目的:包蟲病的治療目前以苯并咪唑類藥物為主,阿苯達唑是國際公認最有效的抗包蟲藥物,但由于阿苯達唑治療周期長(6個月以上),對人體產(chǎn)生明顯的毒副作用。因此尋找新的有效抗包蟲藥物是目前亟待解決的問題。本實驗研究基于計算機模擬分子對接技術(shù)通過目前臨床推薦使用的有效抗包蟲藥物與包蟲β-tubulin結(jié)合能,驗證抗包蟲藥物與包蟲β-tubulin結(jié)合能的大小與對包蟲的治療效果是否正相關(guān),進一步驗證計算機模擬分子對接技術(shù)在抗包蟲藥物篩選上應(yīng)用的可行性,進而利用計算機模擬分子對接技術(shù)篩選抗包蟲的中藥單體。隨后通過體外實驗,驗證所篩選出的中藥單體實際抗包蟲效果,并從細胞毒性實驗方面進一步篩選未來可能進入臨床應(yīng)用的藥物。方法:利用Schrodinger 9.3.5軟件對細粒棘球絳蟲β-tubulin計算機同源建模,用Schrodinger 9.3.5軟件分子對接驗證苯并咪唑類藥物,用AutoDock軟件分子對接篩選中藥單體的篩選。通過已篩選苯并咪唑類藥物和中藥單體處理體外培養(yǎng)細粒棘球絳蟲原頭蚴,觀察原頭節(jié)形態(tài)學(xué)變化及計算死亡率。堿性磷酸酶檢測試劑盒檢測藥物處理原頭節(jié)培養(yǎng)液堿性磷酸酶活性,Western ...

【文章頁數(shù)】：102 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 包蟲病
        1.1.1 囊型包蟲病
        1.1.2 泡型包蟲病
    1.2 包蟲病的治療
        1.2.1 外科手術(shù)治療
        1.2.2 西藥治療
        1.2.3 中藥治療
        1.2.4 中西藥聯(lián)合治療
    1.3 計算機模擬分子對接技術(shù)
        1.3.1 分子對接技術(shù)
        1.3.2 分子對接技術(shù)原理
        1.3.3 計算機模擬分子對接技術(shù)在中藥篩選中的應(yīng)用
    1.4 微管蛋白
        1.4.1 微管蛋白的結(jié)構(gòu)和作用
        1.4.2 藥物的靶蛋白——微管蛋白
        1.4.3 抗寄生蟲藥苯并咪唑類藥物與微管蛋白
    1.5 研究目的與意義
第二章 計算機模擬分子對接技術(shù)對抗包蟲藥物的篩選
    2.1 實驗材料
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細粒棘球絳蟲β-tubulin計算機同源建模
        2.2.2 并苯咪唑類藥物與細粒棘球絳蟲β-Tublin蛋白分子對接的驗證..
        2.2.3 中藥單體與細粒棘球絳蟲β-Tublin蛋白分子對接的篩選
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 細粒棘球絳蟲β-tubulin三維結(jié)構(gòu)模型
        2.3.2 計算機模擬驗證苯并咪唑類藥物與細粒棘球絳蟲β-tubulin分子對接
        2.3.3 計算機模擬對接示意圖
        2.3.4 計算機模擬篩選中藥單體庫與細粒棘球絳蟲β-tubulin分子對接.
