本文關鍵詞：基于駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿轉(zhuǎn)化及活性探討維藥駱駝蓬籽炮制機理，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：駱駝蓬(Peganum garmala L.3)為蒺藜科(Zygophyllaceae)駱駝蓬屬(Peganum)多年生草本植物,種子和全草均可入藥。用于治療咳嗽氣喘、風濕痹痛、無名腫痛、風濕痹痛等癥,是維吾爾族、蒙古族、哈薩克族沿用已久的民族藥材。駱駝蓬在我國資源豐富,分布廣泛,是極具開發(fā)價值的藥用植物資源。駱駝蓬種子中的藥用成分較高,目前新疆醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院制備的駱駝蓬片是駱駝蓬在臨床上應用的醫(yī)院制劑,用于治療消化道腫瘤,多年來的臨床實踐證明該制劑安全、可靠、有效。駱駝蓬種子中的主要活性成分為生物堿類化合物,具有廣泛的藥理活性,尤其具有顯著的抗腫瘤作用。前期研究表明,駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿是駱駝蓬種子中含量最高的兩種生物堿,也是主要的生物堿活性成分。駱駝蓬有小毒,傳統(tǒng)使用中需要對駱駝蓬籽進行炮制。維醫(yī)、蒙醫(yī)和哈薩克醫(yī)使用駱駝蓬籽進行臨床治療時,常用酒浸泡后使用,確保臨床用藥的安全性和有效性,也有文獻零星報道,駱駝蓬的使用前要炒制。目前,我國對駱駝蓬籽的炮制研究較少,且炮制前后駱駝蓬籽中的化學成分變化尚不清楚。基于此,本論文選擇駱駝蓬籽中的主要化學成分駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿,考察炒制前后駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿的含量變化,并通過植物細胞懸浮培養(yǎng)體系探究兩者轉(zhuǎn)化的可能性。采用液質(zhì)聯(lián)用技術對轉(zhuǎn)化后成分去氫駱駝蓬堿進行肝微粒體酶代謝研究,同時,比較駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿的體外抗腫瘤活性以及去氫駱駝蓬堿對細胞遷移的抑制作用,推測維藥駱駝蓬籽的炮制機理。一、 駱駝蓬籽中兩種生物堿提取分離工藝及質(zhì)譜裂解規(guī)律研究駱駝蓬籽,粉碎過篩,石油醚脫脂。脫脂后根據(jù)酸溶堿沉法得總生物堿。對總生物堿進行硅膠柱層析,洗脫劑：二氯甲烷-甲醇,點板合并、甲醇結(jié)晶得化合物粗品,反復柱層析,甲醇重結(jié)晶后得化合物1和化合物2,經(jīng)鑒定化合物1為去氫駱駝蓬堿,化合物2為駱駝蓬堿。采用液質(zhì)聯(lián)用的方法研究駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿的質(zhì)譜裂解機制。將兩種生物堿通過HPLC進行分離后,在正離子模式下,得到駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿的質(zhì)譜圖。解析發(fā)現(xiàn)去氫駱駝蓬堿多級質(zhì)譜和駱駝蓬堿多級質(zhì)譜呈現(xiàn)相同的裂解規(guī)律,即其裂解主要是吡啶環(huán)上發(fā)生的RDA裂解以及吲哚環(huán)上取代基呈現(xiàn)的-CH3和-OH等自由基丟失,而吲哚環(huán)本身相對穩(wěn)定。采用靜態(tài)吸附實驗模型,以駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿的吸附率和解吸率為指標,從D101、LSA-5b、LSD-001三種大孔樹脂中篩選出LSA-5b大孔吸附樹脂為純化駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿的樹脂。分別從樣品pH值、樣品濃度、上樣流速、乙醇洗脫濃度、洗脫流速、洗脫劑用量方面優(yōu)化了樹脂對駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿的吸附和洗脫工藝條件。得到最佳的吸附條件是：上樣溶液pH值為9、樣品濃度為0.6g生藥/mL、上樣流速為2BV/h-最佳洗脫條件為：70%乙醇作為洗脫劑、洗脫流速為1.5 BV/h、洗脫劑用量為6BV；在最佳純化工藝條件下駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿的轉(zhuǎn)移率可達70%以上,工藝穩(wěn)定可靠。二、基于駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿的炮制機理研究駱駝蓬籽炒制前后駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿的含量變化分析。取凈駱駝蓬籽,置預熱的炒制容器內(nèi),用文火加熱,炒至微鼓起,有香氣逸出,取出,放涼,備用,得駱駝蓬籽炒制品,通過HPLC測定駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿的含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn),生品中去氫駱駝蓬堿的含量為72μg/g,駱駝蓬堿的含量為219μg/g；炒制品中去氫駱駝蓬堿的含量為125μg/g,駱駝蓬堿的含量為193μg/g。炒制后駱駝蓬堿的含量降低,去氫駱駝蓬堿的含量升高。植物細胞懸浮培養(yǎng)體系對駱駝蓬堿的生物轉(zhuǎn)化研究。為了探討駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿的轉(zhuǎn)化,論文采用植物懸浮細胞體系對駱駝蓬堿的生物轉(zhuǎn)化進行了相關研究。培養(yǎng)長春花、一葉蔌和煙草的植物懸浮細胞培養(yǎng)體系,加入底物去氫駱駝蓬堿乙醇溶液后繼續(xù)培養(yǎng)至收獲。應用薄層色譜法和質(zhì)譜法對轉(zhuǎn)化產(chǎn)物進行檢識。結(jié)果顯示駱駝蓬堿在該植物懸浮細胞培養(yǎng)體系中發(fā)生生物轉(zhuǎn)化,且轉(zhuǎn)化產(chǎn)物為去氫駱駝蓬堿。去氫駱駝蓬堿在人肝微粒體中代謝產(chǎn)物研究。采用高效液相色譜-離子阱-質(zhì)譜系統(tǒng),對去氫駱駝蓬堿進行人肝微粒體代謝實驗研究,平行建立2份去氫駱駝蓬堿的肝微粒體酶孵化體系,反應終止后,采用LC-MS-MS檢測代謝產(chǎn)物。結(jié)果顯示去氫駱駝蓬堿色譜峰與空白肝微粒體中的雜質(zhì)峰及去氫駱駝蓬堿代謝產(chǎn)物峰達到良好分離,通過質(zhì)譜分析去氫駱駝蓬堿的代謝產(chǎn)物為哈爾醇。去氫駱駝蓬堿及駱駝蓬堿體外抗腫瘤活性比較研究。通過CCK-8法觀察去氫駱駝蓬堿和駱駝蓬堿對細胞增殖的抑制作用,細胞遷移實驗觀察去氫駱駝蓬對Hela細胞的遷移抑制情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn)去氫駱駝蓬堿的半數(shù)致死量IC50約為7.549μg·mL-1,去氫駱駝蓬堿濃度為20μg·mL-1,時對Hela細胞的抑制率最大。駱駝蓬堿的半數(shù)致死量IC50約為38.67μg·mL-1,抑制率在駱駝蓬堿濃度為80μg·mL-1時最大。細胞遷移實驗結(jié)果顯示,去氫駱駝蓬堿能顯著抑制Hela細胞擴散,濃度在0-2μg·mL-1范圍內(nèi)抑制作用明顯,隨著用藥濃度的增高呈現(xiàn)出較強的抑制作用。三、不同炮制方法中駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿含量變化研究對駱駝蓬籽酒制得駱駝蓬籽酒制品,通過HPLC測定生品和酒制品中去氫駱駝蓬堿和駱駝蓬堿的含量。酒制品中去氫駱駝蓬堿的含量為115μg/g,駱駝蓬堿的含量為199μg/g。去氫駱駝蓬堿在不同炮制方法中的含量不同,且炒制品酒制品生品。
【關鍵詞】：肝微粒體 抗腫瘤 駱駝蓬 駱駝蓬堿 炮制 去氫駱駝蓬堿 生物轉(zhuǎn)化
【學位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R29
【目錄】：

