本文關(guān)鍵詞：腸道菌作用下小檗堿體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)及頭花蓼活性成分代謝特征研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

學(xué)校代碼：１００２３

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碩士學(xué)位論文

腸道菌作用下小檗堿體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)及頭花蓼活性

成分代謝特征研究

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所

姓院名：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥物研究所何馳宇

王琰研究員

王琰研究員

陳揚(yáng)超教授

賀文義副主任技師：指導(dǎo)教師：導(dǎo)師小組：

學(xué)科專(zhuān)業(yè)：

研究方向：

完成日期：藥學(xué)藥物分析及藥物代謝２０１５年５月

ＧｒａｄｕａｔｉｏｎＴｈｅｓｉｓｏｆＭ．Ｓ．Ｄｅｇｒｅｅ

ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ＆ＰｅｋｉｎｇＵｎｉｏｎＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ

目錄ＩＵｌｌｌＵｌｌＩＩＩｌＵＩＵｌ

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摘要………………………………………………………………………………………………………………８

緒論…………………………………………………………………………１３第一章

１．哺乳動(dòng)物腸道菌群研究進(jìn)展……………………………………………………．１３１．１哺乳動(dòng)物腸道菌群與疾病……………………………………………………．１４

１．１．１腸道菌群與肥胖……………………………………………………………１４１．１．２腸道菌群與代謝綜合征……………………………………………………１５

１．１．３腸道菌群與腫瘤……………………………………………………………１５

１．２腸道菌群引起的藥物代謝及生物學(xué)效應(yīng)……………………………………１６１．３腸道菌群代謝藥物及藥效相關(guān)性的研究方法………………………………１７１．３．１腸道菌群作用下藥物體外代謝的研究方法……………………………．．１７

１．３．１．１腸道內(nèi)容物或糞便溫孵法［３０】【３１】【３２】…………………………………一１７

１．３．１．２糞便中微生物粗酶與藥物共溫孵法【３３Ｊ………………………………１７

１．３．１．３單一的菌株與藥物溫孵培養(yǎng)法［３３】【３４】…………………………………１７

１－３．２腸道菌群作用下藥物體內(nèi)代謝的研究方法……………………………．．１７

１．３．２．１不同給藥方式的比較…………………………………………………１７

１．３．２．１采用無(wú)菌模型或偽無(wú)菌模型研究藥物經(jīng)腸道菌群的代謝…………１８

１．４腸道菌群作用下天然產(chǎn)物代謝的研究進(jìn)展…………………………………．１８１．４．１黃酮類(lèi)化合物腸道菌群的代謝……………………………………………１８

１．４．２萜類(lèi)化合物腸道菌群的代謝………………………………………………１９１．４．３皂苷類(lèi)化合物腸道菌群的代謝……………………………………………１９１．４．４生物堿類(lèi)化合物腸道菌群的代謝…………………………………………２０

１．４．５苯丙素類(lèi)化合物腸道菌群的代謝…………………………………………２０

１．４．６蒽醌類(lèi)化合物腸道菌群的代謝……………………………………………２１

１．４．７其它類(lèi)化合物腸道菌群的代謝……………………………………………２１

１．５小結(jié)……………………………………………………………………………．２１２．小檗堿體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)與藥效學(xué)關(guān)聯(lián)性的研究進(jìn)展…………………………一２２

２．１小檗堿的藥理作用……………………………………………………………２３２．１．１降血脂作用………………………………………………………………一２３２．１．２降血糖作用………………………………………………………………一２４２．１．３抗腫瘤作用………………………………………………………………一２４

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ＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ＆ＰｅｋｉｎｇＵｎｉｏｎ

２．１．４抗病原微生物作用………………………………………………………一２４

２．１．５保護(hù)心血管的作用………………………………………………………．．２５

２．２小檗堿體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)的研究進(jìn)展…………………………………………２５

２．２．１吸收………………………………………………………………………一２５

２．２．２分布………………………………………………………………………一２６

２．２．３代謝………………………………………………………………………一２６

２．２．４排泄………………………………………………………………………一２７

２．３小結(jié)……………………………………………………………………………２７３．頭花蓼的研究進(jìn)展………………………………………………………………一２８

