本文關(guān)鍵詞：新型優(yōu)化多肽pm11對(duì)口腔常見微生物殺菌作用的初步研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：1.背景與目的:齲病是最常見的口腔疾病之一[1]。在美國有近90%的青少年或年輕成人患有,或者曾患有齲病[2]。食物、病原菌、宿主和時(shí)間為齲病發(fā)生的主要因素[3]。多種細(xì)菌、蛋白等在牙齒表面作用一定時(shí)間形成生物膜。生物膜結(jié)構(gòu)能夠保護(hù)內(nèi)部細(xì)菌免受外界刺激的傷害,還能夠增強(qiáng)細(xì)菌對(duì)一般抗菌藥物的抵抗能力[4]。因此,對(duì)生物膜的控制一直是齲病防治的關(guān)鍵。氟化物的防齲能力是肯定的,但其推廣有一定的限制[5]。傳統(tǒng)抗生素容易誘使細(xì)菌發(fā)生突變而產(chǎn)生耐藥性。因此,需要研發(fā)新型的能夠抑制游離或生物膜狀態(tài)微生物的藥物。抗菌肽是近來口腔微生物學(xué)研究的熱點(diǎn),抗菌肽因?yàn)榫哂锌咕V廣、無免疫原性等特點(diǎn),所以極有可能成為一種高效、低毒的臨床新型藥物[6]。從美洲鰈(Pleuronectes americanus)的表皮中分離出來的α螺旋陽離子抗菌肽pleurocidin,成為近年來研究較多的抗菌肽之一,具有確定的抗菌效果[6,7]。但是pleurocidin的長度為25個(gè)氨基酸,過長的氨基酸更加難以滲透進(jìn)入生物膜內(nèi)部,而且過長氨基酸應(yīng)用于臨床上也提高了合成成本,因此我們需要開發(fā)新的短肽。本研究在pleurocidin活性中心的基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)的新型抗菌多肽pm11,并驗(yàn)證其殺菌效果。2.方法:2.1使用二倍稀釋法[8]檢測pm11對(duì)口腔常見微生物的MIC(最小抑菌濃度),然后使用平板涂布法檢測MBC(最小殺菌濃度)。2.2使用檢測時(shí)間殺死曲線(CLSI M26-A)[8]的方法測定高濃度pm11對(duì)口腔常見微生物的抗菌作用。2.3通過軟瓊脂鋪板抑菌圈方法進(jìn)一步直觀檢測pm11對(duì)口腔常見微生物在唾液環(huán)境下的抗菌作用。2.4培養(yǎng)細(xì)菌生物膜,以PBS處理組為陰性對(duì)照,異丙醇處理組為陽性對(duì)照,pm11處理組為實(shí)驗(yàn)組,使用活菌死菌染色劑(LIVE/DEAD?Bac Light TM Bacterial Viability Kit L-13152,Invitrogen Inc.美國)避光染色后,激光共聚焦(CLSM)觀察生物膜。2.5培養(yǎng)細(xì)菌懸液,以PBS處理組為陰性對(duì)照,pm11處理組為實(shí)驗(yàn)組。固定脫水冷凍干燥噴金后使用掃描電子顯微鏡(SEM)觀察pm11的殺菌作用。3.結(jié)果:3.1 pm11對(duì)8種微生物具有抗菌活性,且抗菌活性相差很大,MIC范圍為2-256μg/ml,MBC范圍為4-256μg/ml。3.2短期(2h)殺菌動(dòng)力學(xué)結(jié)果顯示致齲菌隨著pm11作用時(shí)間的增加,存活細(xì)菌數(shù)顯著下降。3.3溶解在唾液和超純水中的pm11的抑菌效果并沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),而且濃度越大,pm11的殺菌效果越強(qiáng)。3.4 pm11處理組紅色死菌數(shù)量明顯增多,而且死菌的區(qū)域有向團(tuán)聚生物膜內(nèi)細(xì)菌蔓延的趨勢。3.5 SEM結(jié)果直觀地看到pm11作用下的細(xì)菌細(xì)胞膜表面有明顯的孔洞、細(xì)胞皺縮、細(xì)菌溶脹及細(xì)胞裂解或碎片。4.結(jié)論:4.1 pm11對(duì)懸浮態(tài)細(xì)菌具有不同的殺菌作用并且呈時(shí)間和濃度依賴性。4.2 pm11對(duì)細(xì)菌生物膜具有一定的抗菌活性。4.3 pm11可能主要通過破壞細(xì)菌細(xì)胞膜,引起細(xì)菌內(nèi)容物流出,從而導(dǎo)致細(xì)菌死亡。
【關(guān)鍵詞】：抗菌肽 pm11 變異鏈球菌 血鏈球菌 激光共聚焦 電鏡 齲病
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R781.1
【目錄】：

• 主要英文縮寫詞表4-5
• 摘要5-7
• Abstract7-11
• 前言11-14
• 實(shí)驗(yàn)一 pm11對(duì)口腔常見致齲菌的MIC、MBC測定14-19
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料14-15
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法15-16
• 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果16-17
• 4. 討論17-19
• 實(shí)驗(yàn)二 pm11對(duì)口腔常見致齲菌的殺菌動(dòng)力學(xué)曲線測定19-23
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料19
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法19-21
• 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果21
• 4. 討論21-23
• 實(shí)驗(yàn)三 唾液等口腔環(huán)境對(duì)pm11抗菌作用的影響23-28
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料23
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法23-25
• 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-27
• 4. 討論27-28
• 實(shí)驗(yàn)四 pm11對(duì)變異鏈球菌生物膜的殺菌作用研究28-33
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料28-29
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法29-30
• 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-31
• 4. 討論31-33
• 實(shí)驗(yàn)五 pm11對(duì)口腔常見致齲菌殺菌機(jī)制的掃描電鏡觀察33-38
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料33
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法33-34
• 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果34-35
• 4. 討論35-38
• 結(jié)論38
• 參考文獻(xiàn)38-43
• 附錄43-45
• 本人簡歷43-44
• 致謝44-45
• 綜述45-56
• 參考文獻(xiàn)52-56

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陸史俊;魏昕;;變異鏈球菌耐酸分子機(jī)制的研究進(jìn)展[J];國際口腔醫(yī)學(xué)雜志;2008年05期

2 李小明;茍建重;;變異鏈球菌黏結(jié)素的提取及檢測[J];陜西醫(yī)學(xué)雜志;2009年05期

3 李小明;茍建重;;全唾液中變異鏈球菌受體的檢測[J];西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2010年02期

4 劉朝一,范生堯;營養(yǎng)變異鏈球菌的分離及鑒定[J];臨床檢驗(yàn)雜志;1992年01期

5 崔巖,李世杰,朱姝媛,李玉軍;變異鏈球菌致亞急性感染性心內(nèi)膜炎一例[J];中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志;1999年05期

6 田曉蓓;何永紅;萬呼春;;變異鏈球菌蛋白質(zhì)組研究進(jìn)展[J];國際口腔醫(yī)學(xué)雜志;2008年03期

7 趙莉;林煥彩;;口腔變異鏈球菌表面蛋白與轉(zhuǎn)肽酶的關(guān)系[J];國際口腔醫(yī)學(xué)雜志;2008年05期

8 何永紅;田曉蓓;萬呼春;溫艷麗;張菲菲;馬琴睿;;變異鏈球菌蛋白質(zhì)提取方法研究[J];華西口腔醫(yī)學(xué)雜志;2009年01期

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本文編號(hào)：408150