本文關(guān)鍵詞：新型光敏劑華卟啉鈉介導(dǎo)的光動(dòng)力療法對(duì)小鼠乳腺癌抗腫瘤效應(yīng)研究

  更多相關(guān)文章： 光動(dòng)力療法 小鼠乳腺癌4T1細(xì)胞系 DVDMS Photofrin

【摘要】：研究背景及目的乳腺癌是當(dāng)今全世界女性中最普遍的惡性腫瘤之一,嚴(yán)重威脅著女性的健康和生命。近年來(lái)光動(dòng)力療法(Photodynamic Therapy,PDT)以其高效、副作用小、可協(xié)同其它手術(shù)治療及可重復(fù)治療和相對(duì)成本低等優(yōu)點(diǎn)脫穎而出,已成為世界腫瘤防治科學(xué)中活躍的研究領(lǐng)域之一。在PDT治療腫瘤的前期研究中發(fā)現(xiàn),光敏劑是影響抗癌療效的關(guān)鍵要素之一。目前PDT臨床研究中主要應(yīng)用是1996年美國(guó)FDA批準(zhǔn)的Photofrin,已有數(shù)萬(wàn)例患者接受Photofrin-PDT治療,包括皮膚癌、乳腺癌、食管癌、眼腫瘤、咽癌、膀胱癌等。但Photofrin也存在重大缺陷：其一,Photofrin是由8個(gè)以上卟啉衍生物組成的混合制劑,有效成分不明確。其二,具有皮膚光毒性,容易引起皮膚光敏副反應(yīng),因此用藥后4-8周內(nèi),患者需生活在一個(gè)避光的環(huán)境中。此外,Photofrin價(jià)格昂貴,我國(guó)臨床上至今也沒(méi)有應(yīng)用。2006年,國(guó)家藥監(jiān)局批準(zhǔn)我國(guó)第一個(gè)抗癌光敏劑喜泊分(Hiporfin)正式進(jìn)入I臨床應(yīng)用。但Hiporfin在臨床上應(yīng)用的效果遠(yuǎn)不如Photofrin,并且有效成分不明確,皮膚光毒性又比較大,該光敏劑目前已處于停產(chǎn)狀態(tài)。為了研發(fā)皮膚光毒性低、抗癌活性強(qiáng)、臨床應(yīng)用價(jià)值高且具有我國(guó)自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的光敏劑,中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所方起程教授研究團(tuán)隊(duì)開(kāi)展了新型光敏劑研發(fā)的潛心探討,成功制備出純度為98.7%以上的卟啉二聚體鈉鹽新型光敏劑,即華卟啉鈉(Sinoporphyrin sodium),代號(hào)DVDMS。前期研究顯示DVDMS具備水溶性較好、化學(xué)性質(zhì)純、單線態(tài)氧產(chǎn)額高、暗毒性低而光毒性強(qiáng)等優(yōu)勢(shì),尤其是擁有我國(guó)自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)、質(zhì)量可控、能產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。然而由于DVDMS是一新研發(fā)的光敏劑,目前關(guān)于其報(bào)道極為有限,文獻(xiàn)檢索不足5篇,并且無(wú)其介導(dǎo)的PDT在抑制腫瘤轉(zhuǎn)移方面的報(bào)道,本課題擬從DVDMS本身光譜性質(zhì)、在小鼠體內(nèi)的代謝及其介導(dǎo)的PDT體內(nèi)外對(duì)乳腺癌增殖抑制及遷移抑制效應(yīng)進(jìn)行研究,以期為DVDMS的新藥研發(fā)及乳腺癌的治療提供扎實(shí)的理論基礎(chǔ)。研究方法及結(jié)果第一部分DVDMS光譜性質(zhì)的研究實(shí)驗(yàn)主要采用超微量微孔板分光光度計(jì)和熒光分光光度計(jì)對(duì)DVDMS的吸收譜和熒光譜進(jìn)行了研究,并通過(guò)改變緩沖液的pH和離子強(qiáng)度考察了緩沖液的pH和離子強(qiáng)度對(duì)DVDMS光譜的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：①DVDMS的吸收譜在300-700 nm范圍內(nèi)具有5個(gè)吸收峰,其最強(qiáng)的吸收峰(索瑞峰)位于紫外362 nm處,并且隨著吸收波長(zhǎng)的增加,這些峰的相對(duì)強(qiáng)度逐漸減小。②緩沖液的pH對(duì)DVDMS吸收譜有明顯影響,表現(xiàn)為隨pH值增大,其索瑞峰峰位右移,峰值增加：其熒光發(fā)射譜在酸性環(huán)境下無(wú)明顯的峰位,在堿性環(huán)境下隨pH值增大,其峰值增加。