３．１頭花蓼的化學(xué)成分研究………………………………………………………２９３．２頭花蓼的藥理作用研究………………………………………………………３０

３．２．１抗氧化作用………………………………………………………………．．３０

３．２．２抗菌作用…………………………………………………………………一３１

３．２．３抗炎作用…………………………………………………………………．．３１

３．２．４鎮(zhèn)痛作用…………………………………………………………………一３１

２．２．５抗癌作用…………………………………………………………………．．３１

３．２．６臨床應(yīng)用研究……………………………………………………………一３２

３．３頭花蓼有效成分代謝轉(zhuǎn)化及藥代動(dòng)力學(xué)研究………………………………３２

３．３．１鞣花鞣質(zhì)成分ＦＲ４２９的代謝轉(zhuǎn)化及藥代動(dòng)力學(xué)研究…………………．３３

３．３．２有效成分槲皮苷的代謝轉(zhuǎn)化及藥代動(dòng)力學(xué)研究…………………………３５

３．３．３有效成分沒(méi)食子酸的代謝轉(zhuǎn)化及藥代動(dòng)力學(xué)研究………………………３５

３．４小結(jié)………………………………………………………………………………………………………３５４．立題背景及意義…………………………………………………………………３６５．目標(biāo)與策略………………………………………………………………………３６

第二章ＳＩ）大鼠偽無(wú)菌模型的建立………………………………………………。３８

１．實(shí)驗(yàn)材料…………………………………………………………………………３８

１．１藥品與材料……………………………………………………………………３８１．２實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備………………………………………………………………３８１．３實(shí)驗(yàn)動(dòng)物………………………………………………………………………．３８２．實(shí)驗(yàn)方法…………………………………………………………………………一３８

２．１口服抗生素建立ＳＤ大鼠偽無(wú)菌動(dòng)物模型…………………………………一３８２．２腸道菌群制備和培養(yǎng)…………………………………………………………．３９２．２．１腸道內(nèi)容物的稱(chēng)重…………………………………………………………３９

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２．２．２腸道菌液的稀釋……………………………………………………………３９

２．２．３營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的制備……………………………………………………３９

２．２．４腸道菌液的點(diǎn)樣……………………………………………………………３９

２．２．５腸道菌的孵育與培養(yǎng)……………………………………………………一３９

２．３腸道菌群種類(lèi)的鑒定…………………………………………………………．４０２．４腸道菌落的計(jì)數(shù)………………………………………………………………．４０３．實(shí)驗(yàn)結(jié)果…………………………………………………………………………一４０

第三章腸道菌群作用下小檗堿體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究……………………………４３

１．實(shí)驗(yàn)材料…………………………………………………………………………４３

１．１藥品與試劑……………………………………………………………………４３１．２實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備………………………………………………………………４３１．３實(shí)驗(yàn)動(dòng)物………………………………………………………………………４３２．實(shí)驗(yàn)方法…………………………………………………………………………４３

２．１血漿樣品的前處理……………………………………………………………４３２．２糞便樣品的前處理……………………………………………………………．４４２．３小檗堿及內(nèi)標(biāo)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制…………………………………………．４４２．４ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ的分析方法………………………………………………………．４４

２．４．１液相色譜條件………………………………………………………………４４

２．４．２質(zhì)譜條件……………………………………………………………………４４

２．５小檗堿腸道菌代謝產(chǎn)物二氫小檗堿ＧＣ／ＭＳ的分析方法…………………一４５

２．５．１氣相色譜條件………………………………………………………………４５

２．５．２質(zhì)譜條件……………………………………………………………………４５

２．６ＳＤ大鼠偽無(wú)菌動(dòng)物模型的建立………………………………………………４５２．７小檗堿在正常ＳＤ大鼠、偽無(wú)菌ＳＤ大鼠體內(nèi)血漿藥代動(dòng)力學(xué)研究………４５２．８小檗堿在正常ＳＤ大鼠、偽無(wú)菌ＳＤ大鼠體內(nèi)排泄動(dòng)力學(xué)研究……………４５２．９數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析………………………………………………………………．４６３．實(shí)驗(yàn)結(jié)果…………………………………………………………………………４６

