本文選題：EGFR酪氨酸激酶　切入點：耐藥性　出處：《浙江大學(xué)》2014年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：惡性腫瘤是一類嚴(yán)重威脅人類健康的常見病和多發(fā)病,目前因惡性腫瘤引起的死亡占據(jù)人類所有疾病死亡率的第二位。而腫瘤細(xì)胞在用藥過程中產(chǎn)生的耐藥問題是腫瘤難以根治的重要原因之一。EGFR(表皮細(xì)胞生長因子受體)的信號傳導(dǎo)關(guān)乎細(xì)胞的凋亡、增殖、分化、遷移和細(xì)胞周期循環(huán),它在腫瘤細(xì)胞中往往過度表達(dá),并且與腫瘤的形成和惡化息息相關(guān),成為近年來備受關(guān)注的熱門靶點。通過對EGFR結(jié)構(gòu)的分析,選擇特定部位作為靶點,干擾其信號傳導(dǎo),已經(jīng)成為開發(fā)抗癌和抗腫瘤藥物的有效手段。然而,目前臨床上針對該靶點的第一代EGFR抑制劑如Gefitini、Erlotinib等也同樣存在著用藥過程中產(chǎn)生的耐藥性問題,導(dǎo)致后期腫瘤細(xì)胞對藥物的脫敏。其中,T790M突變是產(chǎn)生該獲得性耐藥的重要原因。以Afatinib為代表的第二代EGFR抑制劑通過藥物分子結(jié)構(gòu)中所含有的親電反應(yīng)官能團(tuán)可以實現(xiàn)與靶蛋白之間的共價結(jié)合,提高抑制劑與靶蛋白的親和力,從而增強(qiáng)抗癌效果,這為解決第一代EGFR抑制劑的耐藥性問題提供了新的思路。 本論文第一、二部分對臨床應(yīng)用的小分子EGFR抑制劑的構(gòu)效關(guān)系以及文獻(xiàn)中所報道的配體-受體蛋白復(fù)合物信息的進(jìn)行了綜述,在此基礎(chǔ)上設(shè)計合成了4類4-芳胺基喹唑啉類衍生物。該部分工作主要的創(chuàng)新點是在傳統(tǒng)的喹唑啉母核的6-位側(cè)鏈引入三元吖丙啶環(huán)片段。吖丙啶環(huán)是一類較為活潑的半胱氨酸捕獲基團(tuán),以吖丙啶環(huán)替代第二代非可逆EGFR抑制劑中的丙烯酰胺片段,有望開發(fā)出一類結(jié)構(gòu)新穎并擁有自主知識產(chǎn)權(quán)的藥物分子。所有合成的目標(biāo)化合物均經(jīng)過1HNMR、 HPLC-HRMS和熔點表征。 在體外腫瘤細(xì)胞篩選中,所設(shè)計的化合物均對EGFR高表達(dá)的人表皮癌細(xì)胞株A431WT, overexpression以及Gefitinib耐藥的人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株H1975L858R/T790M有較好的增殖抑制活性。在激酶水平上,化合物在EGFRWT、EGFRT790M以及EGFRL858R同樣展示了較好的抑制活性。部分化合物在細(xì)胞和激酶水平上的抑制活性與陽性Afatinib/Canertinib相當(dāng)。此外,所選取的苗頭化合物在EGFR低表達(dá)的細(xì)胞株SW620和SKBr上增殖抑制效果較差。體外Cysteine捕獲實驗和Western Blotting洗脫實驗也驗證了該類化合物可與Cysteine發(fā)生共價結(jié)合,但是其共價結(jié)合能力稍弱于陽性Canertinib。這樣的結(jié)果預(yù)示著該類化合物可能具備較好的選擇性和安全性。所合成的上述化合物的后續(xù)成藥性評價也正在進(jìn)行之中。 化合物庫的高通量篩選是新藥開發(fā)的源頭之一,是整個新藥開發(fā)的關(guān)鍵部分。構(gòu)建結(jié)構(gòu)多樣性的化合物庫對先導(dǎo)化合物的發(fā)現(xiàn)、先導(dǎo)化合物結(jié)構(gòu)的優(yōu)化具有重要的現(xiàn)實意義。論文的第三部分,利用新化學(xué)方法學(xué)結(jié)合液態(tài)組合化學(xué)構(gòu)建了6類共計800余個全新結(jié)構(gòu)的化合物。其中,對于嗎啡類衍生化合物庫,在合成方法學(xué)研究的同時,對該類化合物進(jìn)行了較為詳細(xì)的體內(nèi)外鎮(zhèn)痛活性研究,發(fā)現(xiàn)了3個先導(dǎo)化合物；其余的化合物庫分子也進(jìn)行了初步的體外抗腫瘤活性篩選,在本論文中選取其中三個化合物庫進(jìn)行了介紹。6個化合物庫針對其他不同生物靶點的活性評價也正在進(jìn)行之中。
[Abstract]:Malignant tumor is a serious threat to human health common disease, the death caused by malignant tumor accounted for second of all human diseases mortality. Drug resistance and tumor cells in the treatment process is one of the important causes of cancer to cure.EGFR (epidermal growth factor receptor) signaling related to cell the apoptosis, proliferation, differentiation, migration and cell cycle in tumor cells, it is often over expression and tumor formation and progression are closely related, has become a popular target of concern in recent years. Through the analysis of the structure of EGFR, select the specific site as a target, the interference signal transduction, has become effective means the development of anticancer and antitumor drugs. However, the current clinical according to the target of the first generation of EGFR inhibitors such as Gefitini, Erlotinib etc. also exists in the course of medication The problem of drug resistance in the late stage of tumor cells to cause desensitization of drugs. Among them, T790M mutation is an important reason of the acquired resistance. To achieve a combination of target protein covalent electrophilic reaction between functional groups can be the second generation of EGFR inhibitors to Afatinib as the representative of the drug molecules contained, improve inhibitor and target protein affinity, thus enhance the anti-cancer effect, which provides a new way to solve the problem of resistance to the first generation of EGFR inhibitors.
