本文關(guān)鍵詞：絨葉仙茅苷H對(duì)慢性應(yīng)激誘發(fā)大鼠抑郁行為的影響及機(jī)制研究

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【摘要】：抑郁癥為常見(jiàn)的精神疾病之一,其主要的臨床特征是顯著而持久的情緒低落,且發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,具有較高的致死致殘率,嚴(yán)重危害患者的身心健康以及生活質(zhì)量。目前臨床常用抗抑郁的西藥由于患者耐受性差、不良反應(yīng)多、效果不穩(wěn)定等諸多因素影響著抑郁癥的治療。因此,安全有效的天然藥物成為人們尋找理想抗抑郁藥物的途徑之一。絨葉仙茅苷H (crassifoside H)是從絨葉仙茅中提取分離的單體化合物,絨葉仙茅是仙茅科仙茅屬大葉仙茅組植物。大葉仙茅組植物具有補(bǔ)腎陽(yáng)作用,按照傳統(tǒng)中醫(yī)思想“溫腎壯陽(yáng),填精益髓”是中醫(yī)治療“郁證”的重要原則,具有補(bǔ)腎作用的大葉仙茅組植物中極有可能存在抗抑郁活性成分。Crassifoside H為絨葉仙茅的代表性成分,因此其可能具有抗抑郁的效果,而關(guān)于其藥理活性及作用機(jī)制的研究未見(jiàn)報(bào)道。本課題將在活性篩選基礎(chǔ)上,借助ELISA、實(shí)時(shí)熒光定量PCR (QPCR)、Western blot和免疫組織化學(xué)染色等方法,利用大鼠慢性溫和不可預(yù)見(jiàn)性刺激(chronic unpredictable mild stress, CUMS)結(jié)合孤養(yǎng)抑郁模型,從行為學(xué)、神經(jīng)生化、細(xì)胞與分子生物學(xué)等多個(gè)層次研究crassifoside H的抗抑郁活性及可能的作用機(jī)制,為開(kāi)發(fā)自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)、新型抗抑郁藥物奠定重要基礎(chǔ)。利用皮質(zhì)酮(CORT)刺激人神經(jīng)母瘤細(xì)胞(SH-SY5Y細(xì)胞)模擬神經(jīng)損傷環(huán)境,建立體外抑郁模型,研究crassifoside H在體外的抗抑郁作用,觀察crassifosideH對(duì)損傷的神經(jīng)細(xì)胞是否具有保護(hù)作用,為后續(xù)動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn)提供理論基礎(chǔ)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)損傷的神經(jīng)細(xì)胞在crassifoside H的作用下存活率顯著升高,說(shuō)明crassifoside H具有神經(jīng)保護(hù)作用。采用CUMS建立大鼠抑郁模型,對(duì)crassifoside H的抗抑郁作用進(jìn)行確認(rèn),并從單胺神經(jīng)遞質(zhì)受體、下丘腦-垂體-腎上腺軸(The hypothalamic-pituitary-adrenal axis, HPA軸)、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、細(xì)胞因子角度探索crassifoside H的抗抑郁作用機(jī)制。結(jié)果發(fā)現(xiàn)crassifoside H顯著逆轉(zhuǎn)了CUMS引起的大鼠糖水偏愛(ài)指數(shù)下降,自主活動(dòng)減少,強(qiáng)迫游泳時(shí)間增加,同時(shí)抑制了CUMS引起的HPA軸功能亢進(jìn),降低了NLRP3、TNF-α、IL-1β等細(xì)胞因子的表達(dá),增加了腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)、p-ERK1/2、5-HT1A受體的表達(dá)。說(shuō)明crassifoside H的抗抑郁作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)HPA軸功能以及神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、細(xì)胞因子、五羥色胺受體功能相關(guān)。綜上所述,本研究發(fā)現(xiàn)crassifoside H可以改善CUMS所致大鼠的抑郁行為,其作用機(jī)制可能與保護(hù)神經(jīng)元,調(diào)節(jié)HPA軸活性,上調(diào)BDNF、5-HT1A受體以及p-ERK1/2的表達(dá),抑制NLRP3、TNF-α、IL-1β等細(xì)胞因子的表達(dá)有關(guān)。本文揭示了crassifoside H抗抑郁作用的可能機(jī)制,奠定了其抗抑郁作用的靶點(diǎn)研究的基礎(chǔ),也為研發(fā)以crassifoside H為基礎(chǔ)的治療抑郁癥的天然藥物新藥提供了科學(xué)依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：絨葉仙茅苷H 抗抑郁 HPA軸 神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子 細(xì)胞因子
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R277.7
【目錄】：

