【摘要】：利用質(zhì)譜法對糖蛋白質(zhì)組學(xué)進(jìn)行研究時,需要對樣品進(jìn)行預(yù)處理以消除非糖肽的干擾并提高糖肽檢測的效率。盡管親水相互作用色譜(HILIC)已經(jīng)被應(yīng)用于富集糖基化肽,但其中不少材料有較大的空間位阻使糖肽難以與之結(jié)合,并且具有成本高和親水基團(tuán)難以高密度修飾等困難。針對這些問題本文使用廉價且高親水性的殼聚糖,發(fā)展出兩種新型的HILIC大孔材料用于對糖基化肽進(jìn)行高選擇性、高靈敏度和廣泛性的富集。(1)蜂巢結(jié)構(gòu)殼聚糖仿生薄膜:通過冷凍干燥法制備出1 mm厚的具有蜂窩狀大孔的仿生蜂窩殼聚糖膜(BHCM)作為HILIC糖肽富集材料。使用該材料富集來自免疫球蛋白G(IgG)的胰蛋白酶消化物,IgG和牛血清白蛋白(BSA)消化物的混合物,并與商業(yè)材料ZIC-HILIC進(jìn)行比較。該仿生膜可以從IgG消化物中鑒定多達(dá)32個N-糖肽,表現(xiàn)出高靈敏度(50 fmol)、高回收率(93.3%)和廣泛的適用性。可以從摩爾比低至1/500的IgG/BSA酶解混合物中高選擇性的富集糖基化肽段,證實了該材料具有優(yōu)異的糖肽富集效率。此外,從2μL人血清樣品中鑒定到來自146個糖基化蛋白質(zhì)的400條獨特糖肽的270個獨特的N-糖基化位點。并且從30μg去糖基化的胎球蛋白彈性蛋白酶消化物中鑒定到278條獨特的O-糖肽的48個獨特的O-糖基化位點。這些結(jié)果表明,所制備的仿生薄膜在糖蛋白質(zhì)組學(xué)中樣品預(yù)處理方面具有很大的潛力。(2)殼聚糖負(fù)載COF薄膜:共價有機(jī)骨架(covalent organic frameworks,COFs)是一類具有有序結(jié)構(gòu)和高結(jié)晶度的新型多孔有機(jī)聚合物,其中有機(jī)結(jié)構(gòu)單元通過強(qiáng)共價鍵連接。提供高表面積的COF在吸附領(lǐng)域引起了很多關(guān)注。目前關(guān)于COF粉末制成的多級孔整體材料的報道很少。本文將一種三甲基間苯三酚和草二酰肼制成的COF負(fù)載在殼聚糖薄膜內(nèi),使其成為具有大孔和介孔的多級孔薄膜,并成功應(yīng)用于糖肽富集和銅離子吸附。
【學(xué)位授予單位】：西北大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：O629.7;Q811;TB383.2
【圖文】：

西北大學(xué)碩士學(xué)位論文，如圖 1-2 所示。其中 N-糖基化（N-glycosylation）和 O-糖基化（O-glycosylation）究最為廣泛的兩種蛋白質(zhì)糖基化。

不同類型的糖基化蛋白及其連接方式

N-糖鏈都具有五糖核心結(jié)構(gòu)如圖1-3 所示，根據(jù)核心外側(cè)糖鏈?zhǔn)Ｓ嗖糠值倪B接情況不同可分為高甘露糖型、復(fù)合型和雜合型三類；根據(jù)核心外圍糖鏈分支的數(shù)目也可分為二天線、三天線和四天線等，如圖 1-4 所示。圖 1-3 糖鏈 N-連接示意圖Fig. 1-3 Schematic illustration of N-linked glycopeptides圖 1-4 不同的類型 N-連接糖肽Fig. 1-4 Different types of N-linked glycopeptides

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本文編號：2777918