【摘要】：本文通過酸酶提取法從長白山廢棄的林蛙皮中提取膠原蛋白,并進(jìn)行鑒定。用聚丙烯酰胺凝膠電泳測定膠原蛋白的分子量,用傅立葉紅外光譜及圓二色譜法確定蛋白的三螺旋結(jié)構(gòu),用紫外分光光度計(jì)確定該提取物為Ⅰ型膠原蛋白。將提取的林蛙皮膠原蛋白(Rana chensinensis skin collagen,RCSC)作為生物大分子與有機(jī)高分子材料左旋聚乳酸(poly(L-lactide),PLLA)采用特定比例(3:7)共混,溶于有機(jī)溶劑六氟異丙醇(HFIP)中,質(zhì)量體積比為1:10,通過靜電紡絲的方法,制備有序排列及無序排列的納米纖維膜。不同纖維取向的純PLLA納米纖維膜也將制備并用作對比。通過不同方法制備出四組納米纖維膜,分別為:有序排列的PLLA納米纖維膜,無序排列的PLLA納米纖維膜,有序排列的RCSC/PLLA納米纖維膜,無序排列的RCSC/PLLA納米纖維膜。通過對比四組納米纖維膜的各項(xiàng)性能來探究不同纖維取向及膠原蛋白的添加對納米纖維膜作為組織工程學(xué)生物支架所帶來的影響。通過掃描電子顯微鏡(SEM)觀察納米纖維膜的表面形態(tài)及纖維截面形態(tài),并探究纖維直徑分布及取向度分布,通過激光共聚焦顯微鏡(LSCM)觀察膠原蛋白在納米纖維中的分布狀態(tài),并測定各組納米纖維膜的孔隙率、親水性、保水性、力學(xué)性能、熱性能。通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn)來探究人皮膚成纖維細(xì)胞在各組納米纖維膜上的粘附情況及增殖情況。掃面電子顯微鏡結(jié)果顯示,所有纖維膜均呈現(xiàn)出均勻、光滑、無串珠的表面形態(tài),林蛙皮膠原蛋白/聚乳酸納米纖維的平均直徑低于純聚乳酸納米纖維的直徑,同等材料情況下,有序排列的納米纖維平均直徑低于無序排列的納米纖維。所有纖維的截面均呈圓形。并且,所有的納米纖維截面均呈圓形。激光共聚焦顯微鏡掃描結(jié)果指出林蛙皮膠原蛋白均勻地分散于整條纖維中�？紫堵蕼y試結(jié)果顯示,所有納米纖維膜均有較高的孔隙率,有序排列的納米纖維膜的孔隙率略低于無序排列的納米纖維膜的孔隙率,相同纖維取向情況下,RCSC/PLLA共混納米纖維膜的孔隙率低于純PLLA納米纖維膜的孔隙率。親水角及保水性測試結(jié)果表明,PLLA納米纖維膜保持疏水性,RCSC/PLLA納米纖維膜保持親水性,RCSC納米纖維膜極度親水。力學(xué)性能測試結(jié)果顯示,有序排列的純PLLA納米纖維膜表現(xiàn)出最佳的楊氏模量、抗張強(qiáng)度及斷裂伸長率,無序排列的純PLLA納米纖維膜表現(xiàn)出較差的力學(xué)性能,有序及無序排列的RCSC/PLLA共混纖維膜性能居中。差示熱量掃描結(jié)果顯示,有序排列的纖維膜的結(jié)晶度較高,無序排列的纖維膜的結(jié)晶度較低。培養(yǎng)并選取2-3代的人成纖維細(xì)胞進(jìn)行納米纖維膜的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。通過掃面電子顯微鏡及激光共聚焦顯微鏡觀察人皮膚成纖維細(xì)胞在四組納米纖維膜上的粘附情況,通過Cell Counting Kit-8(CCK-8試劑盒)測定人皮膚成纖維細(xì)胞的增殖情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,所有納米纖維膜均支持人皮膚成纖維細(xì)胞生長,該細(xì)胞在有序排列的納米纖維膜上呈平行狀態(tài)生長,有序排列的RCSC/PLLA納米纖維膜上該細(xì)胞增殖速度最快。實(shí)驗(yàn)表明,有序排列的RCSC/PLLA納米纖維膜在力學(xué)性能等多方面更佳,并且更好地促進(jìn)細(xì)胞增殖,起到引導(dǎo)細(xì)胞生長的作用,所以,有序排列的RCSC/PLLA納米纖維膜可以作為皮膚組織修復(fù)的創(chuàng)傷敷料。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：TQ936;TB383.2

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本文編號：2306049