• 英文縮寫(xiě)詞7-9
• 中文摘要9-11
• Abstract11-13
• 1. 前言13-16
• 2. 實(shí)驗(yàn)材料16-19
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與細(xì)胞16
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物16
• 2.1.2 細(xì)胞16
• 2.2 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑16-18
• 2.3 主要溶液的配制18
• 2.4 儀器與設(shè)備18-19
• 3. 實(shí)驗(yàn)方法19-27
• 3.1 Crassifoside H對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用19-20
• 3.1.1 SH-SY5Y細(xì)胞的培養(yǎng)19
• 3.1.2 CORT誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞損傷模型的制備19-20
• 3.1.3 Crassifoside H對(duì)損傷的SH-SY5Y細(xì)胞的保護(hù)作用20
• 3.1.4 CCK-8試劑盒檢測(cè)細(xì)胞存活率20
• 3.2 慢性溫和不可預(yù)見(jiàn)性刺激(CUMS)模型的建立20-21
• 3.2.1 動(dòng)物初篩20
• 3.2.2 實(shí)驗(yàn)分組20-21
• 3.2.3 模型建立21
• 3.3 行為學(xué)檢測(cè)21-22
• 3.3.1 糖水偏愛(ài)實(shí)驗(yàn)22
• 3.3.2 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)22
• 3.3.3 強(qiáng)迫游泳22
• 3.4 取材22-23
• 3.5 血漿皮質(zhì)酮(CORT)的檢測(cè)23
• 3.6 Western Blot檢測(cè)大鼠海馬中BDNF、ERK1/2、p-ERK1/2、5. HT_(1A)、NLRP3、IL-1β、TNF-α蛋白的表達(dá)以及前額葉中BDNF、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白的表達(dá)23-27
• 3.6.1 所需溶液的配制23-24
• 3.6.2 蛋白樣品制備24-25
• 3.6.3 SDS-PAGE電泳25-27
• 3.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理27
• 4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-41
• 4.1 Crassifoside H對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞的保護(hù)作用27-29
• 4.1.1 CORT所致SH-SY5Y細(xì)胞損傷模型的建立27-28
• 4.1.2 Crassifoside H對(duì)CORT所致SH-SY5Y細(xì)胞受損的保護(hù)作用28-29
• 4.2 Crassifoside H對(duì)CUMS大鼠的體重以及行為學(xué)的影響29-31
• 4.2.1 Crassifoside H對(duì)CUMS大鼠體重的影響29-30
• 4.2.2 Crassifoside H對(duì)CUMS大鼠糖水偏愛(ài)實(shí)驗(yàn)的影響30-31
• 4.2.3 Crassifoside H對(duì)CUMS大鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)的影響31
• 4.2.4 Crassifos ide H對(duì)CUMS大鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)的影響31
• 4.3 Crassifoside H對(duì)CUMS大鼠HPA軸的影響31-33
• 4.4 Crassifoside H對(duì)CUMS大鼠海馬和前額葉皮層中BDNF、ERK、p-ERK蛋白表達(dá)的影響33-38
• 4.5 Crassifoside H對(duì)CUMS大鼠海馬中5-HT_(1A)受體表達(dá)的影響38
• 4.6 Crassifoside H對(duì)CUMS大鼠海馬中NLRP3、IL-1β、TNF-α表達(dá)的影響38-41
• 5. 討論41-43
• 6. 創(chuàng)新點(diǎn)43
• 7. 結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-50
• 附錄50-51
• 致謝51-52
• 綜述52-59
• 參考文獻(xiàn)57-59

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本文編號(hào)：596307