本文關(guān)鍵詞：中藥鴉膽子中鴉膽苦素A和鴉膽苦素B代謝產(chǎn)物的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：我國中藥資源十分豐富,利用中藥治療和預(yù)防疾病已有幾千年的歷史。但部分中藥具有一定的毒性,因使用不當(dāng)引起的中藥中毒事件屢有發(fā)生。傳統(tǒng)中藥鴉膽子,是植物鴉膽子[Brucea javanica(Linnaeus)Merrill]的成熟果實(shí),又名老鴉膽、鴨蛋子、苦榛子、苦參子等,在我國主要產(chǎn)于南方沿海熱帶、亞熱帶地區(qū),國外主要分布在斯里蘭卡、馬來群島和澳洲北部�！吨兴幋筠o典》中記載鴉膽子:“清熱解毒,截瘧,止痢,腐蝕贅疣。用于痢疾,瘧疾;外治贅疣,雞眼”�，F(xiàn)代研究表明,鴉膽子還具有抗腫瘤、抗病毒、抗阿米巴的藥理作用,用于白血病、瘧疾、阿米巴痢疾等疾病的治療。鴉膽子油是當(dāng)代治療腫瘤最常用的中藥制劑之一,主要用于治療肺癌及肺癌腦轉(zhuǎn)移、肝癌和各種消化道腫瘤。據(jù)報(bào)道,鴉膽子殼及種子均有毒,其中毒主要由服用方法不當(dāng)(如直接吞服、嚼服等)或過量服用引起。鴉膽子化學(xué)組成復(fù)雜,毒性主要源于極性較大的苦味成分,該成分為一種劇烈的細(xì)胞原漿毒,不僅對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)有很強(qiáng)的抑制作用,對(duì)肝腎實(shí)質(zhì)也有一定的損害,并可引起內(nèi)臟動(dòng)脈顯著擴(kuò)張導(dǎo)致出血。但有關(guān)鴉膽子中毒性成分代謝產(chǎn)物的法醫(yī)學(xué)資料十分匱乏,給鴉膽子中毒的法醫(yī)學(xué)鑒定帶來了極大的困難。本實(shí)驗(yàn)首次以鴉膽子成熟種子中分離純化得到的鴉膽苦素A(Bruceine A)和鴉膽苦素B(Bruceine B)為研究對(duì)象,采集大鼠灌胃給藥后膽汁、血漿、尿液和糞便中的代謝產(chǎn)物,運(yùn)用超高效液相色譜四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜(UPLC-qTOF-MS),聯(lián)合Peak View 2.2、Metabolitepilot 1.5等軟件對(duì)生物樣本進(jìn)行分析處理和鑒定,建立鴉膽子中有毒單體化合物及其代謝產(chǎn)物的檢驗(yàn)方法,為臨床用藥的安全及中藥中毒案件的法醫(yī)學(xué)鑒定提供一定的理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。目的:建立一種UPLC-qTOF-MS的方法,對(duì)大鼠分別灌胃給藥鴉膽苦素A和鴉膽苦素B后,其血漿、膽汁、尿液和糞便中的代謝產(chǎn)物進(jìn)行鑒定,并推測鴉膽苦素A和鴉膽苦素B裂解規(guī)律,為鴉膽子中毒案件的法醫(yī)毒理學(xué)研究提供參考。方法:1生物樣品的采集:取SD大鼠(Sprague-Dawley,SD),雄性,24只,體重220±20 g,隨機(jī)分為A、B兩大組,每組再隨機(jī)分4小組(血漿組、膽汁組、尿液和糞便組、對(duì)照組),每小組3只,A組以20 mg/kg鴉膽苦素A的劑量,B組以5 mg/kg鴉膽苦素B的劑量對(duì)大鼠灌胃給藥,對(duì)照組給等體積0.5%羧甲基纖維素鈉(CMC),分別收集給藥后5 min、10 min、15 min、20 min、25 min、30 min、45 min、1 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h和24 h的血漿樣品,24 h內(nèi)的膽汁樣品,48 h內(nèi)的尿液樣品和糞便樣品。2生物樣品的預(yù)處理:分別合并所有的膽汁、尿液和血漿樣品,用3倍量的乙酸乙酯萃取3次,合并乙酸乙酯層,32℃減壓蒸干后用甲醇復(fù)溶;合并所有的糞便樣品,通風(fēng)干燥后研磨粉碎,加入50 m L乙酸乙酯超聲萃取3次,每次20 min,過濾后32℃減壓蒸干,甲醇復(fù)溶。3液-質(zhì)聯(lián)用分析條件:色譜柱為Phenomenex-Kinetex?C18分析柱(100 mm×2.1 mm,2.6μm),流動(dòng)相為甲醇和0.05%乙酸銨水溶液,梯度洗脫;高分辨質(zhì)譜采用電噴霧(electrospray ionization,ESI)源,離子源溫度(turbo spray temperature):550℃。正離子噴霧電壓(ion spray voltage)為:5500 V霧化氣(Gas 1):55 psi;加熱氣(Gas 2):55 psi。全掃描采集,動(dòng)態(tài)背景扣除(DBS)和信息依賴采集(IDA)觸發(fā)二級(jí)碎片采集,每一循環(huán)采集8個(gè)最強(qiáng)峰的二級(jí)質(zhì)譜圖,運(yùn)行時(shí)間40 min。4代謝產(chǎn)物的分析:運(yùn)用數(shù)據(jù)后處理分析軟件Metabolitepilot 1.5、Peak View 2.2和Chem Draw Professional 15.0綜合分析數(shù)據(jù),得到化合物的精確分子質(zhì)量、分子式、一級(jí)和二級(jí)質(zhì)譜圖。對(duì)質(zhì)譜信息解析結(jié)構(gòu),推斷可能的代謝產(chǎn)物并與Chemspider數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對(duì)。結(jié)果:本研究共鑒定出鴉膽苦素A在大鼠體內(nèi)的代謝產(chǎn)物5種,膽汁中1種,尿液中2種,糞便中4種;鴉膽苦素B在大鼠體內(nèi)的代謝產(chǎn)物3種,膽汁中2種,尿液中2種,糞便中2種。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)采用超高效液相色譜四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù),發(fā)現(xiàn)并鑒定了鴉膽苦素A和鴉膽苦素B灌胃大鼠后的代謝產(chǎn)物,對(duì)鴉膽苦素A和鴉膽苦素B可能的裂解規(guī)律進(jìn)行了推測,為中藥鴉膽子中毒的法醫(yī)學(xué)鑒定提供了一定的理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：鴉膽苦素A 鴉膽苦素B UPLC-q TOF-MS 代謝物鑒定 中藥 毒性
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：D919
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文縮寫11-12
• 引言12-15
• 材料與方法15-21
• 結(jié)果21-26
• 附圖26-47
• 討論47-50
• 結(jié)論50-51
• 參考文獻(xiàn)51-54
• 綜述 鴉膽子屬苦木內(nèi)酯類化合物的研究進(jìn)展54-73
• 參考文獻(xiàn)68-73
• 致謝73-74
• 個(gè)人簡歷74

【相似文獻(xiàn)】

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