn)物去甲氯胺酮濃度：氯胺酮、去甲氯胺酮的線性范圍均為0.1～1000.0ng/*mL,檢出限均為0.05ng/mL,定量下限均為0.1ng/mL.10.0ng/mL和500.0ng/mL樣品濃度下,氯胺酮日內(nèi)精密度分別是3.715%和1.457%,日間精密度分別是4.873%和1.813%,回收率在98.071%～100.197%范圍內(nèi),基質(zhì)干擾在-2.425%～-0.437%之間；去甲氯胺酮日內(nèi)精密度分別是4.041%和0.787%,日間精密度分別是4.749%和1.788%,回收率在98.419%～102.873%范圍內(nèi),基質(zhì)干擾在-3.322%～-2.276%之間。尿液中氯胺酮平均濃度-時間曲線模型方程為：y1=2331.899(x1-2.247),式中：y1為尿液中氯胺酮濃度,單位為ng/mL；x1為其戒斷天數(shù),單位為天(d)；尿液中去甲氯胺酮平均濃度-時間曲線模型方程為：y2=2812.051(x2-1938),式中：y2為尿液中去甲氯胺酮濃度,單位為ng/mL；x2為其戒斷天數(shù),單位為天(d)。氯胺酮、去甲氯胺酮濃度與時間成反比。9天后氯胺酮被完全清除,13天后去甲氯胺酮被完全清除。(2)氯胺酮濫用對駕駛相關(guān)心理的影響：實驗組、對照組間的視覺簡單反應(yīng)時、聽覺簡單反應(yīng)時、視覺選擇反應(yīng)時、聽覺選擇反應(yīng)時、視覺反應(yīng)時(腳)、聽覺反應(yīng)時(腳)、絕對誤差和工作效率差異均有統(tǒng)計學(xué)意義,且除工作效率隨時間的延長呈下降趨勢外,其余指標(biāo)均隨時間的延長而上升；實驗組間不同時點的各項指標(biāo)差異均有統(tǒng)計學(xué)意義,對照組間不同時點的各項指標(biāo)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義；進(jìn)行測試后的各時點處,實驗組對照組間的各項指標(biāo)差異均有統(tǒng)計學(xué)意義,且實驗組除工作效率比對照組低外,其余指標(biāo)均高于對照組。尿液中氯胺酮、去甲氯胺酮的濃度-視覺簡單反應(yīng)時曲線模型方程為：y1=222.505+44.303lnx1、y2=143.880+55.6961nx2,尿液中氯胺酮、去甲氯胺酮的濃度-聽覺簡單反應(yīng)時曲線模型方程為：y3=764.548-2444.982/x3、y4=772.264-6358.084/x4,尿液中氯胺酮、去甲氯胺酮的濃度-視覺選擇反應(yīng)時曲線模型方程為：y5=309.482+64.910lnx5、y6=196.339+81.0071nx6,尿液中氯胺酮、去甲氯胺酮的濃度-聽覺選擇反應(yīng)時曲線模型方程為：y7=784.455-1670.499/x7、y8=787.830-4272.416/x8,尿液中氯胺酮、去甲氯胺酮的濃度-視覺反應(yīng)時(腳)曲線模型方程為：y9=347.973+17.4261nx9、ylo=317.675+21.7291nx1o,尿液中氯胺酮、去甲氯胺酮的濃度-聽覺反應(yīng)時(腳)曲線模型方程為：y11=320.435+32.8341nx11、y12=265.521+40.4291nx12,尿液中氯胺酮、去甲氯胺酮的濃度-絕對誤差曲線模型方程為：y13：e6.117-3104/x13、y14=e6114-7.578/x14,尿液中氯胺酮、去甲氯胺酮的濃度-工作效率曲