本文關(guān)鍵詞：快速檢測(cè)單增李斯特菌、登革病毒和西尼羅病毒的超順磁免疫層析技術(shù)研究　出處：《暨南大學(xué)》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：單增李斯特菌可引起人、畜的李氏特菌癥,感染后表現(xiàn)為免疫力低下、免疫缺陷、腦膜炎、敗血癥、孕婦流產(chǎn)或早產(chǎn)、內(nèi)臟器官感染膿腫及壞死。該菌以食物為傳播媒介,致死率高達(dá)30%~50%,是最致命的食源性致病菌之一。人類感染登革病毒和西尼羅病毒后在臨床上可引起以發(fā)熱、皮膚和黏膜出現(xiàn)淤點(diǎn)或淤斑、不同臟器的損害和出血以及低血壓、休克等為特征的綜合征,這兩種病毒均以蚊為傳播媒介,是常見的蟲媒病毒,感染蟲媒病毒對(duì)人類健康造成嚴(yán)重威脅。隨著快餐食品、生鮮食品消費(fèi)人群的不斷增加,單增李斯特菌感染引起的食品安全事件在美國、歐洲等地區(qū)不斷出現(xiàn);隨著以登革病毒、西尼羅病毒等為代表的蟲媒病毒疫源地的擴(kuò)大,這兩種病毒的感染已引起世界各國的廣泛關(guān)注。上述三種病原微生物引起的人和動(dòng)物疾病已經(jīng)成為全球性公共衛(wèi)生問題,加強(qiáng)對(duì)這些病原體的快速檢測(cè)具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。針對(duì)上述三種病原體建立早期、快速和準(zhǔn)確的檢測(cè)方法不僅對(duì)于及時(shí)控制患者病情、提高患者生存機(jī)率起著重要作用,同時(shí)對(duì)于口岸衛(wèi)生檢疫機(jī)構(gòu)及時(shí)監(jiān)測(cè)污染源、甄別和隔離病人、嚴(yán)防污染食品或疫情傳入國內(nèi)至關(guān)重要。近年來隨著納米技術(shù)、免疫標(biāo)記技術(shù)和側(cè)向?qū)游黾夹g(shù)的發(fā)展,一種綜合了納米超順磁技術(shù)、免疫層析技術(shù)以及磁力定量測(cè)定技術(shù)的新型免疫檢測(cè)方法--超順磁免疫層析技術(shù)問世,以其高靈敏、定量化、重復(fù)性強(qiáng)、線性范圍寬等特點(diǎn)日益受到關(guān)注。本研究旨在建立超順磁免疫層析技術(shù),研制單增李斯特菌超順磁免疫層析快速檢測(cè)卡以及同時(shí)檢測(cè)登革病毒和西尼羅病毒的超順磁免疫層析聯(lián)合檢測(cè)卡。本研究首先研制了單增李斯特菌的超順磁免疫層析快速檢測(cè)卡。通過對(duì)12種單增李斯特菌抗體噴膜及超順磁微球標(biāo)記配對(duì),篩選出1對(duì)能用于檢測(cè)單增李斯特菌的抗體對(duì);通過建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,確定了單增李斯特菌超順磁免疫層析卡的檢測(cè)靈敏度約為104CFU/m L,線性范圍為104~108CFU/m L;特異性檢測(cè)發(fā)現(xiàn)該檢測(cè)卡特異性較好,雖然與部分非致病李斯特菌屬的綿陽李斯特菌(L.ivanovii)和西爾李斯特菌(L.seeligeri)存在交叉反應(yīng),但仍具有很高的特異性;在73份不同來源的食品樣品檢測(cè)中,超順磁免疫層析法和熒光PCR法的檢測(cè)結(jié)果100%匹配。第二部分研制了可同時(shí)檢測(cè)登革病毒和西尼羅病毒的超順磁免疫層析聯(lián)合檢測(cè)卡。通過對(duì)8種登革病毒抗體、4種西尼羅病毒抗體噴膜和超順磁微球標(biāo)記配對(duì),分別篩選出1對(duì)能用于檢測(cè)登革病毒和用于檢測(cè)西尼羅病毒的抗體對(duì);通過建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,確定了檢測(cè)登革病毒的靈敏度為10ng/m L,線性范圍為10ng/m L~10000ng/m L,檢測(cè)西尼羅病毒的靈敏度為100ng/m L,線性范圍為100ng/m L~10000ng/m L;特異性檢測(cè)發(fā)現(xiàn)聯(lián)合檢測(cè)卡檢測(cè)登革病毒和西尼羅病毒時(shí)相互之間具有部分交叉反應(yīng),檢測(cè)黃熱病毒和乙型腦炎病毒時(shí)沒有交叉反應(yīng);通過對(duì)100份口岸送檢實(shí)際樣品檢測(cè)(其中25份登革病毒核酸陽性樣品,75份陰性樣品),發(fā)現(xiàn)聯(lián)合檢測(cè)卡檢測(cè)登革病毒的準(zhǔn)確率為80.0%,假陽性率29.3%,檢測(cè)西尼羅病毒的假陽性率為89.9%。本研究成功建立了針對(duì)單增李斯特菌、登革病毒和西尼羅病毒快速檢測(cè)的超順磁免疫層析法,該方法的靈敏度和線性范圍均優(yōu)于常規(guī)免疫層析法;檢測(cè)單增李斯特菌特異性與熒光PCR法相當(dāng);操作簡(jiǎn)便,快速,是一種可靠的新型檢測(cè)方法。本研究成功篩選出的單增李斯特菌和登革病毒檢測(cè)抗體對(duì),均可作為診斷試劑開發(fā)所用配對(duì)抗體的技術(shù)儲(chǔ)備,針對(duì)單增李斯特菌和登革病毒檢測(cè)的超順磁免疫層析技術(shù)部分已獲得發(fā)明專利和實(shí)用新型專利保護(hù),有利于該技術(shù)方法進(jìn)一步向疾病預(yù)防部門、口岸檢驗(yàn)檢疫機(jī)構(gòu)、醫(yī)院等單位推廣應(yīng)用,提高這些病原體現(xiàn)場(chǎng)初篩的技術(shù)能力。
[Abstract]:Listeria bacteria can cause Lester, Lee special bacterium disease animal, after infection showed immunity, immunodeficiency, meningitis, septicemia, miscarriage or premature birth, viscera abscess and necrosis. The infection of bacteria in food for the media, death rate as high as 30%~50%, is one of the most deadly foodborne pathogens of human. Dengue virus infection and Siniro virus in clinic can cause fever, skin and mucosa petechia or ecchymosis, different organ damage and hemorrhage, hypotension, shock and other characteristics of the syndrome, the two viruses are mosquito borne arbovirus infection, is a common, serious threat to human arbovirus health. With the increasing of fast food, fresh food consumer groups, Lester Listeria bacteria infection caused by food safety incidents continue to occur in the United States, Europe and other regions; with dengue virus, Expand the Siniro virus as the representative of arbovirus foci, these two kinds of virus infection has caused widespread concern in the world. By the above three kinds of pathogens of human and animal diseases has become a global public health problem, has important practical significance to strengthen the rapid detection of these pathogens. Set up early for the above three kinds of pathogens rapid and accurate detection method, not only for the timely control of the disease, which plays an important role in improving the probability of survival, at the same time for the port health and quarantine agencies timely monitoring of pollution sources, screening and isolation of patients, to prevent