目的:1、探究細胞膜固定在多孔羥基硅球上的機理,促進用于色譜方法的仿生載體的制備。2、通過建立細胞和動物模型探討注射用益氣復脈(凍干)(yi qi fu mai powder injection,YQFM)對阿霉素(doxorubicin,DOX)誘導的心臟毒性的保護作用。方法:以兔紅細胞為原材料,使用低滲透膨脹法獲取細胞膜。在減壓震蕩條件下制備兔紅細胞膜修飾載體的固定相。根據(jù)載體類型、多孔硅球的孔徑、酶活性及細胞膜固定化動力學進行了批處理固定化研究。利用高效液相色譜考察不同孔徑的多孔硅球載體色譜柱與陽性藥物的結合能力和穩(wěn)定性。通過共聚焦顯微鏡進一步觀察制備的多孔和無孔硅球上通過熒光標記的細胞膜的分布情況。YQFM對DOX誘導的心臟毒性的保護作用研究是先建立DOX誘導的大鼠心肌細胞(H9c2)損傷模型:提前2 h給予不同濃度的YQFM,再與DOX共同培養(yǎng)48 h。CCK-8測定細胞存活率;再分別檢測乳酸脫氫酶(LDH)、ATP含量;Hoechst染色法檢測DOX損傷H9c2細胞的凋亡情況;JC-1探針法檢測H9c2細胞的線粒體膜電位;Western-blot法檢測caspase-3的表...

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語/符號說明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
一、細胞膜固定化機理
    1.1 材料與儀器
        1.1.1 實驗試劑
        1.1.2 實驗儀器
    1.2 實驗方法
        1.2.1 細胞膜的提取
        1.2.2 批處理實驗
        1.2.3 細胞膜色譜分析
        1.2.4 固定化動力學
        1.2.5 共聚焦成像
    1.3 結果
        1.3.1 固體載體的優(yōu)化
        1.3.2 細胞膜色譜分析結果
        1.3.3 固定化動力學結果
        1.3.4 共聚焦成像結果
    1.4 討論
    1.5 小結
二、注射用益氣復脈(凍干)對心臟毒性保護作用初探
    2.1 試劑與儀器
        2.1.1 實驗細胞
        2.1.2 實驗動物
        2.1.3 實驗試劑
        2.1.4 實驗儀器
        2.1.5 主要實驗試劑溶液配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細胞復蘇、培養(yǎng)及傳代
        2.2.2 H9c2細胞生長曲線
        2.2.3 不同濃度阿霉素對H9c2細胞生存率影響
        2.2.4 不同濃度YQFM對H9c2細胞生存率影響
        2.2.5 細胞內(nèi)乳酸脫氫酶的測定
        2.2.6 細胞內(nèi)ATP水平的測定
        2.2.7 Hoechst染色法檢測細胞凋亡
        2.2.8 JC-1探針法檢測線粒體膜電位
        2.2.9 Western-blot檢測凋亡蛋白
        2.2.10 動物實驗造模
        2.2.11 血清肌酸激酶(CK)的測定
        2.2.12 心臟組織病理檢查
    2.3 結果
        2.3.1 H9c2細胞生長曲線
        2.3.2 CCK-8測定不同濃度的阿霉素對心肌細胞生存率影響
        2.3.3 不同濃度YQFM對H9c2細胞生存率影響
        2.3.4 細胞內(nèi)乳酸脫氫酶的測定
        2.3.5 細胞內(nèi)ATP水平的測定結果
        2.3.6 Hoechst染色法檢測阿霉素損傷心肌細胞的凋亡情況
        2.3.7 JC-1探針法檢測線粒體膜電位
        2.3.8 Western-blot檢測凋亡蛋白
        2.3.9 模型建立結果
        2.3.10 小鼠體重和心臟指數(shù)變化
        2.3.11 血清肌酸激酶的檢測
        2.3.12 HE(蘇木精-伊紅)染色
    2.4 討論
    2.5 小結
結論
參考文獻
發(fā)表論文和參加科研情況說明
綜述
    綜述參考文獻
致謝
個人簡歷



本文編號：3813478