本文關(guān)鍵詞：PAPP-A均相化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法的建立和在ACS診斷中的初步應(yīng)用　出處：《天津醫(yī)科大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的:新近研究發(fā)現(xiàn)PAPP-A是冠狀動(dòng)脈粥樣斑塊不穩(wěn)定性的炎性生物標(biāo)志物之一,血清PAPP-A的升高變化對(duì)急性冠脈綜合征的早期診斷及預(yù)后具有一定價(jià)值。與孕婦血清PAPP-A不同,非孕血清中的PAPP-A以低水平存在,而目前使用的PAPP-A檢測(cè)方法靈敏度較低,不適用非孕血清的檢測(cè)。本研究采用活性氧傳遞免疫分析技術(shù)方法,建立適合檢測(cè)ACS患者血清超敏PAPP-A水平的定量分析體系,評(píng)價(jià)分析方法的各項(xiàng)性能指標(biāo)。在此基礎(chǔ)上對(duì)ACS患者標(biāo)本分組檢測(cè),實(shí)驗(yàn)研究在急性冠狀動(dòng)脈綜合征患者血清中,PAPP-A是否對(duì)ACS具有較好的預(yù)測(cè)作用,對(duì)此類疾病危險(xiǎn)分層和預(yù)后評(píng)估的價(jià)值。方法:制備生物素化PAPP-A抗體和抗體包被的受體微球,以雙抗體夾心法與血清中PAPP-A結(jié)合,以光激化學(xué)發(fā)光分析方法檢測(cè)PAPP-A濃度。通過(guò)改變加樣模式、加樣順序,調(diào)整試劑比例和反應(yīng)時(shí)間溫度等方面,優(yōu)化檢測(cè)方法的反應(yīng)條件。利用ELISA Cale軟件建立四參數(shù)擬合方程的標(biāo)準(zhǔn)曲線,初步建立PAPP-A均相化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)方法。同時(shí)評(píng)價(jià)均相化學(xué)發(fā)光分析檢測(cè)PAPP-A方法的靈敏度、精密度、準(zhǔn)確性、穩(wěn)定性等各項(xiàng)性能指標(biāo),初步推算正常人的參考范圍。根據(jù)病程進(jìn)展對(duì)急性冠脈綜合征患者進(jìn)行分組研究,比較各組ACS患者與對(duì)照組的PAPP-A水平有何差別,同時(shí)與其它ACS相關(guān)的指標(biāo)進(jìn)行分析,初步探討PAPP-A與ACS之間的臨床相關(guān)性。結(jié)果:確定PAPP-A檢測(cè)方法:在96孔板中加入25ul生物素化抗體(1:2000),25ul受體球(1:100),25ul樣本,于37℃孵育30min,避光條件下加入175ul供體微球,于37℃孵育10min測(cè)定信號(hào)值。此PAPP-A檢測(cè)方法靈敏度為0.55m U/L,回收率在95%-100%;線性、穩(wěn)定性及特異性良好;重復(fù)性:批內(nèi)變異系數(shù)(CV)小于10%,批間CV小于15%;選擇血紅蛋白、甘油三酯和膽紅素三種常見干擾因素對(duì)此檢測(cè)方法的干擾較小。采用時(shí)間分辨熒光免疫分析(TRFIA)與本實(shí)驗(yàn)建立的均相化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)30例(10例心�；颊�,20例孕婦)血清標(biāo)本,二者進(jìn)行相關(guān)分析(r2=0.988,P0.05)。檢測(cè)104例健康體檢者(男/女:43/61,年齡:24-69歲)血清PAPP-A水平,初步推算參考范圍為1.60—25.12m U/L。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)建立了一種適用于ACS患者以均相化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)檢測(cè)血清低妊娠相關(guān)血漿蛋白A水平的方法。我們所建立的超敏PAPP-A檢測(cè)方法準(zhǔn)確性好,靈敏度、回收率、特異性較高,與時(shí)間分辨熒光免疫方法的相關(guān)性較高,通過(guò)檢測(cè)小樣本量健康人群的血清PAPP-A水平為其參考范圍的確定提供了一定的依據(jù),評(píng)價(jià)了此方法應(yīng)用于臨床檢測(cè)的可行性。分析了各組間ACS影響因素的差異,對(duì)ACS相關(guān)的炎性指標(biāo)進(jìn)行討論,并比較其相關(guān)性,初步討論了超敏PAPP-A的檢測(cè)在冠脈綜合征患者中的分層評(píng)估的應(yīng)用價(jià)值,而其作用機(jī)制及對(duì)ACS分層和預(yù)測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)還需要進(jìn)一步研究和探索。
[Abstract]:Objective : To study the relationship between PAPP - A and PAPP - A in patients with acute coronary syndrome ( ACS ) . Serum samples of 30 cases ( 10 patients with myocardial infarction and 20 pregnant women ) were detected by using time - resolved fluorescence immunoassay ( TRFIA ) and homogeneous chemiluminescence method established in this experiment ( r2 = 0.988 , P0.05 ) . The levels of serum PAPP - A in patients with ACS were determined by using homogeneous chemiluminescence immunoassay .

【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R446.6;R541.4

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本文編號(hào)：1363910