目的:動態(tài)觀察應用疏肝健脾活血方含藥血清對HSC-SEC共培養(yǎng)下HSC活力、SEC失窗孔及Notch通路的影響,探討疏肝健脾活血方抗肝纖維化的作用機制。方法:制備疏肝健脾活血方含藥血清;建立肝纖維化大鼠模型,觀察肝組織病理形態(tài)變化,采用膠原酶灌注、Percoll不連續(xù)密度梯度離心法分離正常大鼠HSC、SEC及肝纖維化大鼠SEC。以Notch通路激活劑rh NF-κB、阻斷劑DAPT及疏肝健脾活血方含藥血清作用于HSC-SEC共培養(yǎng)體系,MTT法檢測HSC活力,Western Blot法檢測SEC中CD31、v WF及HSC中ColⅣ、Notch 1、Jagged 1、Hes 1蛋白表達量,RTq PCR法檢測HSC中Notch 1、Jagged 1、Hes 1 m RNA表達情況。結果:與正常組比,模型組HSC活力上升(P<0.05,P<0.01);與模型組比,NF組HSC活力及Jagged 1m RNA表達量上升(P<0.05,P<0.01),DAPT組HSC活力,CD31、ColⅣ、Notch 1、Jagged 1蛋白及Notch 1、Jagged 1、He...

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【學位級別】：碩士

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中英文對照
摘要
ABSTRACT
前言
一、材料與方法
    (一)材料
        1.實驗動物
        2.主要儀器、耗材及試劑
    (二)方法
        1.中藥含藥血清提取
        2.HSC分離、培養(yǎng)及鑒定
        3.中藥含藥血清及Notch通路干預劑濃度篩選
        4.SEC分離、培養(yǎng)及鑒定
        5.細胞分組及藥物干預
        6.觀測指標
        7.統(tǒng)計方法
二、結果
    (一)大鼠一般情況及肝組織病理形態(tài)學觀察
        1.一般情況
        2.肝組織病理形態(tài)學變化
    (二)SEC、HSC計數(shù)及鑒定
        1.SEC、HSC計數(shù)及形態(tài)觀察
        2.SEC、HSC免疫熒光鑒定
    (三)中藥含藥血清及藥物濃度篩選
        1.中藥含藥血清濃度篩選
        2.藥物濃度篩選
    (四)HSC-SEC共培養(yǎng)下各組HSC活力檢測
    (五)各組CD31、vWF、ColⅣ、Notch1、Jagged1、Hes1蛋白表達量
        1.造模2周組各指標蛋白相對表達量
        2.造模4周組各指標蛋白相對表達量
        3.造模8周組各指標蛋白相對表達量
    (六)各組Notch1、Jagged1、Hes1mRNA表達量
        1.造模2周組各指標mRNA相對表達量
        2.造模4周組各指標mRNA相對表達量
        3.造模8周組各指標mRNA相對表達量
三、分析與討論
    (一)肝纖維化動物模型誘導方法
        1.肝纖維化不同造模方法比較
        2.CCl4法誘導大鼠肝纖維化的病理分期討論
    (二)HSC活化是肝纖維化的中心環(huán)節(jié)
        1.HSC是ECM主要來源
        2.肝纖維化逆轉重點在于抑制HSC活化
        3.原代HSC分離、鑒定與培養(yǎng)討論
    (三)病理性血管新生是肝纖維化的主要特征
        1.SEC失窗孔是多種肝臟疾病的始動環(huán)節(jié)
        2.Notch通路與肝纖維化病理性血管新生密切相關
    (四)疏肝健脾活血方對HSC活化、SEC失窗孔及Notch通路的影響
        1.中醫(yī)對肝纖維化的認識
        2.疏肝健脾活血方組方要義
        3.疏肝健脾活血方對HSC活化、SEC失窗孔及Notch通路的影響
四、小結
結論
參考文獻
附圖
致謝
綜述
    參考文獻



本文編號：3872865