發(fā)布時(shí)間：2024-05-18 08:42

　　目的:應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)分析核苷酸嘌呤霉素(Puromycinaminonucleoside,PAN)誘導(dǎo)損傷的人足細(xì)胞裂孔膜在予以不同濃度的黃芪多糖(Astragalus polysa-ccharides,APS)或黃芪甲苷(Astragaloside Ⅳ,AS-Ⅳ)治療后相關(guān)蛋白的表達(dá)變化,比較不同濃度的治療效果,尋找療效與濃度之間是否具有相關(guān)性,并探究PKC/MAPK通路在其中的作用,推測(cè)A PS或AS-Ⅳ保護(hù)人足細(xì)胞的可能作用機(jī)制,為臨床治療提供新的靶向思路。方法:采用細(xì)胞毒理測(cè)試CCK-8法分別測(cè)定PAN造成人足細(xì)胞裂孔膜損傷的合理濃度及時(shí)間和APS、AS-Ⅳ對(duì)人足細(xì)胞的最大無毒濃度。予分化完成的人足細(xì)胞以PAN刺激進(jìn)行造模后,應(yīng)用不同濃度的APS或AS-Ⅳ及溶劑進(jìn)行處理(正常組及模型組給予維持液),用RT-PCR法檢測(cè)各組細(xì)胞中nephrin及podocin的mRNA水平,用Western blotting法檢測(cè)各組中nephrin、podocin、PKC、JNK、p38的蛋白水平,分析其變化規(guī)律,推測(cè)各指標(biāo)之間、指標(biāo)與疾病之間的相關(guān)關(guān)系。結(jié)果:1.RT-PCR法顯示:模型...

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．足細(xì)胞分化前４０?Ｘ

圖２．足細(xì)胞分化前４０?Ｘ圖３．足細(xì)胞分化完成４０?Ｘ?閣４．足細(xì)胞造模后４０?Ｘ??２１??

圖３．足細(xì)胞分化完成４０?Ｘ?閣４．足細(xì)胞造模后４０?Ｘ??

（１０）洗膜及曝光：將條帶自二抗中取出后洗膜３次，根據(jù)說明書配置曝光液，打開及軟件，將條帶放入曝光儀，添加曝光液，依步驟曝光。??（１１）抗體洗脫：曝光后再次洗膜３次，將條帶浸沒于抗體洗脫液中置于脫色搖床上－８０轉(zhuǎn)／ｍｉｎ的速度快速洗脫３０ｍｉｍ洗膜后從封閉開始重新孵育分子量相近....

圖５．ＡＰＳ對(duì)ＰＡＮ誘導(dǎo)損傷的人足細(xì)胞中ｎｅｐｈｒｉｎ及ｐｏｄｏｃｉｎ的ｍＲＮＡ表達(dá)水平的影響??ｌ

?３．４．１?ＡＰＳ對(duì)ＰＡＮ誘導(dǎo)損傷的人足細(xì)胞中ｎｅｐｈｒｉｎ及ｐｏｄｏｃｉｎ的ｍＲＮＡ表達(dá)水平的影響??如表３－４及圖５中所不，ＰＡＮ作用與人足細(xì)胞后，模型組ｎｅｐｈｒｉｎ及ｐｏｄｏｃｉｎ的表達(dá)量??較正常組均明顯下降（ＰＵ５），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而應(yīng)用不同濃度的ＡＰＳ后ｎｅｐ....

圖６．ＡＳ－ＩＶ對(duì)ＰＡＮ誘導(dǎo)損傷的人足細(xì)胞中ｎｅｐｈｒｉｎ及ｐｏｄｏｃｉｎ的ｍＲＮＡ表達(dá)水平的影響??

型組相比．卞＜０．０５??３．４．２?ＡＳ－ＩＶ對(duì)ＰＡＮ誘導(dǎo)損傷的人足細(xì)胞中ｎｅｐｈｒｉｎ及ｐｏｄｏｃｉｎ的ｍＲＮＡ表達(dá)水、卜的影響??如表３－５及圖６中所不，ＰＡＮ作用與人足細(xì)胞后，模型組ｎｅｐｈｒｉｎ及ｐｏｄｏｃｉｎ的表達(dá)Ｗ：??與正常組相比卜降明顯（ＰＵ５），有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；....

本文編號(hào)：3976720