第一部分陰虛“上火”蛋白質(zhì)生物學(xué)標(biāo)志物的篩選與鑒定及知柏地黃丸干預(yù)的實驗研究研究背景:知柏地黃丸是干預(yù)陰虛“上火”的經(jīng)典中藥方劑,應(yīng)用在中醫(yī)臨床實踐已有上千年的歷史,但是其干預(yù)機制尚未明確。本研究旨在探討陰虛“上火”血清蛋白標(biāo)志物以及知柏地黃丸干預(yù)陰虛“上火”的分子生物學(xué)機制。研究方法:我們用熱性中藥附子、干姜、肉桂對大鼠灌胃誘導(dǎo)陰虛“上火”動物模型,然后用知柏地黃丸進行干預(yù)治療,收集大鼠的血清樣本,并對重要臟器和體重進行測量。應(yīng)用蛋白組學(xué)iTRAQ-2DLC-MS/MS技術(shù)分析大鼠血清樣本,篩選知柏地黃丸干預(yù)前后血清差異表達蛋白質(zhì),結(jié)合生物信息學(xué)分析手段探索陰虛“上火”血清蛋白標(biāo)志物以及知柏地黃丸干預(yù)陰虛“上火”大鼠的作用機制。研究結(jié)果:陰虛“上火”大鼠體重顯著低于正常組,知柏地黃丸干預(yù)后,大鼠體重回升。陰虛“上火”大鼠胸腺指數(shù)顯著高于正常組,知柏地黃丸干預(yù)后,胸腺指數(shù)降低。在蛋白組學(xué)實驗中,知柏地黃丸干預(yù)前后,大鼠血清中共出現(xiàn)71個差異表達的蛋白質(zhì),其中10蛋白表達顯著上調(diào),61個蛋白表達顯著下調(diào)。GO分析顯示這些差異蛋白主要參與免疫反應(yīng),KEGG信號通路富集分析提示差異蛋白集中在...

【文章頁數(shù)】：158 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．１知柏地黃丸對陰虛“上火”大鼠體重的影響??Ｆｉｇ?１．１?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ＺＤＧ?ｏｎ?ｂｏｄｙ?ｗｅｉｇｈｔ?ｉｎ?ＹＤＨ?ｓｙｎｄｒｏｍｅ?ｒａｔｓ．?Ｂｏｄｙ?ｗｅｉｇｈｔ?ｗａｓ??

實驗完成后，大鼠肝臟、腎上腺、脾臟和胸腺迅速取出并稱重。結(jié)果顯示，??模型組大鼠胸腺指數(shù)高于正常組，知柏地黃丸干預(yù)后，顯著降低（／？＜０．００１）。肝??臟、腎上腺、脾臟指數(shù)無顯著性差異（圖１．２）。??１３??

圖１．３知柏地黃丸干預(yù)前后大鼠血清差異蛋白的熱圖??Ｆｉｇ?１．３?Ｈｅａｔ?ｍａｐ?ｖｉｓｕａｌｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ?ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ?ｐ?

ｉ?Ｊ?＿?＿＿?鼠?ｉ?圖?＿＿??ＣＧ?ＹＤＨＧ?ＺＤＣＧ?ＣＧ?ＹＤＨＧ?ＺＤＧＧ??圖１．２正常對照組、陰虛“上火”摸型組及知柏地黃丸組大鼠重要臟器指數(shù)比較??Ｆｉｇ?１．２?Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｏｆ?ｒｅｌａｔｉｖｅ?ｏｒｇａｎｓ?ｗｅｉｇｈｔ?ｉｎ?ＹＤＨＧ，?ＺＤ....

圖２．１�。遥危廖膸鞓�(gòu)建實驗流程??３５??

通過特定的反轉(zhuǎn)錄引物進行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，然后對生成的ｃＤＮＡ序列進行ＰＣＲ擴增。??最后，對長度在１４０－１６０ｂｐ范圍內(nèi)的ＰＣＲ產(chǎn)物進行膠回收，完成�。遥危廖膸熘苽�??的制備工作（圖２．１）。??Ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ??！?ｌ－２ｈｒ?１??３，?ｌｉｇａｔｉｏｎ??ｉｊ?＼?ｈｆ?....

圖２．２陰虛“上火”病人血清顯著差異蛋白火山圖

ｇｒｏｕｐ?ａｎｄ?ｈｅａｌｔｈｙ?ｃｏｎｔｒｏｌｓ．??對陰虛“上火’’者與正常對照者血清差異表達的蛋白進行生物信息學(xué)分析，??ＧＯ生物學(xué)功能分析提示，血清差異蛋白主要集中在機體免疫反應(yīng)（圖２．３ａ），??ＫＥＧＧ信號通路富集分析血清差異蛋白主要富集在補體和凝血途徑（圖２．３ｂ....

本文編號：3929029