【摘要】：目的:波棱瓜子是藏藥防治肝病的傳統(tǒng)藥物,具有清熱解毒、保肝利膽等功效,臨床上主要用于對肝炎的防護,以及肝病的輔助治療。本課題組前期實驗表明,波棱瓜子總木脂素部位是波棱瓜子治療肝病的有效部位之一,對CCl4(四氯化碳)、酒精等引起的的急、慢性肝損傷和治療ConA(刀豆球蛋白)等引起的免疫性肝損傷具有確切的保護作用。肝臟因物理、化學或藥物等因素造成損傷后,機體自身會分泌各種因子自我調(diào)節(jié),從而恢復肝臟功能及修復損傷組織,并在損傷嚴重時刺激肝細胞的再生,但藏藥波棱瓜子總木脂素部位是否對70%(2/3)肝切除所引起的肝損傷具有修復作用和是否對肝再生具有促進作用目前尚未清楚。因此,本研究將建立小鼠70%(2/3)肝切除模型,從波棱瓜子總木脂素部位對肝功能、肝再生藥效作用及機制,以及波棱瓜子總木脂素部位對不同月齡的小鼠術后肝功能、肝再生藥效作用等多個方面,系統(tǒng)的研究藏藥總木脂素部位對肝部分切除模型的損傷修復及肝再生的作用,并初步探討其作用機制。方法:1小鼠70%(2/3)肝切除模型的建立:采用結扎切除的手術方法,建立肝臟切除模型,在無菌環(huán)境條件下通過乙醚麻醉小鼠,切開小鼠腹部暴露肝臟,取4-0醫(yī)用縫合線,依次結扎小鼠的左外葉、左中葉及右中葉的肝蒂并將其切下(約切除小鼠原肝臟68%的重量),縫合腹部并等待小鼠蘇醒,記錄體重及肝重。以小鼠成功蘇醒并活動自由作為手術成功的標志。2藏藥波棱瓜子總木脂素部位對小鼠70%(2/3)肝切除術后肝功能及肝再生的影響:(1)藏藥波棱瓜子總木脂素部位對小鼠70%(2/3)肝切除術后肝臟修復的影響:小鼠平均分為空白組、模型(手術)組、丹參注射劑組、總木脂素(15 g/kg)組和總木脂素(25 g/kg)組,建立小鼠70%(2/3)肝切除模型,(1)通過生化檢測肝切除小鼠血清中AST、ALT、ALB含量及小鼠再生肝組織中CRP含量,觀察藥物對小鼠術后肝功能的影響;(2)通過組織病理檢測小鼠肝臟組織形態(tài),免疫組織化學方法檢測肝切除小鼠再生肝組織中PCNA和Ki67蛋白的表達,記錄肝重并計算肝再生率,觀察藥物對小鼠術后肝再生的影響。(2)藏藥波棱瓜子總木脂素部位對不同月齡小鼠70%(2/3)肝切除術后肝臟修復的影響:小鼠按月齡分成4組,即低齡模型組、低齡總木脂素25 g/kg組和高齡模型組、高齡總木脂素25 g/kg組,建立小鼠70%(2/3)肝切除模型,(1)通過生化檢測肝切除小鼠血清中AST、ALT、ALB含量,觀察藥物對不同月齡小鼠術后肝功能的影響;(2)肝通過組織病理檢測小鼠肝臟組織形態(tài),免疫組織化學方法檢測肝切除小鼠再生肝組織中PCNA蛋白的表達,觀察藥物對不同月齡小鼠術后肝再生的影響。3藏藥波棱瓜子總木脂素部位對小鼠70%(2/3)肝切除術后肝臟修復的影響機制:建立小鼠70%(2/3)肝切除模型,檢測肝切除小鼠再生肝組織中IL-6、NF-κB和TNF-a的含量,初步探討藥物對小鼠術后肝臟的修復機制。結果:1小鼠70%(2/3)肝切除模型的建立:從麻醉小鼠到縫合并消毒切口,完成一只小鼠手術的時間為15~20 min。實驗在確保每組小鼠存活數(shù)量的前提下,小鼠實施手術的成功率為93.4%。手術成功的小鼠術后能夠自由活動,正常飲食,腹部傷口愈合良好。2藏藥波棱瓜子總木脂素部位對小鼠70%(2/3)肝切除術后肝功能及肝再生的影響:(1)藏藥波棱瓜子總木脂素部位對小鼠70%(2/3)肝切除術后肝臟修復的影響:相比空白組,術后模型組小鼠的AST升高而ALB減少,ALT及CRP的含量在7 d左右達到峰值,血清中其酶活力隨術后時間變化呈現(xiàn)下降趨勢,但效果緩慢,通過給予相應劑量的總木脂素和丹參注射劑后,與模型組相比,給予總木脂素的小鼠可見AST和ALT隨時間有不同程度的下降趨勢,CRP含量明顯下降,ALB的含量上調(diào);觀察小鼠肝組織病理,各組小鼠肝臟細胞在術后短期內(nèi)出現(xiàn)細胞壞死、水腫及炎癥,與模型組相比,給予相應藥物的小鼠細胞情況得以改善,肝臟細胞增殖數(shù)量逐漸增多,細胞的形態(tài)也隨時間的變化趨于正常;觀察小鼠術后PCNA和Ki67表達,與空白組和模型組對比,各給藥組小鼠PCNA和Ki67蛋白的表達在后期均有不同程度的增加。(2)藏藥波棱瓜子總木脂素部位對不同月齡小鼠70%(2/3)肝切除術后肝臟修復的影響:不同月齡小鼠在肝切除術后AST及ALT升高,ALB的含量隨時間有不同程度的減少,與模型組比較,通過給予總木脂素的小鼠AST和ALT隨時間有不同程度的下降趨勢,而ALB的含量均隨時間有所上調(diào);觀察不同月齡小鼠術后組織病理,模型組小鼠在1 d時出現(xiàn)大量的水腫、空泡變性和壞死,隨時間細胞開始出現(xiàn)少量的分裂增殖現(xiàn)象,與模型組比較,不同月齡總木脂素組小鼠術后肝細胞出現(xiàn)少量、輕度的空泡樣變或顆粒變性,肝細胞核分裂相增多,細胞體積變小,數(shù)量增多,肝細胞結構相對完整;觀察小鼠術后PCNA表達,與模型組對比,給予總木脂素的不同月齡小鼠的PCNA蛋白表達在后期均有不同程度的增加,但不同月齡小鼠間比較并無統(tǒng)計學意義。3藏藥波棱瓜子總木脂素部位對小鼠70%(2/3)肝切除術后肝臟修復的影響機制:與空白組比較,模型組小鼠術后IL-6、NF-κB和TNF-a的表達均有不同程度的上升,與模型組比較,給予總木脂素的肝切除小鼠能夠不同程度的降低前期IL-6、NF-κB和TNF-a的含量,提示機制可能與抑制IL-6/STAT-3等信號通路有關,藏藥波棱瓜子總木脂素部位能夠減輕手術引起的損傷及炎癥,保護肝臟。結論:以上實驗表明,藏藥波棱瓜子總木脂素部位對70%肝切除小鼠具有一定的保護作用,對肝損傷有一定的修復作用,能夠促進肝臟再生及延長再生時間,抑制IL-6/STAT-3等信號通路,對不同月齡的肝切除小鼠同樣具有抗炎抗損傷及促進肝再生作用,推測其機制可能與減輕炎癥因子的釋放、減少炎癥、恢復細胞形態(tài)有關。
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【學位授予單位】：西南民族大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R29

【參考文獻】

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本文編號：2478406