發(fā)布時(shí)間：2017-03-16 07:01

  本文關(guān)鍵詞：傣藥雅解沙把和中藥苦參的抗過敏作用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:“雅解沙把”是傣醫(yī)藥學(xué)體系中用以調(diào)節(jié)機(jī)體四塔、五蘊(yùn)功能,解除人體毒素,保護(hù)臟腑功能的重要解毒方,但是其物質(zhì)基礎(chǔ)和治療食物過敏的機(jī)制尚不清楚。故本課題組利用HPLC-DAD法對“雅解沙把”中兩個(gè)生物堿類成分巴馬汀、小檗堿進(jìn)行含量測定,以期闡明“雅解沙把”的物質(zhì)基礎(chǔ),建立Balb/C雌性小鼠食物過敏模型,探索“雅解沙把”治療食物過敏的作用機(jī)制。另一方面,本課題組采用2,4-二硝基氟苯(DNFB)誘導(dǎo)的昆明種雄性小鼠過敏性皮膚病模型,對治療皮膚病常用中藥苦參抗過敏性皮炎的機(jī)制進(jìn)行了探索,為其臨床合理用藥提供依據(jù)。方法:1.通過正交實(shí)驗(yàn)確定雅解沙把樣品中巴馬汀、小檗堿提取方法,建立HPLC法測定傣藥“雅解沙把”中巴馬汀、小檗堿含量,并進(jìn)行方法學(xué)考察。2.建立卵蛋白致敏的Balb/C小鼠模型,給予“雅解沙把”低、中、高劑量以及陽性藥氯雷他定、巴馬汀、小檗堿,記錄給藥后小鼠的搔癢頻率,對不同組別小鼠血清中的Ig E、Ig G及其他相關(guān)細(xì)胞因子含量進(jìn)行檢測,同時(shí)采用流式細(xì)胞術(shù)對小鼠脾臟中CD4~+CD25~+Foxp3~+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的水平進(jìn)行檢測。3.通過2,4-二硝基氟苯(DNFB)誘導(dǎo)昆明種雄性小鼠建立過敏性皮膚病模型,在造模過程中,灌胃給藥陽性藥氯雷他定、苦參低、高劑量及其主要單體成分氧化苦參堿低、高劑量,記錄給藥一定時(shí)間后小鼠的搔癢頻率,耳片厚度差值,小鼠胸腺、脾腺指數(shù),采用酶聯(lián)免疫吸附試劑法(Elisa)對不同組小鼠血清中的IL-2、IL-6、IL-10、TGF-β細(xì)胞因子含量進(jìn)行檢測,最后采用流式細(xì)胞術(shù)對小鼠脾臟中的CD4~+CD25~+、CD4~+CD25~+Foxp3~+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的水平進(jìn)行檢測。結(jié)果:1.用100 ml流動相超聲提取雅解沙把樣品30 min,在色譜柱為TSK gel ODS-100V(4.6 mm×250 mm),流動相是乙腈-0.4%磷酸(32:68),1 ml·min-1流速,345nm檢測波長,柱溫40℃的色譜條件下,雅解沙把中巴馬汀、小檗堿的含量分別為1.49、0.50 mg·g-1。2.在對“雅解沙把”治療食物過敏的作用機(jī)制研究中,卵蛋白致敏模型組在50 h、98 h點(diǎn)小鼠搔癢次數(shù)比正常組高,氯雷他定組、巴馬汀組、小檗堿組、雅解沙把中劑量(3.50 g/kg)和雅解沙把高劑量(4.70 g/kg)小鼠搔癢次數(shù)相比于模型組均有所降低,雅解沙把低劑量組與模型組相比沒有無差別。50 h時(shí)刻,模型組中Ig E含量相比于正常組升高了6.9%,但是98 h時(shí),血清中Ig E回歸到最低水平。巴馬汀和雅解沙把高劑量組能夠逆轉(zhuǎn)血清中Ig E的提高。與正常組相比,50 h時(shí)刻OVA致敏即模型組能夠顯著降低血清中Ig G含量。且這種OVA誘導(dǎo)的血清中Ig G的降低能夠被雅解沙把部分逆轉(zhuǎn)。其他細(xì)胞因子,如IL4,IL-10和TNF-α,與正常組相比,模型組均沒有顯著性差異。雅解沙把低、中、高劑量組,巴馬汀組,小檗堿組以及陽性藥氯雷他定組的小鼠搔癢次數(shù)低于模型組,脾臟中CD4~+CD25~+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的比率雅解沙把高劑量組(12.50%)明顯高于模型組(6.80%),且Foxp3在脾臟淋巴細(xì)胞中的表達(dá),雅解沙把高劑量組遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于模型組。3.在中藥苦參抗過敏性皮炎研究中,實(shí)驗(yàn)進(jìn)行到第13天,正常組小鼠的搔癢頻率為0.51次min-1每只,DNFB模型組小鼠搔癢頻率(1.07次min-1每只)高于正常組。苦參提取物低劑量組、氧化苦參堿低、高劑量組的搔癢次數(shù)相比于模型組有明顯降低�？鄥⑻崛∥锔邉┝亢完栃运幝壤姿ńM與模型組相比物無明顯差別。正常組小鼠耳片厚度差值遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于模型組�？鄥⑻崛∥锏汀⒏邉┝拷M的耳片厚度差值相比于模型組有所降低,且苦參提取物低劑量組小鼠的耳片厚度差值接近于正常組,因此苦參提取物低劑量對于過敏性皮炎具有較好的療效。陽性藥氯雷他定和氧化苦參堿低、高劑量組與模型組相比,無顯著差異。從CD4~+CD25~+水平來看,與正常組(13.1%)相比,DNFB致敏能夠顯著地降低脾臟中CD4~+CD25~+/CD4~+的水平(10.24%)。