本文關(guān)鍵詞：應(yīng)用親和超濾—液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)篩選中藥靶酶抑制劑

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【摘要】：醫(yī)學(xué)上常用酶抑制劑來治療因酶異常表達(dá)所引起的人類疾病。我國中藥資源豐富,從中藥中篩選低毒、高效的靶酶抑制劑,對(duì)發(fā)現(xiàn)創(chuàng)新藥物先導(dǎo)化合物、創(chuàng)制具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的新藥具有重要意義。傳統(tǒng)的分離篩選方法復(fù)雜耗時(shí)、選擇性差,嚴(yán)重制約了中草藥活性成分的快速發(fā)現(xiàn)。親和超濾-液質(zhì)聯(lián)用(AS/UF-LC-MS)技術(shù)具有靈敏度高、分析快速,集活性篩選與結(jié)構(gòu)鑒定于一體等優(yōu)點(diǎn),目前主要用于組合化學(xué)庫中活性成分的篩選,但在中藥提取物活性成分篩選中應(yīng)用較少。本研究發(fā)展基于親和超濾-液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)篩選中草藥中靶酶抑制劑,為中草藥復(fù)雜體系中靶酶抑制劑的快速篩選、鑒別提供新思路、新方法。1.親和超濾-液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)篩選中草藥中乙酰膽堿酯酶抑制劑實(shí)驗(yàn)采用了電鰻乙酰膽堿酯酶作為靶酶,AChI為底物,DTNB為顯色劑,SDS為反應(yīng)終止劑,采用酶標(biāo)儀比色法對(duì)49種藥材的粗提物進(jìn)行了乙酰膽堿酯酶抑制活性評(píng)價(jià),篩選出效果較好的四種粗提物-黃柏80%乙醇提取物、元胡80%乙醇提取物、丹參乙酸乙酯提取物和黃連80%乙醇提取物,并測(cè)定其半抑制濃度。通過對(duì)親和超濾孵育條件、色譜條件進(jìn)行優(yōu)化,建立針對(duì)乙酰膽堿酯酶特性親和超濾-液質(zhì)聯(lián)用體系。并使用建立好的體系從黃連80%乙醇提取物中篩選鑒定出具有顯著抑制效果的化合物5個(gè)。采用半制備液相制備活性化合物,通過質(zhì)譜和核磁技術(shù)對(duì)其進(jìn)行鑒定,分別為非洲防己堿、藥根堿、黃連堿、巴馬汀、黃連素。采用比色法測(cè)定其半抑制濃度IC50值,分別為25.09,37.86,20.64,13.90和48.51 mg L-1。2.中草藥中酪氨酸酶抑制劑的篩選實(shí)驗(yàn)采用蘑菇酪氨酸酶為靶酶,L-DOPA為底物,采用酶標(biāo)儀進(jìn)行微量酶活性抑制評(píng)價(jià),從21種中藥的粗提物中篩選出酪氨酸酶抑制效果較好的粗提物,如:牡丹皮80%乙醇提取物,甘草乙酸乙酯提取物,苦參乙酸乙酯提取物,桑白皮乙酸乙酯提取物。并測(cè)定其半抑制濃度IC50值分別為:746.20,62.18,63.82和210.17 mg L-1。中藥提取物的自由基清除能力可以拮抗絡(luò)氨酸酶的活性,本研究對(duì)篩選到的具有較好絡(luò)氨酸酶抑制活性的中藥提取物進(jìn)行了自由基清除能力檢測(cè),其IC50值分別為:45.55,298.87,1096.6和992.27 mg L-1。
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R283.6

【引證文獻(xiàn)】

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 于能江;趙毅民;郭繼芬;任鳳霞;;利用親和超濾和HPLC-DAD-ESIMS技術(shù)尋找中草藥提取物中的抗炎活性成分[A];第八屆全國中藥和天然藥物學(xué)術(shù)研討會(huì)與第五屆全國藥用植物和植物藥學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2005年

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本文編號(hào)：1301108