線模型方程為：y15=691.228x15-0.107、y16=819.450x16-0.129,式中：Y1-Y14,分別為氯胺酮濫用人群視覺簡單反應(yīng)時、聽覺簡單反應(yīng)時、視覺選擇反應(yīng)時、聽覺選擇反應(yīng)時、視覺反應(yīng)時(腳)、聽覺反應(yīng)時(腳)、絕對誤差,單位均為ms, y15、y16為氯胺酮濫用人群的工作效率；X1、X3、X5、X7、X9、X11、X13、X15為尿液中氯胺酮濃度,單位為ng/mL, X2、4、 X6、X8、X10、X12、X14、X16為尿液中去甲氯胺酮濃度,單位為ng/mL。由擬合曲線可知,視覺簡單反應(yīng)時恢復(fù)至正常范圍時尿液中氯胺酮最高濃度為4.752ng/mL,去甲氯胺酮最高濃度為14.191ng/mL,需戒斷16d視覺簡單反應(yīng)時才可恢復(fù)正常；聽覺簡單反應(yīng)時恢復(fù)至正常范圍時尿液中氯胺酮最高濃度為6.640ng/mL,去甲氯胺酮最高濃度為16.911 ng/mL,需戒斷14d聽覺簡單反應(yīng)時才可恢復(fù)正常；視覺選擇反應(yīng)時恢復(fù)至正常范圍時尿液中氯胺酮最高濃度為34.444ng/mL,去甲氯胺酮最高濃度為68.905ng/mL,需戒斷7d視覺選擇反應(yīng)時才可恢復(fù)正常；聽覺選擇反應(yīng)時恢復(fù)至正常范圍時尿液中氯胺酮最高濃度為7.908ng/mL,去甲氯胺酮最高濃度為19.907ng/mL,需戒斷13d聽覺選擇反應(yīng)時才可恢復(fù)止常；視覺反應(yīng)時(腳)恢復(fù)至正常范圍時尿液中氯胺酮最高濃度為5.654ng/mL,去甲氯胺酮最高濃度為16.177ng/mL,需戒斷15d視覺反應(yīng)時(腳)才可恢復(fù)正常；聽覺反應(yīng)時(腳)恢復(fù)至正常范圍時尿液中氯胺酮最高濃度為10.166ng/mL,去甲氯胺酮最高濃度為25.577ng/mL時,需戒斷11d聽覺反應(yīng)時(腳)才可恢復(fù)正常；速度知覺絕對誤差恢復(fù)至正常范圍時尿液中氯胺酮最高濃度為7.338ng/mL,去甲氯胺酮最高濃度為18.041ng/mL,需戒斷14d速度判斷的準(zhǔn)確性才可恢復(fù)正常;注意集中性恢復(fù)至正常范圍時尿液中氯胺酮最高濃度為5.096ng/mL、去甲氯胺酮最高濃度為14.438ng/mL,需戒斷15d注意集中性才可恢復(fù)正常。結(jié)論：本文利用UFLC-MS/MS技術(shù),建立了簡單快速、科學(xué)有效、特異性好、準(zhǔn)確度高,穩(wěn)定性好的UFLC-MS/MS法,用于測定尿液中氯胺酮及其代謝產(chǎn)物去甲氯胺酮的濃度,并成功將其應(yīng)用于尿液中氯胺酮、去甲氯胺酮消除規(guī)律的研究中；利用PsyTech心理實驗系統(tǒng),建立了完善的心理實驗以測試人群反應(yīng)時、速度知覺和注意集中性等駕駛相關(guān)心理,并成功運用于研究氯胺酮濫用對駕駛相關(guān)心理的影響。(1)運用UFLC-MS/MS法測定人尿液中氯胺酮及其代謝產(chǎn)物去甲氯胺酮的濃度成果顯著。首先,Shim-pack FC-ODS超快速色譜柱相對于普通色譜柱分離效能及分離速度更高,同時測定尿液中氯胺酮及其代謝產(chǎn)物去甲氯胺酮,每個樣品的測試時間僅需5min,樣品通量大大提高；其次,OMRM模式下能夠同步檢測母離子和具有特征反應(yīng)的字離子,母離子被碰撞,特定子離子被檢測,顯著降低了背景噪音,因而具有高度的特異性和準(zhǔn)確度,氯胺酮、去甲氯胺酮的定量下限均為0.10ng/mL;再者,選擇氯胺酮氘代物作內(nèi)標(biāo)物,增強定量檢測過程中的穩(wěn)定性。