氯雷他定組(11.12%)、苦參提取物低劑量組(13.18%)、苦參提取物高劑量(14.54%)、氧化苦參堿高劑量組(15.51%)脾臟中CD4~+CD25~+/CD4~+的水平均高于模型組,尤其是氧化苦參堿單體高劑量對CD4~+CD25~+水平的提升起到很大的作用。這表明,氧化苦參堿能夠有效地提升CD4~+CD25~+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在脾臟中的表達(dá)。相比于正常組(13.78%),模型組小鼠Foxp3(10.24%)的表達(dá)降低了25.69%,氯雷他定組Foxp3(13.38%)的表達(dá)與正常組接近�？鄥⒌蛣┝拷M(13.48%)和苦參高劑量組(18.62%)Foxp3的陽性表達(dá)亦高于模型組。氧化苦參堿堿高劑量(11.43%)對小鼠Foxp3的表達(dá)亦有一定的促進(jìn)作用,但不是很明顯。結(jié)論:1.本研究所建立的雅解沙把中巴馬汀、小檗堿HPLC-DAD檢測方法,靈敏,穩(wěn)定,重復(fù)性好。測試結(jié)果顯示,巴馬汀、小檗堿是雅解沙把方劑中的主要成分,可能是其治療各種病癥的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。2.雅解沙把能夠降低OVA致敏小鼠的搔癢次數(shù),通過升高CD4~+CD25~+Foxp3~+在脾臟中比例來消除食物過敏反應(yīng),巴馬汀可以認(rèn)定為雅解沙把的主要活性成分之一。3.苦參提取物對DNFB誘導(dǎo)的過敏性皮炎有一定的控制作用,其作用機(jī)制可能為升高調(diào)節(jié)性T細(xì)胞中CD4~+CD25~+Foxp3~+的水平,減弱DNFB所誘導(dǎo)的炎癥。氧化苦參堿是其主要的活性物質(zhì)。
【關(guān)鍵詞】：雅解沙把 食物過敏 苦參 過敏性皮炎 CD4~+CD25~+Foxp3~+
【學(xué)位授予單位】：云南中醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R29
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• ABSTRACT8-11
• 第一章 HPLC測定傣藥雅解沙把中巴馬汀、小檗堿11-18
• 第一節(jié) 前言11-12
• 第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料與方法12-16
• 一、儀器與試藥12
• 二、方法與結(jié)果12-16
• 第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論16-17
• 一、實(shí)驗(yàn)結(jié)果16
• 二、討論16-17
• 參考文獻(xiàn)17-18
• 第二章 “雅解沙把”及其單體成分抗食物過敏的機(jī)制研究18-32
• 第一節(jié) 前言18-19
• 第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料與方法19-23
• 一、實(shí)驗(yàn)材料19-21
• 二、實(shí)驗(yàn)方法21-23
• 第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論23-32
• 一、實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-30
• 二、討論30-32
• 第三章 中藥苦參抗過敏性皮炎的作用研究32-45
• 第一節(jié) 前言32-33
• 第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料與方法33-36
• 一、實(shí)驗(yàn)材料33-35
• 二、實(shí)驗(yàn)方法35-36
• 第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論36-43
• 一、實(shí)驗(yàn)結(jié)果36-42
• 二、討論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-45
• 第四章 總結(jié)與展望45-47
• 第五章 傣醫(yī)解藥“雅解沙把”的研究進(jìn)展47-54
• 第一節(jié) 雅解沙把的臨床應(yīng)用47-48
• 第二節(jié) 雅解沙把的藥理研究進(jìn)展48-49
• 第三節(jié) 雅解沙把與食物過敏的關(guān)系49
• 第四節(jié) 食物過敏機(jī)制及與其相關(guān)的當(dāng)前熱點(diǎn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞研究概況49-51
• 第五節(jié) 展望51-52
• 參考文獻(xiàn)52-54
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表文章54-55
• 致謝55

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