In the first, second part, small molecule EGFR inhibitor to the clinical application of the structure-activity relationship and ligand - reported the receptor protein complexes were reviewed, based on the design and synthesis of 4 kinds of 4- aromatic amino quinazoline derivatives. The innovation of the main part of the work is the introduction of three yuan a C in the traditional pyridine quinazoline nucleus 6- side chain ring fragment. Aziridine ring is a kind of active cysteine capture groups, instead of the second generation of non reversible EGFR inhibitor of acrylamide fragment to aziridine ring, is expected to develop a novel structure and has independent intellectual property rights of the drug. All the target compounds were synthesized by 1HNMR, HPLC-HRMS and melting point characterization.
In the screening of tumor cells in vitro, compounds are designed for high EGFR expression of human epidermal carcinoma cell line A431WT, overexpression and Gefitinib resistant human non-small cell lung cancer cell line H1975L858R/T790M has good inhibitory activity. The proliferation level of EGFRWT kinase, EGFRT790M and EGFRL858R in the compound, also showed good inhibitory activity. Some of the compounds in the cell and inhibit the activity of kinase level and positive Afatinib/Canertinib. In addition, the signs of compounds in the low expression of EGFR and SKBr on SW620 cells proliferation inhibition effect. In vitro Cysteine capture experiment and Western Blotting elution experiments demonstrated that the compounds can be covalently combined with Cysteine, but its covalent binding ability weaker than positive Canertinib. this result indicates that the compounds may have a better choice The evaluation of the subsequent drug resistance of the synthesized compounds is also under way.
High throughput screening of compound libraries is one source of new drug development, is the key part of the development of new drugs. To construct the diversity of compound libraries found on the lead compound, has important practical significance to optimize the structure of the lead compound. The third part of the thesis, using the new chemical methodology 6 categories totaling more than 800 new structure the liquid compounds combining the construction of combinatorial chemistry. Among them, the morphine derivative compound libraries, research in the synthesis method, the compounds were studied in vitro and in vivo analgesic activity in detail, 3 compounds were found; the rest of the molecular compound library also conducted a preliminary screening of their antitumor activity in vitro and in this paper selected three compounds were introduced.6 compounds library for activity evaluation of different biological targets is underway.