③緩沖液的離子強(qiáng)度對(duì)其吸收譜影響不大；其熒光發(fā)射譜的峰值隨離子強(qiáng)度的增大而增加。第二部分DVDMS-PDT對(duì)小鼠乳腺癌4T1細(xì)胞增殖抑制及遷移抑制效應(yīng)研究實(shí)驗(yàn)主要采用MTT法、克隆形成、流式細(xì)胞儀檢測(cè)、劃痕和Transwell實(shí)驗(yàn)以及形態(tài)學(xué)檢測(cè)研究了DVDMS-PDT對(duì)4T1細(xì)胞的增殖抑制和迂移抑制效應(yīng),并對(duì)其關(guān)鍵因子進(jìn)行了分析；實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：①DVDMs-PDT能夠顯著抑制4T1細(xì)胞的增殖,并且同等藥物劑量下,其光動(dòng)力效果明顯優(yōu)于Photofrin.②PDT處理后,流失細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞生成大量活性氧,加入活性氧抑制劑后細(xì)胞的存活率明顯上升,表明活性氧在DVDMS-PDT殺傷4T1細(xì)胞中發(fā)揮關(guān)鍵作用。③ DVDMS-PDT能夠顯著抑制4T]細(xì)胞的遷移,并且同等藥物劑量下,其遷移抑制效果明顯優(yōu)于Photofrin.④PDT處理后,4T1細(xì)胞表面微絨毛減少,細(xì)胞內(nèi)部骨架F-actin發(fā)生解聚,表明細(xì)胞微絨毛和骨架在DVDMS-PDT中制4T1細(xì)胞遷移中發(fā)揮關(guān)鍵作用。第三部分DVDMS在4T1荷瘤小鼠體內(nèi)的代謝研究實(shí)驗(yàn)主要采用熒光分光光度法對(duì)DVDMS在4T1荷瘤小鼠體內(nèi)的分布及代謝進(jìn)行了研究。研究結(jié)果顯示：①DVDMS在腫瘤和其它組織中的代謝和分布具有時(shí)間依賴(lài)性,在血漿中代謝速率較快,0.5 h達(dá)到高峰,6h己經(jīng)降至較低水平。②DVDMS在多數(shù)組織中2h內(nèi)達(dá)到高峰,隨后下降,24 h均下降至峰值50%以下。③DVDMS在腫瘤組織的代謝速率相對(duì)緩慢,靜脈注射12 h后達(dá)到高峰,其后12-24 h緩慢下降,表現(xiàn)為其對(duì)DVDMS的潴留作用。④綜合DVDMS在腫瘤組織及其它組織中的代謝規(guī)律,為了達(dá)到較好的抑瘤效果,并降低對(duì)正常組織的損傷作用,選擇DVDMS靜脈注射24 h后光照處理。第四部分DVDMS-PDT對(duì)4T1移植瘤的殺傷作用研究通過(guò)建立荷瘤小鼠的模型,從小鼠存活期、腫瘤體積、腫瘤重量、切片形態(tài)學(xué)觀察、免疫組化、腫瘤肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)統(tǒng)計(jì)幾個(gè)方面探討了DVDMS-PDT對(duì)4T1移植瘤的生長(zhǎng)抑制及轉(zhuǎn)移抑制效應(yīng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：①DVDMS-PDT能顯著延長(zhǎng)4T1小鼠的存活期。②DVDMs-PDT能顯著抑制小鼠腫瘤的生長(zhǎng),其抑制效應(yīng)具有藥物劑量依賴(lài)性及光照劑量依賴(lài)性。③DVDMS-PDT能顯著抑制4T1小鼠的肺轉(zhuǎn)移。結(jié)論綜上所述,通過(guò)本課題的研究,我們從細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)兩個(gè)方面證實(shí)了DVDMS是一有潛力的新型光敏劑,其介導(dǎo)的光動(dòng)力療法能有效抑制乳腺癌的增殖和轉(zhuǎn)移,并且其效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于目前臨床上應(yīng)用的光敏劑Photofrin,這對(duì)于進(jìn)一步推動(dòng)DVDMS的新藥研發(fā)及臨床應(yīng)用,有重要的理論意義和應(yīng)用價(jià)值。
【關(guān)鍵詞】：光動(dòng)力療法 小鼠乳腺癌4T1細(xì)胞系 DVDMS Photofrin
【學(xué)位授予單位】：陜西師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R737.9
【目錄】：

