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天麻多糖的提

發(fā)布時間:2016-05-18 06:00

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天麻多糖的提取、純化及活性研究

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【中文摘要】:

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    【中文摘要】天麻(Gastrodia elata Blume)屬蘭科非自養(yǎng)型植物的干燥塊莖,是我國傳統(tǒng)的名貴中藥,主產于陜西、云南、貴州及四川等省。中醫(yī)臨床主要用于治療頭痛眩暈、驚風抽搐、肢體麻木、面肌痙攣、高血壓、冠心病等疾病。目前,國內天麻方面的研究僅限于天麻素,而關于天麻中多糖的相關信息未見任何系統(tǒng)的報道。故本研究旨在對天麻多糖的提取分離和性質活性方面做初步的摸索,為今后天麻多糖的利用和開發(fā)奠定基礎。本試驗以天麻作為原料,系統(tǒng)的研究了天麻多糖水提取和超聲波提取的技術條件,對天麻多糖進行了分離純化研究,并對其抗氧化和抑菌的活性進行了評價,對純化后所得兩種多糖的理化性質和單糖組成進行了探討,研究的主要結果如下:1.建立了以蒽酮-硫酸法測定天麻多糖含量的測定方法。2.采用傳統(tǒng)水提取和超聲波技術提取天麻多糖,在單因素試驗的基礎上,采用響應面分析法對天麻多糖提取工藝進行優(yōu)化。傳統(tǒng)水提取的最優(yōu)工藝參數為:提取溫度為58℃,提取時間36min,料水比1:37,天麻多糖提取率為9.25%。超聲波水提取天麻多糖的最優(yōu)工藝參數為:提取溫度為66℃,提取時間34min,料水比1:45,天麻多糖提取率為32.78%。超聲波浸提時,粗多糖提取率均比傳統(tǒng)熱水浸提時高。3.天麻多糖的分離純化。經試驗確定了以下純化路線:進行乙醇分級醇析,分別收集乙醇濃度為0-40%和40%~80%之間沉淀出的多糖,得到粗多糖G-40和G-80;再經木瓜蛋白酶-Sevag法脫蛋白,透析法除去小分子雜質及鹽類等步驟,逐級提高樣品的純度,得到多糖GeB40和GeB80;最后經DEAE-52纖維素柱層析,選取一定最大洗脫峰范圍進行多糖的收集,得到多糖GeB40-1和GeB80-4。紫外光譜結果表明該多糖組分不含蛋白質等雜質。4.多糖GeB40-1的理化性質:白色粉末狀;可溶于水;不溶于無水乙醇、乙醚、丙酮、氯仿、正丁醇等有機溶劑;不含有淀粉類物質、還原糖類物質和蛋白質核酸類物質;紅外光譜分析表明分子結構中存在α-型糖苷鍵;分子量大于8000D;比旋光度為[α]~(20) =+150.5°;熔點為270.3-271.1℃。采用離子色譜法分析單糖組成結果為:該多糖由L-鼠李糖、D-半乳糖、D-葡萄糖、D-木糖和D-甘露糖五種單糖組成,五種單糖摩爾數之比L-鼠李糖:D-半乳糖:D-葡萄糖:D-木糖:D-甘露糖=29:1:42:11:2。5.多糖GeB80-4的理化性質:淺黃色粉末狀;可溶于水;不溶于無水乙醇、乙醚、丙酮、氯仿、正丁醇等有機溶劑;不含有淀粉類物質、還原糖類物質和蛋白質核酸類物質;紅外光譜分析表明分子結構中存在α型糖苷鍵;分子量大于8000D;比旋光度為[α]20 = -94.7°;熔點為278.5-279.9℃。采用離子色譜法分析其單糖組成結果為:該多糖由L-鼠李糖、D-半乳糖和D-葡萄糖三種單糖組成,三種單糖摩爾數之比L-鼠李糖:D-半乳糖:D-葡萄糖=2.5:1:25。6.抗氧化活性試驗研究了天麻多糖GeB40和GeB80對O_2~-·、·OH、DPPH·的清除能力以及其還原能力。結果表明GeB40和GeB80都具有O_2~-·、·OH、DPPH·的清除能力和較強的還原能力,且清除率隨濃度的增加都有所增強,GeB40對O_2~-·的清除能力強于GeB80;GeB80對·OH和DPPH·的清除能力以及還原能力都強于GeB40。7.抑菌試驗表明天麻多糖GeB40、GeB80和天麻乙醇提取物對細菌、真菌均有一定的抑菌效果。GeB40對大腸桿菌有明顯的抑制作用,對根霉有一定的抑制作用;GeB80的抑菌作用強于GeB40,對青霉、根霉等霉菌和金黃色葡萄球菌有較強抑菌效果,對腸炎沙門氏菌和枯草芽孢桿菌也有一定抑制作用;天麻乙醇提取物的抑菌活性強于天麻多糖GeB40和GeB80,對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和青霉的抑制作用明顯,對根霉和腸炎沙門氏菌也有一定抑制作用。8.采用ACE抑制率的體外檢測法測定天麻多糖的降血壓活性。結果表明,天麻多糖GeB40和GeB80都具有很好的降血壓功效,GeB80降血壓活性高于GeB40,在濃度為10 mg·mL~(-1)時兩者的抑制率都達到50%以上。本文的創(chuàng)新點:1.首次利用超聲波提取、木瓜蛋白酶-Sevag法脫蛋白、透析以及DEAE-52柱層析純化等先進工藝,獲得天麻多糖。2.用離子色譜法測定天麻多糖的單糖組成,采用ACE抑制率的體外檢測法研究其降血壓活性均具有一定創(chuàng)新性。

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