【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R914.5;R91

【共引文獻(xiàn)】

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1 王洪波;陳曉光;;EGFR抑制劑耐藥機(jī)制研究的新進(jìn)展[J];國際藥學(xué)研究雜志;2007年05期

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4 Jian-Wei Zhang;Yuan-Yuan Zhao;Ying Guo;Cong Xue;Zhi-Huang Hu;Yan Huang;Hong-Yun Zhao;Jing Zhang;Xuan Wu;Wen-Feng Fang;Yu-Xiang Ma;Li Zhang;;The impact of both platinum-based chemotherapy and EGFR-TKIs on overall survival of patients with advanced non-small cell lung cancer[J];Chinese Journal of Cancer;2014年02期

5 朱翔;梁莉;柳晨;尹文t$;陳森;曹寶山;;Nrf2在EGFR基因突變肺腺癌中的表達(dá)及其與EGFR-TKIs療效間的相關(guān)性研究[J];中國肺癌雜志;2014年02期

6 高新亮;付彤;張科偉;李洋;張克劍;賈騰;劉灝;劉偉;;非小細(xì)胞肺癌并發(fā)孤立性腎上腺轉(zhuǎn)移患者手術(shù)療效的系統(tǒng)回顧及pooled分析[J];吉林大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2014年02期

7 梁淑芳;郭曄;馬克威;;不同EGFR突變狀態(tài)晚期肺腺癌患者TKI治療效果比較[J];吉林大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2014年02期

8 熊歡;張忠來;賴斌;羅洪亮;朱培謙;;108例結(jié)腸癌患者HER2基因表達(dá)及其意義[J];重慶醫(yī)學(xué);2014年02期

9 N.C.Desai;N.R.Shihory;G.M.Kotadiya;;Facile synthesis of benzimidazole bearing 2-pyridone derivatives as potential antimicrobial agents[J];Chinese Chemical Letters;2014年02期

10 余洋;劉洋;趙煒疆;;RNA干擾細(xì)胞黏附分子L1表達(dá)逆轉(zhuǎn)膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞多藥耐藥[J];中國神經(jīng)腫瘤雜志;2013年04期

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2 Yi Yang;Peng R.Chen;;Site-specific dual labeling of EGFR in living cells[A];第八屆全國化學(xué)生物學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2013年

3 XUEQIN CHEN;YUELONG PAN;SHIRONG ZHANG;DADONG CHEN;SHAOYU YANG;XIN LI;SHENGLIN MA;;Rechallenge with gefitinib after severe drug-induced hepatotoxicity in a patient with advanced non-small cell lung cancer:A case report and literature review[A];2013年浙江省抗癌協(xié)會生物治療專委會年會文集[C];2013年

4 黃挺;葉知鋒;;EGFR-TKIs治療晚期非小細(xì)胞肺癌出現(xiàn)單純腦轉(zhuǎn)移的探討[A];2013年第六屆國家級分子靶點藥物治療新進(jìn)展學(xué)習(xí)班暨浙江省腫瘤化療學(xué)術(shù)年會論文集[C];2013年

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6 張賀娜;顏建周;唐吉鋒;邵蓉;;吉非替尼與厄洛替尼治療非小細(xì)胞肺癌效果的間接比較[A];2012年中國藥學(xué)大會暨第十二屆中國藥師周論文集[C];2012年

7 ;中國表皮生長因子受體基因敏感突變和間變淋巴瘤激酶融合基因陽性非小細(xì)胞肺癌診斷治療指南(2014版)[A];中國腫瘤內(nèi)科進(jìn)展 中國腫瘤醫(yī)師教育（2014）[C];2014年

8 石遠(yuǎn)凱;;非小細(xì)胞肺癌靶向治療的發(fā)展趨勢[A];中國腫瘤內(nèi)科進(jìn)展 中國腫瘤醫(yī)師教育（2014）[C];2014年

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10 Shan Chen;Xiaoxia Liu;Wenfei Gong;Huan Yang;Daofei Luo;Xialin Zuo;Wenshi Li;Ping Wu;Li Liu;Qian Xu;Aimin Ji;;Combination therapy with VEGFR2 and EGFR siRNA enhanced the antitumor effect of cisplatin in non-small cell lung cancer xenografts[A];2014年廣東省藥師周大會論文集[C];2014年

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本文編號：1629783