本文關(guān)鍵詞：基于UPLC Q-TOF MS技術(shù)對四物湯藥效物質(zhì)基礎(chǔ)深入研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《安徽醫(yī)科大學(xué)》 2014年

基于UPLC Q-TOF MS技術(shù)對四物湯藥效物質(zhì)基礎(chǔ)深入研究

練杭蕓  

【摘要】：中藥復(fù)方在傳統(tǒng)分離分析研究過程中利用的HPLC、HPTLC等技術(shù)，分析工作量大，速度慢，對對照品依賴度很高，能夠發(fā)現(xiàn)的四物湯中的化學(xué)成分也較少，而現(xiàn)今出現(xiàn)UPLC、LC-MS等技術(shù)，分析速度大幅提高，，勞動強度明顯減小，在沒有對照品的情況下也能發(fā)現(xiàn)較多的四物湯化學(xué)成分。本文采用新技術(shù)更加科學(xué)深入地認(rèn)識四物湯的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)以及配伍變化，為指導(dǎo)臨床正確使用該類藥物提供實驗依據(jù)。 目的：運用超高效液相色譜-四極桿飛行時間質(zhì)譜（UPLC-TOF MS）技術(shù)平臺和計算機輔助技術(shù)，深入認(rèn)識四物湯水煎液的化學(xué)組成及其配伍變化。在研究四物湯復(fù)方的基礎(chǔ)上提出了中藥配對比較的研究思路，采用UPLC-QTOF-MS技術(shù)對市場上正規(guī)銷售的赤芍和白芍飲片、當(dāng)歸和川芎飲片進行比較，了解中藥赤芍和白芍煎液、當(dāng)歸和川芎煎液的化學(xué)成分差異。通過對兩組藥對物質(zhì)基礎(chǔ)研究可以間接考察藥理作用差異，進而為揭示藥效差異的研究提供實驗依據(jù)。 方法：本研究主要利用UPLC-Q/TOF-MS技術(shù)，并在這個平臺的基礎(chǔ)上，提供相應(yīng)的幾種改進方法，對四物湯的化學(xué)成分進行深入研究。首先通過查閱大量文獻以及使用Formular analyzer插件創(chuàng)建四物湯四種單藥所在屬際（包括地黃屬、當(dāng)歸屬、白芍屬、藁本屬）植物化合物文獻數(shù)據(jù)庫，建立四物湯的化學(xué)指紋圖譜，利用Masslynx4.1軟件獲取data-set中的數(shù)據(jù)保存至Excel表中，通過四物湯以及四組單藥的樣品組與空白組比較，實現(xiàn)信號濾噪。用自制自動化預(yù)鑒別Searcher軟件與自建四物湯化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫數(shù)據(jù)進行自動化比對，并用自制Sourcer程序分析四物湯信號的單藥來源，實現(xiàn)化學(xué)成分快速鑒別。用t檢驗p值排序法尋找四物湯藥味共煎煮過程中含量發(fā)生變化的化學(xué)成分。利用UPLC/Q-TOFMS技術(shù)建立白芍、赤芍兩味單藥水煎液的化學(xué)指紋圖譜并與芍藥屬數(shù)據(jù)庫進行匹配，數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析采用MassLynx4.1軟件中主成分分析和正交偏最小二乘辨別分析。成分鑒別采用與標(biāo)準(zhǔn)品比較，基于自制自動化預(yù)鑒別軟件和芍藥屬質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫的一級質(zhì)譜精確質(zhì)荷比分析，二級質(zhì)譜碎片分析。當(dāng)歸、川芎兩味單藥水煎液采用同樣的研究方法，利用自制自動化預(yù)鑒別軟件，通過一級質(zhì)譜精確質(zhì)荷比信息，將統(tǒng)計數(shù)據(jù)與自主研發(fā)當(dāng)歸、川芎兩藥化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫進行匹配。得到初步結(jié)果后再與標(biāo)準(zhǔn)品比較進行驗證分析。 結(jié)果：本文建立了四物湯單藥屬際化學(xué)文獻數(shù)據(jù)庫，包含文獻化合物分子式、化學(xué)名等信息共1000余項，從四物湯水煎液中與四物湯化學(xué)文獻數(shù)據(jù)庫匹配后快速鑒別信號達187個，其中根據(jù)信號的質(zhì)荷比鑒別出19種存在多離子證據(jù)的化學(xué)成分。四物湯共煎煮后大多數(shù)成分較單獨煎煮有減少的趨勢，只有極少數(shù)成分在單煎液中沒有信號或信號很弱，而在共煎液中信號明顯，在正、負(fù)離子模式下各有3個信號上調(diào)趨勢明顯，推測共煎煮過程中可能只有極少量新生成的化學(xué)成分或藥味固有成分煎出大幅增加。氧化芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷分別是赤芍和白芍水煎液中貢獻度最大的兩種差異性化合物。此外，赤芍藥苷、1’-O-benzoylsucrose、牡丹皮苷F、牡丹皮苷C/苯甲酰羥基芍藥苷、牡丹皮苷E、(1S,2S,4R)-trans-2-hydroxy-1,8-cineole-β-D-glucopyranoside、蔗糖、沒食子酰芍藥苷/沒食子酰芍藥內(nèi)酯苷等可能也在赤芍、白芍煎液中含量差異明顯。從當(dāng)歸、川芎水煎液中快速鑒別信號121個，得到初步結(jié)果后再進行標(biāo)準(zhǔn)品比較驗證分析，結(jié)果表明三糖類化合物和含有丁烯基苯酞結(jié)構(gòu)的未知化合物可能是當(dāng)歸和川芎煎液的主要差異化學(xué)標(biāo)記物。 結(jié)論：本研究探討了在共煎煮過程中四物湯化學(xué)成分的變化，發(fā)現(xiàn)了有少量新生成的化學(xué)成分,將依據(jù)這些新生成化合物的信號質(zhì)荷比深入考察，進而為揭示配伍后四物湯藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的科學(xué)內(nèi)涵和變化規(guī)律提供實驗依據(jù)。探討了兩個重要maker化合物分別在白芍和赤芍、當(dāng)歸和川芎煎液中的藥理作用，間接闡明兩組藥對功效差異的本質(zhì)，為研究兩藥對藥效差異及臨床研究提供了參考。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R285
【目錄】：

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李偉;基于顯微圖像技術(shù)的四物湯調(diào)節(jié)微循環(huán)機制研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2010年

2 練杭蕓;基于UPLC Q-TOF MS技術(shù)對四物湯藥效物質(zhì)基礎(chǔ)深入研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2014年

3 袁海梅;芩術(shù)四物湯治療原發(fā)性痛經(jīng)的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2013年

4 曲曉妮;四物湯及其拆方對血虛大鼠血管內(nèi)皮損傷的影響研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2010年

5 李鷹飛;四物湯化學(xué)成分配伍的補血作用及其機理研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2004年

6 佟麗;應(yīng)用基因芯片技術(shù)研究四物湯補血作用機理[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2003年

7 霍學(xué)慧;四物湯及其類方的研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2004年

8 梁淼;基于P450酶的四物湯配伍規(guī)律研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2014年

9 朱力軍;四物湯及其拆方補血作用機理和物質(zhì)基礎(chǔ)的研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2003年

10 李煒;香附四物湯用于氣滯血瘀證原發(fā)性痛經(jīng)大鼠體內(nèi)過程研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2013年

  本文關(guān)鍵詞：基于UPLC Q-TOF MS技術(shù)對四物湯藥效物質(zhì)基礎(chǔ)深入研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：55981