３．１小檗堿ＬＣ．ＭＳ／ＭＳ檢測(cè)結(jié)果及二氫小檗堿ＧＣ／ＭＳ檢測(cè)結(jié)果的分析……．４６３．２小檗堿在正常ＳＤ大鼠、偽無(wú)菌ＳＤ大鼠體內(nèi)血漿藥代動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果．．４７３．３小檗堿在正常ＳＤ大鼠、偽無(wú)菌ＳＤ大鼠體內(nèi)排泄動(dòng)力學(xué)研究……………５０４．小結(jié)…………………………………………………………………………………………………………５２

第四章腸道菌群對(duì)小檗堿降糖降脂治療作用的研究……………………………５３

１．實(shí)驗(yàn)材料…………………………………………………………………………５３４

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１．１藥品與試劑……………………………………………………………………５３１．２實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備………………………………………………………………５３１．３實(shí)驗(yàn)動(dòng)物………………………………………………………………………５３２．實(shí)驗(yàn)方法…………………………………………………………………………５３

２．１

２．２

２．３ＫＫ．Ａｙ糖尿病小鼠偽無(wú)菌動(dòng)物模型的建立及分組…………………………．５３ＫＫ．Ａｙ糖尿病小鼠的菌落數(shù)檢測(cè)……………………………………………．５４ＫＫ．Ａｙ糖尿病小鼠口服小檗堿治療１４天血藥濃度檢測(cè)……………………５４２．４血糖血脂檢測(cè)…………………………………………………………………．５４

２．４．１空腹血糖（ＦＢＧ）的測(cè)定…………………………………………………５４

２．４．２總膽固醇（ＣＨＯ）的測(cè)定………………………………………………一５４

２．４．３甘油三酯（ＴＧ）的測(cè)定…………………………………………………．５５

３．實(shí)驗(yàn)結(jié)果…………………………………………………………………………５５

３．１ＫＫ．Ａｙ糖尿病小鼠ＩＳｌ服小檗堿治療１４天菌落數(shù)檢測(cè)結(jié)果…………………５５３．２ＫＫ．Ａｙ糖尿病小鼠口服小檗堿治療１４天血藥濃度檢測(cè)結(jié)果………………５６３．３ＫＫ．Ａｙ糖尿病小鼠口服小檗堿治療１４天血糖血脂檢測(cè)結(jié)果………………５７４．小結(jié)…………………………………………………………………………………………………………．．５９

第五章頭花蓼提取物及其有效成分腸道茵代謝研究……………………………。６１

１．頭花蓼提取物的制備……………………………………………………………一６１

１．１實(shí)驗(yàn)材料………………………………………………………………………．６１

１．１．１試藥與材料…………………………………………………………………６１

１．１．２實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備…………………………………………………………一６１

１．２實(shí)驗(yàn)方法………………………………………………………………………．６１

１．２．１頭花蓼乙醇提取物的制備…………………………………………………６１

１．２．２頭花蓼乙酸乙酯萃取物的制備…………………………………………一６２

１．２．３頭花蓼提取物的ＨＰＬＣ檢測(cè)……………………………………………．６２

１．３實(shí)驗(yàn)結(jié)果………………………………………………………………………．６３２．頭花蓼提取物及其有效成分腸道菌代謝研究…………………………………６４

２．１實(shí)驗(yàn)材料………………………………………………………………………．６４

２．１．１藥品與試劑………………………………………………………………一６４

２．１．２實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備…………………………………………………………一６４

２．１．３實(shí)驗(yàn)動(dòng)物…………………………………………………………………一６４

２．２實(shí)驗(yàn)方法………………………………………………………………………．６５２．２．１腸菌培養(yǎng)液的配制………………………………………………………．．６５

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