此外實驗中樣品前處理方法為液液萃取法,簡便、快捷、經(jīng)濟(jì),適用于高通量樣本的分析。結(jié)果顯示,氯胺酮濫用人群尿液中氯胺酮、去甲氯胺酮濃度與戒斷時間成反比,氯胺酮被清除以后尚有去甲氯胺酮殘留,故在進(jìn)行氯胺酮濫用檢測分析時,應(yīng)注重代謝物的檢測分析。(2)利用PsyTech-EP2009型心理實驗平臺對實驗組和對照組的視覺簡單反應(yīng)時、聽覺簡單反應(yīng)時、視覺選擇反應(yīng)時、聽覺選擇反應(yīng)時、視覺反應(yīng)時(腳)、聽覺反應(yīng)時(腳)、速度知覺和注意集中性等心理指標(biāo)進(jìn)行測試,已取得理想結(jié)果。首先對實驗員進(jìn)行培訓(xùn)、考核,確保實驗的質(zhì)量；其次采集數(shù)據(jù)前實驗員協(xié)助實驗對象進(jìn)行充分的練習(xí)實驗,實驗對象使用唯一用戶名登陸系統(tǒng),確保實驗數(shù)據(jù)的真是可靠。此外,反應(yīng)時、速度知覺和注意集中性等幾個心理指標(biāo),已被廣泛應(yīng)用于飲酒對駕駛心理影響等研究中。說明本方法的建立滿足實驗需求,并成功運用于氯胺酮濫用對駕駛相關(guān)心理影響的研究中。實驗結(jié)果顯示,當(dāng)人群吸食氯胺酮后,對光、聲等刺激做出反應(yīng)的時間變長,對速度感覺的準(zhǔn)確性變差,注意集中性水平變低,其氯胺酮濃度越高,效應(yīng)越強；有關(guān)研究表明,事故多發(fā)駕駛員的反應(yīng)時比安全駕駛員的長,速度估計平均絕對誤差比安全駕駛員的大,注意集中性比安全駕駛員的差。同時,結(jié)果還表明,氯胺酮未被完全清除時,視覺選擇反應(yīng)時可恢復(fù)正常；氯胺酮被完全清除,去甲氯胺酮未被完全清除時,聽覺反應(yīng)時(腳)可恢復(fù)正常；氯胺酮、去甲氯胺酮均被完全清除時,視覺簡單反應(yīng)時、聽覺簡單反應(yīng)時、聽覺選擇反應(yīng)時、視覺反應(yīng)時(腳)、速度判斷的準(zhǔn)確性和注意集中性均未恢復(fù)正常,依舊受到影響。綜上所述,駕駛員吸食氯胺酮后進(jìn)行駕駛機(jī)動車行為,更容易發(fā)生交通事故,且吸食量越多,發(fā)生交通事故的可能性越大；即便體內(nèi)氯胺酮、去甲氯胺酮被完全清除,3天內(nèi)駕駛依舊會受到影響。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R749.64

【參考文獻(xiàn)】

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1 劉偉麗;卞士中;顧振綸;蔣小崗;秦正紅;;氯胺酮成癮機(jī)制的研究進(jìn)展[J];法醫(yī)學(xué)雜志;2009年03期

2 解雅英;氯胺酮抗炎作用及機(jī)制的研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué).麻醉學(xué)與復(fù)蘇分冊;2003年04期

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本文編號：1527459