本文關(guān)鍵詞：不同時(shí)間點(diǎn)針刺介入對(duì)心肌缺血大鼠腦損傷神經(jīng)元保護(hù)作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的觀察心肌缺血后不同時(shí)間點(diǎn)腦損傷程度的變化,以及不同時(shí)間點(diǎn)針刺介入對(duì)心肌缺血大鼠海馬神經(jīng)元Bax、Bcl-2蛋白的變化,探討針刺干預(yù)對(duì)心肌缺血大鼠海馬神經(jīng)元的保護(hù)作用及部分機(jī)理,為臨床選擇較佳時(shí)機(jī)針刺介入提供實(shí)驗(yàn)依據(jù),也為“心主神明”理論研究奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法1.選用健康SD大鼠60只(質(zhì)量為220±20g),隨機(jī)分為偽手術(shù)組、即刻組、24h組、3d組、5d組,每組8只,余下常規(guī)飼養(yǎng),以備補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)用。偽手術(shù)組只開胸不做冠狀動(dòng)脈血管結(jié)扎,其他各組均制成心肌缺血模型,分別在造模后立刻、24h、3d、5d后處死取材,通過光鏡、透射電鏡觀察大鼠海馬組織形態(tài)學(xué)和超微結(jié)構(gòu)變化,免疫組化法檢測各組海馬神經(jīng)元Bax、Bcl-2蛋白的表達(dá)。2.選用健康SD大鼠60只(質(zhì)量為220±20g),隨機(jī)分為偽手術(shù)組、模型組、即刻針刺組、24h針刺組、3d針刺組,每組8只,余下常規(guī)飼養(yǎng),以備補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)用。偽手術(shù)組只開胸不做冠狀動(dòng)脈血管結(jié)扎,其他各組均制成心肌缺血模型。選雙側(cè)神門、心俞電針治療,偽手術(shù)組、模型組不做針刺治療,其余各組分別在造模后立刻、24h、3d后電針治療,每次30min,每日一次,連續(xù)7天,待結(jié)束點(diǎn),在第11日取材,觀察、檢測相關(guān)指標(biāo):光鏡下觀察海馬組織形態(tài)學(xué)改變;免疫組化法檢測海馬神經(jīng)元Bax、Bcl-2蛋白的表達(dá);RT-PCR法檢測海馬神經(jīng)元BaxmRNA、Bcl-2 mRNA的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果1.心肌缺血大鼠不同時(shí)間點(diǎn)腦損傷程度變化(1)光鏡下觀察各組海馬組織形態(tài)學(xué)變化:偽手術(shù)組海馬組織神經(jīng)元細(xì)胞分布較清晰、排列整齊、形態(tài)較為完整,胞核呈藍(lán)色,多為橢圓形、圓形或錐形,輪廓清晰,染色較為均勻;模型各組出現(xiàn)不同程度神經(jīng)元細(xì)胞分布模糊、排列不齊、細(xì)胞減少、染色不均。即刻組、24h組、3d組、5d組呈逐漸加重趨勢(shì)。(2)透射電鏡觀察海馬組織超微結(jié)構(gòu)變化:偽手術(shù)組海馬神經(jīng)元結(jié)構(gòu)整體完好,模型各組不種程度出現(xiàn)神經(jīng)元細(xì)胞器含量減少、腫脹、擴(kuò)張,病理改變依次隨時(shí)間而加重。(3)免疫組織化學(xué)法檢測海馬組織中Bax、Bcl-2蛋白的表達(dá):陽性表達(dá)物主要分布在神經(jīng)細(xì)胞內(nèi),以小顆粒分布為主,部分呈現(xiàn)聚集分布。偽手術(shù)組、即刻組、24h組、3d組、5d組Bax的表達(dá)依次增多,Bcl-2的表達(dá)依次減少,各組間進(jìn)行兩兩比較,除3d組與5d組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),其他各組間均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。