contamination of food or epidemic spread to the home is very important. In recent years with the development of nanotechnology, immune markers and lateral tomography, a combination of superparamagnetic nano technology, immunochromatography quantitative determination technology and magnetic immune detection model Methods: the advent of superparamagnetic magnetic immunochromatographic technology, with its high sensitive, quantitative, reproducible, wide linear range has been paid more and more attention. The purpose of this study is to establish the super paramagnetic immunochromatography technology development of Listeria bacteria Lester superparamagnetic immunochromatographic detection card and simultaneous detection of dengue virus and Siniro virus the combined detection of superparamagnetic magnetic immunochromatography card. This study first developed Listeria bacteria Lester superparamagnetic immunochromatographic test card. The 12 Listeria bacteria Lester antibody spraying film and super paramagnetic microspheres labeled pairs, selected 1 pairs can be used to detect antibody of Listeria bacteria on Lester; through the establishment of standard curve, increasing the detection sensitivity of bacteria Lester superparamagnetic magnetic immunochromatography card is about 104CFU/m L is determined, the linear range of 104~108CFU/m L; specificity analysis revealed that the specific detection of Carter is better, although with some non pathogenic Mianyang Lester Lester bacteria disease fungus (L.ivanovii) and Sill List Rand (L.seeligeri) has cross reaction, but still has a very high specificity; in 73 different sources of food samples, the detection results of superparamagnetic immune chromatography and fluorescence PCR method 100% matches. The second part is developed to simultaneously detect board dengue virus and Siniro virus combined detection of superparamagnetic magnetic immunochromatography card. By 8 types of dengue virus antibody, 4 kinds of West Nile virus antibody spray membrane and superparamagnetic microspheres were screened 1 marker pairs, which can be used to the detection of dengue virus and for the detection of West Nile virus antibody; through the establishment of standard curve to determine the detection sensitivity to dengue virus 10ng/m L 10ng/m L~10000ng/m L, the linear range, sensitivity of detection of West Nile virus is 100ng/m L 100ng/m L~10000ng/m L, the linear range for specific detection; The combined detection card detection of dengue virus and Siniro virus partial cross reaction with each other, detection of yellow fever virus and Japanese encephalitis virus has no cross reaction of 100 port inspection; through the actual test samples (25 of which were dengue virus nucleic acid positive samples, 75 negative samples), we found that the accuracy of combined detection card detection dengue virus is 80%, false positive rate 29.3%, false positive rate of detection of West Nile virus for 89.9%. have been established in this study for Listeria List Rand, dengue virus and Siniro virus rapid detection of superparamagnetic immunochromatography, the sensitivity and linear range were higher than that of conventional immunochromatography; detection of Listeria List Randt with specific fluorescent PCR method is simple, fast,; is a new test for reliable. This study successfully screened Lester Listeria bacteria and dengue virus detection The antibody can be used as diagnostic reagents, the development of technology reserve paired antibodies, against Listeria bacteria Lester and dengue virus detection of superparamagnetic immunochromatographic technique has been part of the invention patent and utility model patents, is conducive to the technique further to the disease prevention department, port inspection and quarantine institutions, the promotion and application of the hospital other units, improve the technical capacity of these pathogens. At the beginning of the scene screen

【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R446.6

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本文編號(hào)：1402933