目的:通過(guò)建立HepG2和Huh-7肝癌細(xì)胞模型與裸鼠異種移植腫瘤模型,從體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)探討白頭翁皂苷B4(Anemoside B4,AB4)抑制肝癌的作用,并從Notch通路的角度探究其可能的作用機(jī)制。方法:1.將肝癌細(xì)胞隨機(jī)分組為對(duì)照組、AB4給藥組、陽(yáng)性對(duì)照組(DAPT組),采用MTT及克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)AB4對(duì)肝癌細(xì)胞的抑制作用,AnnexinV-FITC/PI染色檢測(cè)AB4給藥后肝癌細(xì)胞的凋亡情況,蛋白免疫印跡法(Western Blot)檢測(cè)AB4給藥后肝癌細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)。2.建立荷瘤裸鼠異種移植模型,隨機(jī)分組為對(duì)照組、AB4給藥組、陽(yáng)性對(duì)照組(DAPT組),探究AB4對(duì)荷瘤裸鼠腫瘤的抑制作用;制作荷瘤裸鼠腫瘤組織病理切片,采用HE染色觀察AB4給藥后組織病理形態(tài);運(yùn)用免疫組化檢測(cè)AB4給藥后腫瘤組織Ki67的表達(dá),以探究腫瘤組織中肝癌細(xì)胞的增殖情況。3.運(yùn)用Western blot檢測(cè)AB4作用后肝癌細(xì)胞Notch通路相關(guān)蛋白的表達(dá)情況,運(yùn)用免疫組化檢測(cè)AB4給藥后荷瘤裸鼠腫瘤組織Notch相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果:1.MTT實(shí)驗(yàn)中,AB4在一定范圍內(nèi)以濃度依賴性的...

【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
第一部分 體外實(shí)驗(yàn)探究AB4對(duì)肝癌細(xì)胞的抑制效果
    實(shí)驗(yàn)材料與方法
        1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 藥品與試劑
            1.2 儀器與設(shè)備
            1.3 細(xì)胞
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 藥物溶液的配制
            2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.3 細(xì)胞復(fù)蘇
            2.4 細(xì)胞傳代
            2.5 細(xì)胞凍存
            2.6 MTT實(shí)驗(yàn)
            2.7 克隆形成實(shí)驗(yàn)
            2.8 Annexin V-FITC/PI染色
            2.9 蛋白免疫印跡法(Western Blot)
            2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1 AB4對(duì)肝癌細(xì)胞的抑制作用
            1.1 MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)AB4 對(duì)肝癌細(xì)胞增殖率的影響
            1.2 克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)AB4 對(duì)肝癌細(xì)胞的長(zhǎng)期抑制效果
        2 AB4 誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞發(fā)生凋亡
            2.1 Annexin V-FITC/PI染色檢測(cè)肝癌細(xì)胞凋亡情況
            2.2 Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)肝癌細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)
    討論
第二部分 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)探究AB4對(duì)荷瘤裸鼠的抑制作用
    實(shí)驗(yàn)材料與方法
        1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 藥品與試劑
            1.2 儀器與設(shè)備
            1.3 細(xì)胞與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 藥物溶液的配制
            2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)
            2.3 荷瘤裸鼠模型的制備
            2.4 隨機(jī)分組與給藥
            2.5 HE染色
            2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1 AB4 給藥后荷瘤裸鼠成瘤情況
        2 AB4 給藥后對(duì)荷瘤裸鼠腫瘤組織形態(tài)學(xué)的影響
        3 AB4 給藥后對(duì)荷瘤裸鼠腫瘤組織Ki67 表達(dá)的影響
    討論
第三部分 AB4 對(duì)肝癌的抑制作用與Notch通路的關(guān)系
    實(shí)驗(yàn)材料與方法
        1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 藥品與試劑
            1.2 儀器與設(shè)備
            1.3 細(xì)胞
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 Western Blot實(shí)驗(yàn)
            2.2 免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)(Immunohistochemistry)
            2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1 Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)肝癌細(xì)胞Notch通路相關(guān)蛋白的表達(dá)
        2 Immunohistochemistry實(shí)驗(yàn)檢測(cè)荷瘤裸鼠腫瘤組織Notch通路相關(guān)蛋白的表達(dá)
    討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
縮略詞表
致謝



本文編號(hào)：3924577