    2.4 討論
        2.4.1 細粒棘球絳蟲β-tubulin計算機同源建模
        2.4.2 苯并咪唑藥物與細粒棘球絳蟲β-tubulin模型分子對接的驗證
        2.4.3 通過分子對接技術(shù)篩選與β-tubulin結(jié)合的中藥單體
第三章 分子對接驗證苯并咪唑類藥物與篩選中藥單體體外抗原頭蚴的研究
    3.1 實驗材料
        3.1.1 細粒棘球絳蟲原頭蚴
        3.1.2 阿苯達唑亞砜對映體拆分試劑
        3.1.3 藥物配置
        3.1.4 主要試劑
        3.1.5 主要儀器及設(shè)備
        3.1.6 主要試劑的配制
    3.2 實驗方法
        3.2.1 阿苯達唑亞砜對映體拆分
        3.2.2 細粒棘球蚴原頭節(jié)體外培養(yǎng)
        3.2.3 堿性磷酸酶的檢測
        3.2.4 Westernbloting檢測原頭節(jié)β-TublinmRNA的表達
        3.2.5 qPCR檢測原頭節(jié)β-TublinmRNA的含量
        3.2.6 數(shù)據(jù)處理及實驗結(jié)果統(tǒng)計學(xué)分析
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 阿苯達唑亞砜拆分
        3.3.2 苯并咪唑類藥物體外抗包蟲的觀察
        3.3.3 苯并咪唑類藥物對原頭節(jié)的抑制率
        3.3.4 并苯咪唑類藥物對堿性磷酸酶的影響
        3.3.5 并苯咪唑類藥物對原頭節(jié)β-Tublin蛋白表達的影響
        3.3.6 并苯咪唑類藥物對包蟲β-TublinmRNA表達的影響
        3.3.7 中藥單體體外抗包蟲的觀察
        3.3.8 中藥單體對原頭節(jié)的抑制率
        3.3.9 中藥單體對堿性磷酸酶的影響
        3.3.10 中藥單體對包蟲β-Tublin蛋白表達的影響
        3.3.11 中藥單體對包蟲β-TublinmRNA表達的影響
    3.4 討論
        3.4.1 體外藥物處理原頭節(jié)的實驗研究
        3.4.2 分子對接技術(shù)驗證苯并咪唑類藥物體外抗包蟲的實驗研究
        3.4.3 分子對接技術(shù)篩選中藥單體體外抗包蟲的實驗研究
第四章 阿苯達唑亞砜與中藥單體的細胞毒性研究
    4.1 實驗材料
        4.1.1 HepG2細胞
        4.1.2 藥物配置
        4.1.3 主要試劑
        4.1.4 主要儀器及設(shè)備
        4.1.5 主要試劑的配制
    4.2 實驗方法
        4.2.1 細胞培養(yǎng)
        4.2.2 實驗分組
        4.2.3 HepG2細胞增殖的檢測
        4.2.4 HepG2細胞周期影響的檢測
        4.2.5 HepG2細胞早期凋亡的檢測
        4.2.6 Westernblot檢測HepG2細胞的凋亡相關(guān)蛋白
        4.2.7 qPCR檢測HepG2細胞凋亡相關(guān)蛋白mRNA的含量
        4.2.8 細胞免疫熒光檢測HepG2細胞的微管形成
        4.2.10 數(shù)據(jù)處理及實驗結(jié)果統(tǒng)計學(xué)分析
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 阿苯達唑亞砜及其對映體對HepG2細胞增殖的影響
        4.3.2 阿苯達唑亞砜及其對映體對HepG2形態(tài)及細胞凋亡的影響
        4.3.3 阿苯達唑亞砜及其對映體對HepG2細胞周期的影響
        4.3.4 阿苯達唑亞砜及其對映體對HepG2細胞凋亡的影響
        4.3.5 阿苯達唑亞砜及其對映體對HepG2細胞凋亡相關(guān)蛋白表達的影響
        4.3.6 阿苯達唑亞砜及對映體對HepG2細胞凋亡相關(guān)蛋白mRNA表達的影響
        4.3.7 阿苯達唑亞砜及其對映體對HepG2細胞微管的影響
        4.3.8 中藥單體PFM和NIP對HepG2細胞增殖的影響
        4.3.9 中藥單體PFM和NIP對HepG2細胞凋亡及其形態(tài)的影響
        4.3.10 中藥單體PFM與NIP對HepG2細胞周期的影響
        4.3.11 中藥單體PFM與NIP對HepG2細胞凋亡的影響
        4.3.12 中藥單體PFM與NIP對HepG2細胞凋亡相關(guān)蛋白的影響
        4.3.13 中藥單體PFM和NIP對HepG2細胞凋亡相關(guān)蛋白mRNA的影響
        4.3.14 中藥單體PFM與NIP對HepG2細胞微管的影響
    4.4 討論
        4.4.1 細胞毒性實驗
        4.4.2 阿苯達唑亞砜及其對映體細胞毒性實驗
        4.4.3 中藥單體PFM、NIP細胞毒性實驗
第五章 結(jié)論
    5.1 主要結(jié)論
    5.2 研究展望
參考文獻
在校期間的研究成果
縮略詞表
致謝



本文編號：3875229