目的炎癥性腸病是一種慢性、炎癥性疾病,臨床術(shù)后易復(fù)發(fā),嚴(yán)重威脅著現(xiàn)代人的生活和健康,目前IBD的病因仍不明確。為了更好地探究IBD的發(fā)病機(jī)制,開發(fā)天然的臨床治療方法,本課題擬利用IL-16基因缺陷小鼠,建立小鼠炎癥性腸病模型,探究IL-16在小鼠炎癥性腸病發(fā)病過程中的作用以及調(diào)控機(jī)制,為IBD的治療提供新的研究方向和治療靶點(diǎn)。方法1.利用C57BL/6小鼠構(gòu)建IBD模型,采用RT-qPCR、ELISA以及免疫熒光檢測IL-16的表達(dá)和定位。2.將C57BL/6和IL-16^-/-小鼠分別隨機(jī)分為兩組:WT對(duì)照組、WT DSS組、IL-16 KO對(duì)照組、IL-16 KO DSS組。DSS模型組給予25 g/LDSS飲水7 d,建立IBD模型,對(duì)照組給予正常飲水。建模期間記錄小鼠體重繪制體質(zhì)量變化曲線。7 d后,解剖分離小鼠脾臟和全結(jié)腸,HE檢測結(jié)腸組織病理損傷,TUNEL檢測結(jié)腸組織細(xì)胞凋亡。流式細(xì)胞術(shù)檢測腹腔細(xì)胞中巨噬細(xì)胞的數(shù)量和極化情況(F4/80,CD86),免疫組織化學(xué)染色法檢測結(jié)腸組織中巨噬細(xì)胞的分布,RT-qPCR分別檢測脾臟和結(jié)腸組織中IL-6、IL-1...

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
材料與方法
    1 材料
        1.1 主要儀器設(shè)備
        1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2 方法
        2.1 IL-16 基因缺陷鼠的構(gòu)建與鑒定
        2.2 小鼠炎癥性腸炎模型的制備
        2.3 骨髓來源原代巨噬細(xì)胞(BMDMs)的誘導(dǎo)及活化
        2.4 結(jié)腸組織、細(xì)胞RNA的提取和實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        2.5 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)檢測樣品中炎性細(xì)胞因子的表達(dá)水平
        2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測巨噬細(xì)胞的比例和活化
        2.7 免疫組化定位結(jié)腸組織中巨噬細(xì)胞的浸潤
        2.8 免疫熒光組織化學(xué)染色檢測結(jié)腸組織中IL-16 的表達(dá)和定位
        2.9 TUNEL檢測結(jié)腸組織中細(xì)胞凋亡率
        2.10 Western Blot檢測相關(guān)蛋白的表達(dá)水平
    3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
結(jié)果
    1 IL-16在DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎模型中高表達(dá)并加重結(jié)腸炎的發(fā)病
        1.1 成功構(gòu)建模型,DSS組小鼠表現(xiàn)為經(jīng)典的炎癥性結(jié)腸炎病癥
        1.2 DSS組小鼠結(jié)腸組織中IL-16 mRNA水平、蛋白水平均顯著高表達(dá)
        1.3 免疫熒光組織化學(xué)染色檢測結(jié)腸組織中IL-16 的定位和表達(dá)
        1.4 成功構(gòu)建并獲得穩(wěn)定遺傳的IL-16 基因缺陷小鼠
        1.5 IL-16 沉默后小鼠結(jié)腸炎得到改善
        1.6 TUNEL檢測結(jié)果提示IL-16 可能間接促進(jìn)結(jié)腸組織細(xì)胞凋亡
    2 IL-16 通過促進(jìn)M1 型巨噬細(xì)胞的極化加重DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎
        2.1 流式細(xì)胞術(shù)檢測小鼠腹腔巨噬細(xì)胞比例及活化程度
        2.2 IL-16 促進(jìn)結(jié)腸炎發(fā)病過程中巨噬細(xì)胞的浸潤
        2.3 IL-16 沉默后M1 型巨噬細(xì)胞標(biāo)志性炎性細(xì)胞因子的表達(dá)顯著降低
    3 在體外實(shí)驗(yàn)中,IL-16 促進(jìn)巨噬細(xì)胞向M1 亞型極化
        3.1 流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果提示在體外實(shí)驗(yàn)中IL-16 促進(jìn)巨噬細(xì)胞極化
        3.2 體外實(shí)驗(yàn)中,IL-16 促進(jìn)M1 型巨噬細(xì)胞標(biāo)志性炎性細(xì)胞因子表達(dá)
        3.3 Western blot結(jié)果提示IL-16 可能通過上調(diào)P65 NF-κB蛋白磷酸化促進(jìn)M1 型巨噬細(xì)胞的極化
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
縮略詞表(附錄)
致謝



本文編號(hào)：3925297