2.不同時(shí)間點(diǎn)針刺介入對(duì)心肌缺血大鼠腦損傷海馬神經(jīng)元Bax、Bcl-2調(diào)控的作用(1)光鏡下觀察海馬形態(tài)學(xué)變化:偽手術(shù)組神經(jīng)元細(xì)胞分布清晰、排列整齊、形態(tài)完整,胞核呈藍(lán)色,形狀多為橢圓形、圓形或錐形狀,輪廓清晰,染色均勻;模型組神經(jīng)元細(xì)胞分布模糊、排列不齊、細(xì)胞減少、染色不均;針刺各組較模型組病理改變均有所減輕,其中即刻針刺組改善最為明顯,24h針刺組、3d針刺組改善依次變差。(2)免疫組織化學(xué)法檢測各組Bax、Bcl-2蛋白的表達(dá):各組Bax、Bcl-2陽性細(xì)胞均有表達(dá),其中Bax:模型組3d針刺組24h針刺組即可針刺組偽手術(shù)組;Bcl-2:模型組3d針刺組24h針刺組即可針刺組偽手術(shù)組;各組分別進(jìn)行組間兩兩比較,均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。(3)RT-PCR法檢測各組Bax mRNA、Bcl-2 mRNA相對(duì)表達(dá)量:檢測結(jié)果和免疫組織化學(xué)法檢測一致,針刺可以上調(diào)海馬組織中Bcl-2 mRNA水平的表達(dá),下調(diào)Bax mRNA水平的表達(dá),且即可針刺組明顯優(yōu)于24h針刺組、3d針刺組,24h針刺組優(yōu)于3d針刺組。結(jié)論1.大鼠心肌缺血可導(dǎo)致腦損傷,即刻組、24h組、3d組、5d組損傷程度依次加重,3d組與5d組差異不明顯,其機(jī)制可能與凋亡因子Bax、Bcl-2的表達(dá)相關(guān)。2.電針可對(duì)心肌缺血大鼠腦損傷海馬神經(jīng)元起到保護(hù)作用;其保護(hù)作用機(jī)制可能與電針能下調(diào)大鼠腦組織Bax及Bax mRNA水平的表達(dá),上調(diào)Bcl-2及Bcl-2 mRNA水平的表達(dá)有關(guān)。3.針刺治療心肌缺血腦損傷應(yīng)在心肌缺血出現(xiàn)的早期,這樣更有利于發(fā)揮針刺下調(diào)Bax上調(diào)Bcl-2蛋白以及其相應(yīng)mRNA的表達(dá)的作用,從而達(dá)到保護(hù)大腦神經(jīng)元的目的。
【關(guān)鍵詞】：心肌缺血 腦損傷 不同時(shí)間點(diǎn) 電針 Bax Bcl-2 神門 心俞
【學(xué)位授予單位】：安徽中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R245
【目錄】：

• 一、中文摘要7-9
• 二、Abstract9-12
• 三、縮略詞中英文對(duì)照表12-13
• 四、前言13-16
• 五、技術(shù)路線圖16-17
• 六、實(shí)驗(yàn)研究17-48
• 實(shí)驗(yàn)一 心肌缺血大鼠不同時(shí)間點(diǎn)腦損傷程度變化17-31
• 1.材料17-18
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物17
• 1.2 材料與試劑17
• 1.3 主要儀器17-18
• 1.4 軟件18
• 2.方法18-23
• 2.1 動(dòng)物選擇及分組18-19
• 2.2 模型復(fù)制19-20
• 2.2.1 復(fù)制方法19
• 2.2.2 納入標(biāo)準(zhǔn)19
• 2.2.3 剔除標(biāo)準(zhǔn)19-20
• 2.3 標(biāo)本采集20
• 2.4 觀察指標(biāo)20-22
• 2.4.1 HE染色步驟20
• 2.4.2 免疫組化操作步驟20-21
• 2.4.3 電鏡檢測21-22
• 2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法22-23
• 3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析23-30
