【摘要】：研究背景及研究目的動脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)作為全球性流行的高發(fā)病率、高死亡率的疾病嚴重危害人類健康,近近來在我國其發(fā)病率升高尤為明顯,嚴重危害我國國民的身心健康,并給社會及家庭帶來沉重的經(jīng)濟負擔[1]。究其原因,高膽固醇血癥是致動脈粥樣硬化斑塊發(fā)生進展的關(guān)鍵危險因素之一。多個隨機對照研究證實:他汀、PCSK9抑制劑、膽酸螯合劑等降低血膽固醇水平的藥物,可顯著降低動脈粥樣硬化相關(guān)疾病的發(fā)生率,提示針對膽固醇進行干預(yù)是降低相關(guān)心血管事件的有效手段。膽汁酸在脂質(zhì)代謝中起重要作用,其可促進食物中脂肪和脂溶性維生素在腸道的吸收。在腸內(nèi)約5%的次級膽汁酸隨糞便排出,這是人體最重要的消除膽固醇的方式。中醫(yī)認為高脂血癥等AS致病因素可被稱為“血中之痰濁”。而腸道中過多的脂質(zhì)、膽汁酸等可稱之為“腑中之痰濁”,在AS的發(fā)生發(fā)展中同樣起著非常重要的作用。基于以上理論,我們選用具有自主知識產(chǎn)權(quán)的復(fù)方中藥“痰瘀同治”方藥,在經(jīng)典的高脂血脂聯(lián)合下肢股動脈拉傷誘導(dǎo)小鼠AS模型上,探討復(fù)方中藥降脂及抗AS的效果及可能相關(guān)機制。研究方法1、復(fù)方中藥干預(yù)AS模型小鼠血脂及AS病變的療效研究:1)復(fù)方中藥降脂效果及機制的研究:在高脂血癥聯(lián)合股動脈拉傷復(fù)合模型動物的基礎(chǔ)上,給予復(fù)方中藥或陽性對照藥物阿托伐他汀干預(yù),12周后測定小鼠血漿膽固醇及甘油三酯水平,并行相關(guān)組織定量PCR檢測,觀察各組間HMGR、NPC1L1、SR-B1等基因的表達水平差異;2)復(fù)方中藥抑制AS進展的相關(guān)研究:在上述小鼠模型中,留取相關(guān)組織標本行主動脈瓣根部油紅染色,觀察各組小鼠斑塊負荷情況及內(nèi)中膜厚度比。2、復(fù)方中藥對模型小鼠腸道屏障功能的保護及對血中炎癥因子水平的影響:1)復(fù)方中藥對腸道屏障功能的保護作用研究:在上述模型小鼠中,選擇不同干預(yù)后,經(jīng)腸道注射熒光染料行腸道滲透性實驗,測定血漿FITC-右旋糖酐水平,觀察各組小鼠腸道滲透熒光染料的差異。行腸道Ki-67染色,并對腸道屏障中黏蛋白、緊密連接等相關(guān)基因的表達水平進行定量分析;2)復(fù)方中藥對炎癥因子水平的影響的研究:使用流式細胞學(xué)方法對上述模型小鼠小鼠血漿中IL-1β、IL-17A、IFN-γ、IFN-β、GM-CSG等水平進行定量分析。3、復(fù)方中藥對膽汁酸腸肝循環(huán)及膽汁酸譜的影響:1)復(fù)方中藥對膽汁酸腸肝循環(huán)作用機制的研究:在上述模型小鼠中,選擇不同干預(yù)后,對膽汁酸肝臟合成及肝臟轉(zhuǎn)運相關(guān)基因的表達水平進行定量分析;2)復(fù)方中藥對膽汁酸譜作用的研究:使用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜對上述模型小鼠血漿及糞便中膽酸、脫氧膽酸等進行定量分析。研究結(jié)果1.復(fù)方中藥降低AS小鼠血膽固醇及抑制AS病變的作用:實驗表明連續(xù)給藥干預(yù)12周后,與對照組相比,復(fù)方中藥可顯著降低AS小鼠血漿膽固醇、主動脈斑塊負荷水平及內(nèi)中膜厚度比值(p0.05)。復(fù)方中藥可顯著升高腸道NPC1LI1及SR-B1的表達(p0.05),而對血漿甘油三酯水平以及肝臟HMGR、ABCG5/8的表達無顯著作用(p0.05),這點不同于傳統(tǒng)他汀類藥物。2.復(fù)方中藥保護腸道屏障功能的作用研究:給藥12周后,復(fù)方中藥可顯著降低模型小鼠的腸道滲透性(p0.05),其機制可能與顯著提高腸道m(xù)uc1、Cldn1、Ocln、IL22Rα1基因表達水平(p0.05),同時顯著減低腸道IL-10Rβ的表達(p0.05)密切相關(guān)。