• 摘要3-6
• Abstract6-9
• 縮略語(yǔ)表9-13
• 第1章 緒論13-19
• 1.1 乳腺癌及其治療現(xiàn)狀13
• 1.2 光動(dòng)力學(xué)療法(Photodynamic therapy,PDT)13-15
• 1.2.1 光動(dòng)力學(xué)療法簡(jiǎn)要介紹13-14
• 1.2.3 PDT在乳腺癌中的研究14-15
• 1.3 光敏劑15-19
• 1.3.1 理想光敏劑所具備的條件15-16
• 1.3.2 臨床上應(yīng)用的光敏劑存在的問(wèn)題16
• 1.3.3 新型光敏劑華卟啉鈉(DVDMS)16-19
• 第2章 研究論文的立論依據(jù)、內(nèi)容和目的意義19-21
• 第3章 DVDMS光譜性質(zhì)研究21-27
• 3.1 材料和儀器21
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法21-22
• 3.3 結(jié)果與討論22-27
• 第4章 DVDMS-PDT對(duì)小鼠乳腺癌4T1細(xì)胞增殖抑制及遷移抑制效應(yīng)研究27-41
• 4.1 材料和儀器27-29
• 4.1.1 細(xì)胞來(lái)源與細(xì)胞培養(yǎng)27
• 4.1.2 試劑與配制27-28
• 4.1.3 儀器設(shè)備28-29
• 4.1.4 光照裝置29
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法29-32
• 4.2.1 給藥、光照及分組29
• 4.2.2 MTT法檢測(cè)DVDMS-PDT對(duì)小鼠乳腺癌4T1細(xì)胞的增殖抑制作用29-30
• 4.2.3 克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)DVDMS-PDT對(duì)4T1細(xì)胞的增殖抑制作用30
• 4.2.4 流式細(xì)胞儀結(jié)合DCFH-DA染色檢測(cè)DVDMS-PDT對(duì)4T1細(xì)胞活性氧產(chǎn)生的影響30-31
• 4.2.5 創(chuàng)傷修復(fù)實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)DVDMS-PDT對(duì)4T1細(xì)胞遷移能力的影響31
• 4.2.6 掃描電子顯微鏡觀察DVDMS-PDT處理后細(xì)胞膜表面超微結(jié)構(gòu)的變化31-32
• 4.2.7 鬼筆環(huán)肽-FITC染色結(jié)合激光掃描共聚焦顯微鏡觀察DVDMS-PDT處理后細(xì)胞骨架蛋白F-actin的變化32
• 4.2.8 數(shù)據(jù)分析32
• 4.3 結(jié)果與討論32-41
• 4.3.1 DVDMS-PDT對(duì)4T1細(xì)胞的增殖抑制作用32-34
• 4.3.2 DVDMS-PDT對(duì)4T1細(xì)胞活性氧產(chǎn)生的影響34-36
• 4.3.3 DVDMS-PDT對(duì)4T1細(xì)胞遷移能力的影響36-37
• 4.3.4 DVDMS-PDT對(duì)4T1細(xì)胞細(xì)胞膜表面超微結(jié)構(gòu)的影響37-38
• 4.3.5 DVDMS-PDT對(duì)4T1細(xì)胞細(xì)胞骨架的影響38
• 4.3.6 討論38-41
• 第5章 DVDMS在4T1荷瘤小鼠體內(nèi)的代謝研究41-47
• 5.1 材料與儀器41
• 5.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及瘤株41
• 5.1.2 主要儀器41
• 5.2 實(shí)驗(yàn)方法41-42
• 5.2.1 動(dòng)物模型的建立及分組41
• 5.2.2 熒光分光光度法測(cè)定DVDMS在4T1移植瘤小鼠體內(nèi)的分布41-42
• 5.2.3 數(shù)據(jù)分析42
• 5.3 結(jié)果與討論42-47
• 5.3.1 DVDMS在4T1荷瘤小鼠血漿及各組織中的分布42-44
• 5.3.2 DVDMS在4T1荷瘤小鼠腫瘤內(nèi)及瘤周的富集變化44-45
• 5.3.3 討論45-47
• 第6章 DVDMS-PDT對(duì)4T1移植瘤的殺傷作用研究47-61
• 6.1 材料和儀器47-48
• 6.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及瘤株47
• 6.1.2 主要試劑47
• 6.1.3 主要儀器47-48
• 6.1.4 光照裝置48
• 6.2 實(shí)驗(yàn)方法48-51
• 6.2.1 動(dòng)物模型的建立48
• 6.2.2 實(shí)驗(yàn)分組、處理及指標(biāo)檢測(cè)48-49
• 6.2.3 腫瘤組織形態(tài)學(xué)觀察49-50
• 6.2.4 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)增殖細(xì)胞核抗原蛋白PCNA的變化50-51
• 6.2.5 數(shù)據(jù)分析51
• 6.3 結(jié)果與討論51-58
• 6.3.1 DVDMS-PDT顯著延長(zhǎng)了小鼠的存活期51-52
• 6.3.2 DVDMS-PDT對(duì)小鼠腫瘤生長(zhǎng)和小鼠體重的影響52-54
• 6.3.3 DVDMS-PDT對(duì)小鼠瘤重的影響54-56
• 6.3.4 DVDMS-PDT殺傷4T1腫瘤組織的顯微結(jié)構(gòu)觀察56
• 6.3.5 DVDMS-PDT對(duì)PCNA表達(dá)水平的影響56-57
• 6.3.6 DVDMS-PDT對(duì)小鼠肺轉(zhuǎn)移的影響57-58
• 6.4 討論58-61
• 第7章 總結(jié)61-63
• 參考文獻(xiàn)63-71
• 致謝71-73
• 攻讀碩士學(xué)位期間的研究成果73-74

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 李黎波;李文敏;項(xiàng)蕾紅;秦中平;王洛偉;林盡染;馬英;羅榮城;黃正;;光動(dòng)力療法在中國(guó)的應(yīng)用與臨床研究[J];中國(guó)激光醫(yī)學(xué)雜志;2012年05期

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

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本文編號(hào)：647251