• 3.1 心肌缺血模型大鼠心電圖結(jié)果23-24
• 3.2 HE染色光鏡下檢測24-25
• 3.3 透射電鏡檢測25-26
• 3.4 免疫組化法檢測各組大鼠海馬神經(jīng)元Bax蛋白表達(dá)26-28
• 3.5 免疫組化法檢測各組大鼠海馬神經(jīng)元Bcl-2 蛋白表達(dá)28-30
• 4.小結(jié)30-31
• 實(shí)驗(yàn)二 不同時(shí)間點(diǎn)針刺介入對(duì)心肌缺血大鼠腦損傷海馬神經(jīng)元Bax、Bcl-2 調(diào)控的作用31-48
• 1.實(shí)驗(yàn)材料31-33
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物31
• 1.2 主要試劑31-32
• 1.3 主要儀器32-33
• 1.4 軟件33
• 2.實(shí)驗(yàn)方法33-37
• 2.1 動(dòng)物選擇、分組及模型制備33-34
• 2.2 針刺治療34
• 2.2.1 穴位選擇34
• 2.2.3 針刺方法34
• 2.3 標(biāo)本采集34
• 2.4 指標(biāo)檢測34-37
• 2.4.1 HE染色光鏡檢測35
• 2.4.2 免疫組化法檢測海馬組織Bax、BCl-2 的表達(dá)35
• 2.4.3 RT-PCR檢測各組海馬組織BaxmRNA、Bcl-2mRNA的表達(dá)35-37
• 2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法37
• 3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析37-46
• 3.1 HE染色光鏡觀察37-38
• 3.2 免疫組織化學(xué)法檢測Bax、Bcl-2 蛋白變化結(jié)果與分析38-42
• 3.2.1 免疫組化法檢測各組大鼠海馬組織Bax蛋白的表 達(dá)38-40
• 3.2.2 免疫組化法檢測各組大鼠海馬組織Bcl-2 蛋白的表達(dá)40-42
• 3.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測結(jié)果與分析42-46
• 3.3.1 RT-PCR技術(shù)檢測Bax、Bcl-2 基因含量的溶解曲線圖42-43
• 3.3.2 RT-PCR技術(shù)檢測Bax、Bcl-2 基因含量的擴(kuò)增曲線圖43-44
• 3.3.3 各組海馬組織BaxmRNA、Bcl-2mRNA相對(duì)表達(dá)量變化比較44-46
• 4.小結(jié)46-48
• 七、討論48-55
• 1.“心主神明”理論及現(xiàn)代研究48-49
• 2.心肌缺血腦損傷研究進(jìn)展49
• 3.凋亡基因Bax、Bcl-2 在心肌缺血腦損傷中的應(yīng)用研究49-52
• 3.1 凋亡基因Bax、Bcl-2 的概述49-50
• 3.2 Bax、Bcl-2 作用機(jī)制50
• 3.3 在治療心肌缺血中的應(yīng)用研究50-51
• 3.4 在治療腦損傷中的應(yīng)用研究51-52
• 4. 穴位選取依據(jù)52-53
• 5. 心肌缺血后腦組織形態(tài)學(xué)改變及針刺對(duì)其影響53
• 6. 心肌缺血大鼠腦損傷不同時(shí)間點(diǎn)Bax、Bcl-2 的變化及針刺對(duì)其影響53-55
• 八、結(jié)論55-56
• 九、不足與展望56-57
• 十、創(chuàng)新57-58
• 十一、參考文獻(xiàn)58-65
• 十二、附件材料65-75
• 附件材料 1：綜述65-73
• 參考文獻(xiàn)69-73
• 附件材料 2：研究生在讀期間發(fā)表論文和參與課題情況73-74
• 附件材料 3：個(gè)人簡介74-75
• 十三、致謝75

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本文編號(hào)：251297