對于腸道屏障功能相關(guān)的其他基因,諸如muc3、Cldn2、Tjp等復(fù)方中藥并未表現(xiàn)出調(diào)節(jié)作用(p0.05),提示復(fù)方中藥的腸道屏障功能的保護具有一定的選擇性。復(fù)方中藥可顯著降低促炎因子IL-6、IL-12、IFN-γ、MCP-1的水平(p0.05),同時可顯著升高抗炎因子IFN-β的水平(p0.05)。3.復(fù)方中藥調(diào)節(jié)膽汁酸腸肝循環(huán)進而降脂抗動脈硬化的作用機制研究:連續(xù)給藥干預(yù)12周后,與對照組相比,復(fù)方中藥可顯著增加血漿TCA、TCDCA水平及糞便DCA、TDCA、TLCA的水平(p0.05),同時顯著減少糞便中CDCA、TCDCA水平及血中DCA的水平(p0.05),與之對應(yīng)的是復(fù)方中藥顯著增加肝臟BSEP、Oatp2基因表達及腸道Ostα/β、FXR的基因表達(p0.05),同時顯著降低腸道ASBT、IBABP、FXR、fgf15基因表達及肝臟fgfr4基因的表達(p0.05),表明復(fù)方中藥可改變膽汁酸的腸肝循環(huán)通路,這可能是其調(diào)節(jié)血脂進而抗AS的作用機制。同時對肝臟Cyp7a1、Cyp8b1、Ntcp、Oatp1、SHP等基因表達無顯著作用(p0.05),提示與傳統(tǒng)的他汀類藥物的作用機制有顯著差異。研究結(jié)論本研究通過對本實驗室前期系列研究成果的分析,提出復(fù)方中藥可能通過調(diào)節(jié)膽汁酸腸肝循環(huán)及改善腸道滲透性等多個方面來發(fā)揮其調(diào)脂抗AS的假說,研究發(fā)現(xiàn):1)復(fù)方中藥干預(yù)模型小鼠12周后,可顯著降低AS小鼠血漿膽固醇水平及斑塊負荷,與他汀類藥物作用靶點不同,其并不影響肝臟膽固醇合成的限速酶HMGR的表達水平;2)進行腸道滲透性實驗及相關(guān)靶點研究發(fā)現(xiàn):復(fù)方中藥可顯著降低模型小鼠的腸道滲透性,該作用主要通過上調(diào)muc1、cldn1、ocln等基因的表達來實現(xiàn),且與和作用于腸道的IL-22相關(guān)受體降低密切相關(guān);同時其可促進抗炎因子IFN-β的分泌,抑制促炎因子IL-6、IL-12、IFN-γ、MCP-1的釋放3)進一步研究揭示:復(fù)方中藥對膽汁酸腸肝循環(huán)中介導(dǎo)膽汁酸合成相關(guān)基因的表達無顯著影響,主要是通過作用于腸肝循環(huán)相關(guān)的基因進而發(fā)揮調(diào)節(jié)作用,這其中包括提高BSEP、Ostα的基因表達水平,抑制ASBT、IBABP基因表達水平等,此外復(fù)方中藥還可調(diào)節(jié)膽汁酸重要的調(diào)控基因FXR水平,這可能是復(fù)方中藥調(diào)節(jié)膽汁酸循環(huán)的重要靶點。綜合上述內(nèi)容我們可以得出結(jié)論:復(fù)方中藥可以通過去除“腑中之痰濁”,即調(diào)節(jié)膽汁酸腸肝循環(huán)并改善腸道粘膜的屏障功能,進而發(fā)揮其降脂抗AS的作用,這可能是其不同于傳統(tǒng)他汀類藥物降脂抗AS的潛在新機制。
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【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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1 陳可冀;;活血化瘀方藥降低心血管風險的可能性探索[J];中國中西醫(yī)結(jié)合雜志;2008年05期

2 梁俊清;孫士然;吳以嶺;徐海波;張秋艷;吳曉莉;王宏濤;賈振華;魏聰;董曉偉;;絡(luò)氣虛滯型血管內(nèi)皮功能障礙病證結(jié)合動物模型的建立及通絡(luò)方藥干預(yù)研究[J];山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2008年01期

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本文編號：2464403