發(fā)布時間：2017-08-30 00:33

  本文關(guān)鍵詞：玻連蛋白單克隆抗體的制備及在臨床檢測中的初步應(yīng)用

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【摘要】：背景和目的：肝細胞癌(Hepatocellular carcinoma, HCC)是我國最常見的惡性腫瘤之一。其早期診斷困難,病程發(fā)展迅速,目前尚沒有有效的預(yù)防和治療措施。因此,尋找新的肝癌標志物分子,開發(fā)臨床檢測用試劑,將科研成果轉(zhuǎn)化為臨床產(chǎn)品,具有重要的實際意義和應(yīng)用價值。玻連蛋白(Vitronectin, VN)是在近些年的研究中發(fā)現(xiàn)的一種肝癌的潛在疾病標志物。研究表明其在肝癌進程的不同階段,表達水平有所不同。因此,獲得特異性針對VN的抗體,對于深入研究VN與肝癌的關(guān)系,了解其表達水平與疾病進程的關(guān)聯(lián)性是十分必要的。目前,國內(nèi)尚沒有針對VN蛋白的高質(zhì)量的抗體和臨床試劑盒。本研究擬開發(fā)具有自主知識產(chǎn)權(quán)的抗VN蛋白的單克隆抗體以及可配對抗體對,并研發(fā)以夾心ELISA技術(shù)為基礎(chǔ)的臨床檢測試劑盒原料。方法：His-VN重組蛋白在大腸桿菌中高效表達,作為免疫原制備單抗。利用五周標準小鼠單抗制備佐劑免疫小鼠,采用ELISA法初步篩選抗體,Western blot對初步篩選得到的抗體進行特異性鑒定。用篩選得到的抗體對肝癌病人血清及正常人血清進行ELISA檢測,采取ELISA雙抗夾心法和ForteBio Octet Red多通道生物分子相互作用系統(tǒng)篩選配對抗體,并利用篩選出的抗體對正常人血清、乙肝病人血清及肝硬化病人血清臨床樣本進行檢測。結(jié)果：1.經(jīng)過ELISA篩選得到4株針對VN的雜交瘤細胞株,分別為3D2,4D11,6G5和8D9。2.6G5和8D9兩株抗體可特異性識別肝癌病人血清中的VN,并能夠檢測到肝癌病人血清中VN與正常人血清中VN的差異表達(P0.05)。3.6G5和8D9兩株雜交瘤細胞株經(jīng)ELISA雙抗夾心法和Fortebio法檢測可成功配對。4.成功配對的兩株雜交瘤細胞株6G5和8D9應(yīng)用ELISA雙抗夾心法檢測正常人血清、乙肝病人血清及肝硬化病人血清,檢測到VN差異表達(P0.001)。結(jié)論：成功的制備出抗VN的單克隆抗體,篩選到的兩株抗體可配對。篩選出的抗體可檢測到正常人血清、乙肝病人血清、肝硬化病人血清及肝癌病人血清中VN差異表達,為進一步開發(fā)臨床檢測血清VN的肝癌預(yù)警試劑盒提供試劑和原料。
【關(guān)鍵詞】：玻連蛋白 原核表達 單克隆抗體 ELISA雙抗夾心法 抗體配對
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R943;R735.7
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 1 引言11-13
• 2 材料與方法13-27
• 2.1 實驗材料13-17
• 2.2 實驗方法17-27
• 3 結(jié)果27-36
• 3.1 His-VN重組蛋白表達純化結(jié)果27-28
• 3.2 小鼠抗血清效價檢測結(jié)果28-29
• 3.3 雜交瘤細胞的生長情況29-30
• 3.4 融合率及克隆化結(jié)果30-31
• 3.5 Western blot結(jié)果分析31-32
• 3.6 抗體配對實驗結(jié)果32-34
• 3.7 ELISA法檢測不同肝病病人血清中的VN34-35
• 3.8 自制VN mAb與商品化VN檢測試劑盒比較35-36
• 4 討論36-40
• 5 結(jié)論40
• 6 參考文獻40-45
• 附錄45-46
• 致謝46-47
• 綜述47-61
• 參考文獻54-61

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 戴淑真;劉海霞;王斌;徐冰;車艷辭;韓娟;;檢測子宮內(nèi)膜異位癥患者血清中差異表達蛋白的研究[J];中國誤診學(xué)雜志;2006年21期

2 劉洋洋;李曉玲;左威;遲健;柳剛;孫龍欽;姜俊義;劉瑩;;S100A9蛋白單克隆抗體的制備及初步鑒定[J];細胞與分子免疫學(xué)雜志;2014年09期

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本文編號：756300