背景胰島素樣生長(zhǎng)因子1（Insulin-like Growth Factor 1,IGF-1）和IGF-2在許多腫瘤中表達(dá)異常,導(dǎo)致病人預(yù)后不良,是分子靶向藥物開(kāi)發(fā)的理想靶標(biāo)。單鏈抗體（Single-chain Antibody,scFv）是把單抗的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)通過(guò)一個(gè)柔性小肽連接而成,具有分子量小、穿透力強(qiáng)、免疫原性低、易于構(gòu)建等優(yōu)點(diǎn)。噬菌體展示技術(shù)（Phage Display Technology）是把抗體DNA片段插入噬菌體外殼蛋白基因中,抗體與外殼蛋白以融合蛋白形式表達(dá)在噬菌體表面,采用特定抗原對(duì)該噬菌體抗體庫(kù)進(jìn)行幾輪篩選后即可獲得針對(duì)特定抗原的單鏈抗體。本研究首先構(gòu)建了一個(gè)人源性、大容量噬菌體展示單鏈抗體庫(kù),采用IGF-1和IGF-2蛋白作為抗原對(duì)其進(jìn)行了篩選,獲得了一種全新的抗IGF-1/IGF-2單鏈抗體。目的本研究通過(guò)噬菌體展示技術(shù)構(gòu)建了大容量的全人源噬菌體展示單鏈抗體庫(kù),從中篩選出一種與IGF-1和IGF-2具有高度親和力而與胰島素親和力相對(duì)較低的單鏈抗體,為下一步研究其體內(nèi)外抗腫瘤活性提供必要的基礎(chǔ),并且為開(kāi)發(fā)作用于IGF信號(hào)系統(tǒng)的靶向藥物進(jìn)行新的探索。方... 

【文章來(lái)源】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院河南省

【文章頁(yè)數(shù)】：96 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

部分外周血淋巴細(xì)胞樣本中提取的總RNA

413實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.150例患者/健康人外周血淋巴細(xì)胞總RNA的提取如圖1所示，提取的總RNA中28S和18S條帶清晰可見(jiàn)，無(wú)降解。紫外分光光度計(jì)測(cè)定其濃度和純度,OD260/OD280均在1.92左右，樣品的濃度和純度較好，可作為模板進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。圖1部分外周血淋巴細(xì)胞樣本中提取的總RNA3.2PCR擴(kuò)增抗體輕鏈可變區(qū)基因和重鏈可變區(qū)基因以外周血淋巴細(xì)胞總RNA為模板，采用RT-PCR方法擴(kuò)增出抗體的重鏈可變區(qū)基因（VH）和輕鏈可變區(qū)基因（VL），擴(kuò)增結(jié)果如圖2和圖3所示。圖2單鏈抗體重鏈可變區(qū)片段的RT-PCR結(jié)果。泳道1：DNAMarker；泳道2：空白；泳道3-10：重鏈可變區(qū)PCR擴(kuò)增條帶。

42圖3單鏈抗體輕鏈可變區(qū)基因片段的RT-PCR結(jié)果。泳道1：DNAMarker；泳道2：空白；泳道3-6：抗體輕鏈kappa鏈PCR擴(kuò)增條帶；泳道7-10：抗體輕鏈lamda鏈PCR擴(kuò)增條帶。3.3SOE-PCR擴(kuò)增scFv基因采用SOE-PCR技術(shù)將VH基因和VL基因（包括kappa鏈和lamda鏈）通過(guò)(G4S)3linker進(jìn)行連接得到scFv基因（如圖4、圖5所示），即VH-linker-VL，并加入SfiI和NotI酶切位點(diǎn)。圖4單鏈抗體scFv（kappa鏈）SOE-PCR擴(kuò)增結(jié)果。泳道1：DNAMarker；泳道2-13：?jiǎn)捂溈贵wscFv（kappa鏈）SOE-PCR擴(kuò)增條帶。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3560627