發(fā)布時(shí)間：2023-02-15 09:00

　　隨著農(nóng)業(yè)生物技術(shù)的發(fā)展,轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物的生產(chǎn)應(yīng)用越來越廣泛,轉(zhuǎn)基因育種已經(jīng)發(fā)展成為一種主要的育種方式,而在轉(zhuǎn)基因育種過程中,轉(zhuǎn)基因性狀的遺傳穩(wěn)定性和表達(dá)穩(wěn)定性一直是育種者特別關(guān)注的事情,也是決定轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物安全應(yīng)用的關(guān)鍵因素。該研究以Southern Blot和ELISA技術(shù)為主要試驗(yàn)方法,研究了具有我國(guó)自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的新型抗草甘膦除草劑轉(zhuǎn)基因棉花和抗蟲棉花外源功能基因在棉花基因組中的整合情況,以及Bt殺蟲基因的代際遺傳和Bt殺蟲蛋白代際表達(dá)的穩(wěn)定性,并取得了如下結(jié)果:1.利用Southern Blot方法,研究了2000-2系譜材料的抗蟲基因遺傳穩(wěn)定性。HindⅢ和EcoRⅠ兩個(gè)限制性內(nèi)切酶消化基因組后的雜交結(jié)果表明,該系譜的所有抗蟲材料,均含有單一插入位點(diǎn)的外源抗蟲基因表達(dá)盒,且該表達(dá)盒能隨著棉花基因組傳遞給其后代,保證了轉(zhuǎn)基因性狀的遺傳穩(wěn)定性。2.利用ELISA方法,檢測(cè)了魯棉系和2000-2系材料的抗蟲蛋白表達(dá)情況。結(jié)果表明Bt基因雖然在不同的材料間的表達(dá)上存在差異,但總體而言可以在此兩個(gè)系譜的抗蟲材料的穩(wěn)定高效表達(dá),體現(xiàn)了轉(zhuǎn)基因性狀的表達(dá)穩(wěn)定性。3.利用Southern Blot...

【文章頁(yè)數(shù)】：49 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
第1章 緒論
    1.1 抗蟲棉的發(fā)展歷程
        1.1.1 蘇云金芽孢桿菌毒素蛋白基因(Bt基因)
        1.1.2 蛋白酶抑制劑基因
        1.1.3 外源凝集素基因
        1.1.4 幾丁質(zhì)酶基因
    1.2 抗除草劑轉(zhuǎn)基因棉花的研究
        1.2.1 抗除草劑轉(zhuǎn)基因棉花的發(fā)展歷程
        1.2.2 草甘膦性質(zhì)與作用機(jī)理
    1.3 外源基因在轉(zhuǎn)基因植物中的整合、表達(dá)的研究分析
    1.4 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容、目的及意義
    1.5 技術(shù)路線
第2章 抗蟲材料Bt基因蛋白表達(dá)量的研究
    2.1 材料與方法
        2.1.1 材料
        2.1.2 方法
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 不同抗蟲棉材料殺蟲蛋白表達(dá)含量
        2.2.2 棉花基因組的提取
        2.2.3 PCR擴(kuò)增目的基因
        2.2.4 探針標(biāo)記的電泳檢測(cè)
        2.2.5 基因組DNA的酶切
    2.3 討論
        2.3.1 CTAB法提取棉花基因組
        2.3.2 抗蟲棉材料Bt基因蛋白表達(dá)量結(jié)果
        2.3.3 抗蟲棉材料中Bt基因的Southern blot結(jié)果
第3章 新型抗除草劑GAT、GR79基因整合位點(diǎn)的分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 方法
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 棉花基因組的提取
        3.2.2 質(zhì)粒DNA的少量提取
        3.2.3 PCR擴(kuò)增目的基因
        3.2.4 基因組DNA的酶切檢測(cè)
        3.2.5 電泳和膠的處理
        3.2.6 轉(zhuǎn)膜與膜的洗滌
        3.2.7 Southern blot結(jié)果
    3.3 討論
第4章 結(jié)論與展望
    4.1 結(jié)論
    4.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3743213