目的炎癥性腸病是一種慢性、炎癥性疾病,臨床術后易復發(fā),嚴重威脅著現代人的生活和健康,目前IBD的病因仍不明確。為了更好地探究IBD的發(fā)病機制,開發(fā)天然的臨床治療方法,本課題擬利用IL-16基因缺陷小鼠,建立小鼠炎癥性腸病模型,探究IL-16在小鼠炎癥性腸病發(fā)病過程中的作用以及調控機制,為IBD的治療提供新的研究方向和治療靶點。方法1.利用C57BL/6小鼠構建IBD模型,采用RT-qPCR、ELISA以及免疫熒光檢測IL-16的表達和定位。2.將C57BL/6和IL-16^-/-小鼠分別隨機分為兩組:WT對照組、WT DSS組、IL-16 KO對照組、IL-16 KO DSS組。DSS模型組給予25 g/LDSS飲水7 d,建立IBD模型,對照組給予正常飲水。建模期間記錄小鼠體重繪制體質量變化曲線。7 d后,解剖分離小鼠脾臟和全結腸,HE檢測結腸組織病理損傷,TUNEL檢測結腸組織細胞凋亡。流式細胞術檢測腹腔細胞中巨噬細胞的數量和極化情況(F4/80,CD86),免疫組織化學染色法檢測結腸組織中巨噬細胞的分布,RT-qPCR分別檢測脾臟和結腸組織中IL-6、IL-1...

【文章頁數】：58 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
材料與方法
    1 材料
        1.1 主要儀器設備
        1.2 主要實驗試劑
        1.3 實驗動物
    2 方法
        2.1 IL-16 基因缺陷鼠的構建與鑒定
        2.2 小鼠炎癥性腸炎模型的制備
        2.3 骨髓來源原代巨噬細胞(BMDMs)的誘導及活化
        2.4 結腸組織、細胞RNA的提取和實時熒光定量PCR
        2.5 酶聯免疫吸附實驗(ELISA)檢測樣品中炎性細胞因子的表達水平
        2.6 流式細胞術檢測巨噬細胞的比例和活化
        2.7 免疫組化定位結腸組織中巨噬細胞的浸潤
        2.8 免疫熒光組織化學染色檢測結腸組織中IL-16 的表達和定位
        2.9 TUNEL檢測結腸組織中細胞凋亡率
        2.10 Western Blot檢測相關蛋白的表達水平
    3 統計學分析
結果
    1 IL-16在DSS誘導的小鼠結腸炎模型中高表達并加重結腸炎的發(fā)病
        1.1 成功構建模型,DSS組小鼠表現為經典的炎癥性結腸炎病癥
        1.2 DSS組小鼠結腸組織中IL-16 mRNA水平、蛋白水平均顯著高表達
        1.3 免疫熒光組織化學染色檢測結腸組織中IL-16 的定位和表達
        1.4 成功構建并獲得穩(wěn)定遺傳的IL-16 基因缺陷小鼠
        1.5 IL-16 沉默后小鼠結腸炎得到改善
        1.6 TUNEL檢測結果提示IL-16 可能間接促進結腸組織細胞凋亡
    2 IL-16 通過促進M1 型巨噬細胞的極化加重DSS誘導的小鼠結腸炎
        2.1 流式細胞術檢測小鼠腹腔巨噬細胞比例及活化程度
        2.2 IL-16 促進結腸炎發(fā)病過程中巨噬細胞的浸潤
        2.3 IL-16 沉默后M1 型巨噬細胞標志性炎性細胞因子的表達顯著降低
    3 在體外實驗中,IL-16 促進巨噬細胞向M1 亞型極化
        3.1 流式細胞術結果提示在體外實驗中IL-16 促進巨噬細胞極化
        3.2 體外實驗中,IL-16 促進M1 型巨噬細胞標志性炎性細胞因子表達
        3.3 Western blot結果提示IL-16 可能通過上調P65 NF-κB蛋白磷酸化促進M1 型巨噬細胞的極化
討論
結論
參考文獻
綜述
    綜述參考文獻
攻讀學位期間的研究成果
縮略詞表(附錄)
致謝



本文編號：3925297