• 摘要6-9
• ABSTRACT9-13
• 符號說明13-14
• 文獻綜述 駱駝蓬研究現(xiàn)狀14-37
• 1 駱駝蓬的植物學研究資料總結(jié)14-22
• 2 駱駝蓬的生物活性研究22-28
• 3 駱駝蓬的毒性研究28
• 4 駱駝蓬在臨床上的應用28-29
• 5 駱駝蓬的炮制研究29
• 6 小結(jié)29-30
• 參考文獻30-37
• 前言37-39
• 第一章 駱駝蓬籽中兩種生物堿提取分離工藝及質(zhì)譜裂解規(guī)律研究39-58
• 第一節(jié) 駱駝蓬籽中兩種生物堿的提取分離39-47
• 1 儀器與材料39-40
• 2 提取與分離40
• 3 結(jié)構鑒定40-46
• 4 小結(jié)46-47
• 第二節(jié) 駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿的質(zhì)譜裂解途徑分析47-51
• 1 儀器與材料47
• 2 實驗方法與結(jié)果47-50
• 3 討論50
• 4 小結(jié)50-51
• 第三節(jié) 大孔吸附樹脂法富集分離的工藝研究51-58
• 1 實驗材料51
• 2 實驗方法與結(jié)果51-56
• 3 討論56-57
• 4 小結(jié)57-58
• 第二章 基于駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿的炮制機理研究58-79
• 第一節(jié) 駱駝蓬籽炒制前后駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿含量變化分析58-64
• 1 儀器與材料58-59
• 2 方法與結(jié)果59-62
• 3 討論62-63
• 4 小結(jié)63-64
• 第二節(jié) 植物細胞懸浮培養(yǎng)體系對駱駝蓬堿的生物轉(zhuǎn)化64-69
• 1 儀器與材料64-65
• 2 方法與結(jié)果65-67
• 3 討論67-68
• 4 小結(jié)68-69
• 第三節(jié) 去氫駱駝蓬堿在人肝微粒體中代謝產(chǎn)物研究69-74
• 1 儀器與材料69-70
• 2 方法與結(jié)果70-72
• 3 討論72-73
• 4 小結(jié)73-74
• 第四節(jié) 去氫駱駝蓬堿以及駱駝蓬堿體外抗腫瘤活性比較74-79
• 1 儀器與材料74
• 2 方法與結(jié)果74-77
• 3 討論77-78
• 4 小結(jié)78-79
• 第三章 不同炮制法對去氫駱駝蓬堿的含量分析79-82
• 1 儀器與材料79
• 2 方法與結(jié)果79-81
• 3 討論81
• 4 小結(jié)81-82
• 結(jié)語82-85
• 參考文獻85-87
• 致謝87-88
• 在學期間主要研究成果88

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 許招懂,潘啟超;駱駝蓬堿抗癌作用研究[J];癌癥;1989年02期

2 王曉華,王宏,何安光;駱駝蓬堿抗腫瘤作用的體外研究[J];中國醫(yī)科大學學報;1993年03期

3 王錦軍;龔道凱;張秀梅;張敬芳;楊希雄;楊成雄;;超臨界二氧化碳萃取駱駝蓬種子脂肪油與去氫駱駝蓬堿工藝的實驗[J];中成藥;2006年09期

4 徐英宏;姜清華;段旭;李Z

本文編號：269001