巨噬細(xì)胞是由血液中的單核細(xì)胞遷移出血管進(jìn)入組織和器官后分化形成,作為人體中吞噬作用最強(qiáng)的細(xì)胞,其通過其吞噬功能和免疫信息傳遞功能在人體的非特異性和特異性免疫過程中發(fā)揮重要作用。通過識(shí)別病原體的組分,巨噬細(xì)胞能夠被活化,進(jìn)而吞噬入侵的病原體,同時(shí)釋放炎癥相關(guān)的細(xì)胞因子。然而,過多的炎癥因子分泌也會(huì)導(dǎo)致炎癥反應(yīng)的加劇,進(jìn)而對(duì)臨近的組織以及巨噬細(xì)胞自身造成損傷。楊芽黃素是一種黃酮類化合物,其存在于中藥材如益智仁,以及一些藥食同源的植物如小花山奈、或可食用的果實(shí)如文定果、山胡桃中。在蜂膠中,楊芽黃素是其主要具有活性的黃酮類成分之一。已有的研究表明,蜂膠提取物具有較好的抗炎活性,也有報(bào)道認(rèn)為楊芽黃素可以在無細(xì)胞毒性的劑量下通過抑制LPS刺激的巨噬細(xì)胞中一氧化氮合酶(iNOS)的活性抑制炎癥因子NO的分泌,提示其可能作為蜂膠中主要具有抗炎活性的成分之一。然而目前的研究卻沒有關(guān)于楊芽黃素抗炎作用的明確報(bào)道,更無相關(guān)研究闡明其發(fā)揮抗炎作用的機(jī)制和靶點(diǎn)。基于此,我們決定對(duì)楊芽黃素發(fā)揮抗炎作用的潛在機(jī)制展開研究。研究結(jié)果表明,在LPS刺激的RAW264.7細(xì)胞模型中,楊芽黃素能夠顯著抑制炎癥相關(guān)蛋白iNO...

【文章頁(yè)數(shù)】：152 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 引言
    1. 非特異性免疫反應(yīng)與炎癥
    2. 巨噬細(xì)胞在炎癥反應(yīng)中的作用
    3. 巨噬細(xì)胞炎癥模型及相關(guān)信號(hào)通路
    4. 蜂膠抗炎活性研究進(jìn)展
    5. 本研究的切入點(diǎn)
    6. 參考文獻(xiàn)
實(shí)驗(yàn)流程圖
第二章 楊芽黃素對(duì)巨噬細(xì)胞的毒性作用及安全劑量摸索
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料和方法
        2.2.1 主要試劑
        2.2.2 溶液配制
        2.2.3 細(xì)胞來源
        2.2.4 主要儀器設(shè)備
        2.2.5 實(shí)驗(yàn)方法
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
    2.4 討論
    2.5 參考文獻(xiàn)
第三章 楊芽黃素對(duì)LPS刺激的RAW264.7細(xì)胞和小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌炎癥因子的作用
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        3.2.1 主要試劑
        3.2.2 溶液配制
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物來源及倫理許可
        3.2.4 主要儀器設(shè)備
        3.2.5 實(shí)驗(yàn)方法
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.3.1 楊芽黃素可抑制LPS刺激的巨噬細(xì)胞分泌NO,但不影響iNOS酶活性
        3.3.2 楊芽黃素可抑制LPS刺激的巨噬細(xì)胞上清中TNF-α和IL-6的含量
    3.4 討論
    3.5 參考文獻(xiàn)
第四章 楊芽黃素對(duì)LPS刺激RAW264.7細(xì)胞iNOS,TNF-α,IL-6 mRNA水平的影響
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        4.2.1 主要試劑
        4.2.2 溶液配制
        4.2.3 主要儀器設(shè)備
        4.2.4 引物序列[4]
        4.2.5 實(shí)驗(yàn)方法
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
    4.4 討論
    4.5 參考文獻(xiàn)
第五章 楊芽黃素對(duì)NF-κB和AP-1信號(hào)通路的影響
    5.1 引言
    5.2 實(shí)驗(yàn)材料和方法
        5.2.1 主要試劑
        5.2.2 溶液配制
        5.2.3 主要儀器設(shè)備
        5.2.4 實(shí)驗(yàn)方法
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        5.3.1 楊芽黃素對(duì)LPS刺激的NF-κB激活無明顯抑制作用
        5.3.2 楊芽黃素可抑制LPS刺激的ERK磷酸化水平
    5.4 討論
    5.5 參考文獻(xiàn)
第六章 楊芽黃素對(duì)MEK1/2磷酸化水平及酶活性的作用
    6.1 引言
    6.2 實(shí)驗(yàn)材料和方法
        6.2.1 主要試劑
        6.2.2 溶液配制
        6.2.3 主要儀器設(shè)備
        6.2.4 實(shí)驗(yàn)方法
    6.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        6.3.1 Promega公司ADP-Glo試劑盒可以兼容SignalChem公司的激酶反應(yīng)體系
        6.3.2 ATP-ADP轉(zhuǎn)化標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
        6.3.3 楊芽黃素對(duì)LPS刺激的MEK1/2磷酸化水平無明顯影響
        6.3.4 楊芽黃素抑制MEK1/2的活性
        6.3.5 楊芽黃素與Human MEK1的分子對(duì)接模擬
    6.4 討論
    6.5 參考文獻(xiàn)
第七章 楊芽黃素對(duì)NO分泌的抑制作用的機(jī)制研究
    7.1 引言
    7.2 生物樣本中尿素測(cè)定方法的摸索和建立
        7.2.1 實(shí)驗(yàn)材料和方法
        7.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        7.2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
    7.3 楊芽黃素對(duì)精氨酸酶II表達(dá)的抑制作用源于其對(duì)NO分泌的抑制
        7.3.1 實(shí)驗(yàn)材料和方法
        7.3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        7.3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
    7.4 討論
    7.5 參考文獻(xiàn)
第八章 楊芽黃素對(duì)LPS致小鼠內(nèi)毒素血癥的作用
    8.1 引言
    8.2 實(shí)驗(yàn)材料
        8.2.1 主要試劑
        8.2.2 溶液配制
        8.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物來源及倫理許可
        8.2.4 主要儀器設(shè)備
    8.3 實(shí)驗(yàn)方法
        8.3.1 小鼠內(nèi)毒素血癥模型
        8.3.2 血清NO水平測(cè)定法
        8.3.3 ELISA法測(cè)定血清與腹腔灌洗液中TNF-α,IL-6的水平
        8.3.4 數(shù)據(jù)處理與分析
    8.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        8.4.1 楊芽黃素可抑制LPS致內(nèi)毒素血癥小鼠血清中NO,TNF-α,IL-6的水平
        8.4.2 楊芽黃素可抑制LPS致內(nèi)毒素血癥小鼠腹腔灌洗液中TNF-α、IL-6的水平
    8.5 討論
    8.6 參考文獻(xiàn)
第九章 總結(jié)
參考文獻(xiàn)
本研究創(chuàng)新點(diǎn)
文獻(xiàn)綜述一: 楊芽黃素藥理作用研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述二: MEK-ERK信號(hào)通路研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
致謝
參與發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3981902