本文關(guān)鍵詞：SA-hirudin-RGD融合蛋白的原核表達(dá)及其抗凝血酶與抗血小板聚集功能的鑒定　出處：《第四軍醫(yī)大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的:構(gòu)建SA-hirudin-RGD重組載體,表達(dá)和純化融合蛋白,并對(duì)其抗凝血酶、抗血小板聚集功能進(jìn)行初步驗(yàn)證。方法:利用基因重組技術(shù)將鏈霉親和素(SA)核心區(qū)與hirudin-RGD序列連接,并克隆到原核表達(dá)載體pET-44b中,Western blotting鑒定經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后純化的融合蛋白�？鼓负涂寡“寰奂饔梅治鲎C明該融合蛋白既有抗凝血酶又有抗血小板聚集的功能。結(jié)果:重組載體pET44b-SA-hirudin-RGD經(jīng)限制性酶切鑒定和基因測(cè)序證實(shí)構(gòu)建成功;經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后SA-hirudin-RGD融合蛋白在大腸桿菌中高效表達(dá);純化獲得該目的蛋白,相對(duì)分子質(zhì)量經(jīng)Western blotting鑒定約為70000。抗凝血酶和抗血小板聚集的實(shí)驗(yàn)證明,融合蛋白SA-hirudin-RGD既有抗凝血酶又有抗血小板聚集的功能。結(jié)論:有著抗凝血酶和抗血小板聚集雙重功能的SA-hirudin-RGD融合蛋白被成功表達(dá)和純化,為下一步SA-hirudin-RGD的功能研究及臨床應(yīng)用確立了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective: to construct a recombinant SA-hirudin-RGD vector to express and purify the fusion protein and to inhibit thrombin. Methods: the core region of streptomycin (SAA) was linked to the hirudin-RGD sequence by gene recombination technique. And cloned into prokaryotic expression vector pET-44b. Western. Blotting was used to identify the purified fusion protein induced by IPTG. The analysis of anti-thrombin and anti-platelet aggregation showed that the fusion protein had both antithrombin and anti-platelet aggregation functions. The recombinant vector pET44b-SA-hirudin-RGD was successfully constructed by restriction enzyme digestion and gene sequencing. SA-hirudin-RGD fusion protein was highly expressed in Escherichia coli induced by IPTG. The target protein was purified and its molecular weight was about 700000.The results showed that the molecular weight of the target protein was about 700000.The results of anti-thrombin and anti-platelet aggregation were proved. The fusion protein SA-hirudin-RGD has both anti-thrombin and anti-platelet aggregation functions. SA-hirudin-RGD fusion protein with dual functions of anti-thrombin and anti-platelet aggregation was successfully expressed and purified. It establishes the foundation for the function research and clinical application of SA-hirudin-RGD in the next step.
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R440

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