目的:分離純化獲得荔枝核總皂苷各組分,體外篩選荔枝核總皂苷抑制Aβ1-42誘導BV-2細胞活化的關鍵活性成分。方法:(1)采用AKTApurifier蛋白純化系統(tǒng),分離純化荔枝核總皂苷獲得各組分。(2)5μmol/LAβ1-42誘導BV-2細胞活化,荔枝核總皂苷及其各組分干預活化的BV-2細胞。(3)瑞氏-姬姆薩染色、光鏡觀察BV-2細胞形態(tài)學改變。(4)ELISA測定上清液TNF-α、IL-1β、IL-6 含量;(5)Real Time PCR 和 Western blot 分別檢測 TNF-α、IL-1β、iNOSmRNA和總蛋白表達。結(jié)果:(1)分離純化獲得荔枝核總皂苷12個組分(1#～12#)。(2)荔枝核總皂苷抑制BV-2細胞活化關鍵有效組分的篩選①形態(tài)學:倒置顯微鏡下,對照組:細胞形態(tài)規(guī)整、胞體呈圓形或橢圓形、突起少。Aβ模型組:細胞數(shù)量減少、突觸增加、細胞抱團現(xiàn)象明顯、胞體膨大、明顯阿米巴樣改變等細胞活化的標志;荔枝核總皂苷組:細胞數(shù)量增加,細胞抱團現(xiàn)象減少,突觸明顯減少;荔枝核總皂苷各成分組細胞形態(tài)表現(xiàn)差異較大,1#、5#、6#組分組:細胞數(shù)量有所增加,突觸減少,也有部...

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１荔枝核總皂苷ＨＰＬＣ圖譜??Ｆｉ．?１?ＨＰＬＣ?ｓｅｃｔｒｕｍ?ｏｆ?ＬＳＳ??

析型高效液相色譜儀對荔枝核總皂苷進行分析，結(jié)果荔枝核總皂苷在實驗??條件下能達到較好的分離效果，為后續(xù)制備型高效液相色譜對荔枝核總皂??苷進行分離純化提供了參考依據(jù)，結(jié)果見圖１。??ｍＡＵｌ?Ｓ?！？??６００－＾?？?０）?Ｎ?？??－?Ｏ?ｌ＼?ＪＯ?ｉ?｜?Ａ??５００?Ｓ....

圖２荔枝核總皂苷分離收集組分示意圖??Ｆｉｇ．２?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ?ａｎｄ?ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ＬＳＳ??

按實驗方法所述分離條件，利用ＡＫＴＡｐｕｒｉｆｉｅｒ蛋白純化系統(tǒng)對荔枝核??總皂苷中主要成分進行分離純化，按不同保留時間收集組分，共收集獲得??荔枝核總皂苷１２個組分（見圖２），純化后樣品經(jīng)ＨＰＬＣ檢測其色譜圖可見??１２個組分在實驗條件下均有較好的分離，各組分在不同保留時間下有....

圖５各組細胞培養(yǎng)液中ＴＮＦ－ａ、ＩＬ－ｌｐ、ＩＬ－６表達情況??Ａ：ＴＮＦ－ａ?含量；Ｂ：ＩＬ－ｌｐ?含量；Ｃ：ＩＬ－６?含量??與Ａｐ模型組比較〒＜?

含量的影響與荔枝核總皂苷組均無統(tǒng)計學差異（Ｐ?＞?０．０５）。提示，１Ｋ??３＃和５＃、６＃、８＃、９＃、１０＃組分對ＡＰ誘導的ＢＶ－２細胞活化的均有一定抑??制作用，以３＃和９＃組分最為明顯。見圖５?Ａ，?Ｂ，?Ｃ。??－３３－??

圖６各組細胞形態(tài)學改變??Ａ：正常對照組Ｂ：ＡＰ模型組Ｃ：荔枝核總皂苷組??＃＃

２．１形態(tài)學改變??倒置顯微鏡（ｘ２００）下：正常對照組ＢＶ－２細胞圓形或橢圓形，細胞突起??較少，細胞分散，無明顯抱團現(xiàn)象，細胞形態(tài)規(guī)則完整（圖６Ａ）。Ａｐ模型??組（圖６Ｂ）：細胞數(shù)量減少、突觸增加、胞體出現(xiàn)膨大阿米巴狀、細胞抱??團現(xiàn)象明顯。荔枝核總皂苷組（圖６Ｃ）：細胞數(shù)....

本文編號：3947019