發(fā)布時(shí)間：2023-05-10 20:42

　　目的:1、探究細(xì)胞膜固定在多孔羥基硅球上的機(jī)理,促進(jìn)用于色譜方法的仿生載體的制備。2、通過建立細(xì)胞和動(dòng)物模型探討注射用益氣復(fù)脈(凍干)(yi qi fu mai powder injection,YQFM)對阿霉素(doxorubicin,DOX)誘導(dǎo)的心臟毒性的保護(hù)作用。方法:以兔紅細(xì)胞為原材料,使用低滲透膨脹法獲取細(xì)胞膜。在減壓震蕩條件下制備兔紅細(xì)胞膜修飾載體的固定相。根據(jù)載體類型、多孔硅球的孔徑、酶活性及細(xì)胞膜固定化動(dòng)力學(xué)進(jìn)行了批處理固定化研究。利用高效液相色譜考察不同孔徑的多孔硅球載體色譜柱與陽性藥物的結(jié)合能力和穩(wěn)定性。通過共聚焦顯微鏡進(jìn)一步觀察制備的多孔和無孔硅球上通過熒光標(biāo)記的細(xì)胞膜的分布情況。YQFM對DOX誘導(dǎo)的心臟毒性的保護(hù)作用研究是先建立DOX誘導(dǎo)的大鼠心肌細(xì)胞(H9c2)損傷模型:提前2 h給予不同濃度的YQFM,再與DOX共同培養(yǎng)48 h。CCK-8測定細(xì)胞存活率;再分別檢測乳酸脫氫酶(LDH)、ATP含量;Hoechst染色法檢測DOX損傷H9c2細(xì)胞的凋亡情況;JC-1探針法檢測H9c2細(xì)胞的線粒體膜電位;Western-blot法檢測caspase-3的表...

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語/符號(hào)說明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
一、細(xì)胞膜固定化機(jī)理
    1.1 材料與儀器
        1.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 細(xì)胞膜的提取
        1.2.2 批處理實(shí)驗(yàn)
        1.2.3 細(xì)胞膜色譜分析
        1.2.4 固定化動(dòng)力學(xué)
        1.2.5 共聚焦成像
    1.3 結(jié)果
        1.3.1 固體載體的優(yōu)化
        1.3.2 細(xì)胞膜色譜分析結(jié)果
        1.3.3 固定化動(dòng)力學(xué)結(jié)果
        1.3.4 共聚焦成像結(jié)果
    1.4 討論
    1.5 小結(jié)
二、注射用益氣復(fù)脈(凍干)對心臟毒性保護(hù)作用初探
    2.1 試劑與儀器
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.5 主要實(shí)驗(yàn)試劑溶液配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)及傳代
        2.2.2 H9c2細(xì)胞生長曲線
        2.2.3 不同濃度阿霉素對H9c2細(xì)胞生存率影響
        2.2.4 不同濃度YQFM對H9c2細(xì)胞生存率影響
        2.2.5 細(xì)胞內(nèi)乳酸脫氫酶的測定
        2.2.6 細(xì)胞內(nèi)ATP水平的測定
        2.2.7 Hoechst染色法檢測細(xì)胞凋亡
        2.2.8 JC-1探針法檢測線粒體膜電位
        2.2.9 Western-blot檢測凋亡蛋白
        2.2.10 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)造模
        2.2.11 血清肌酸激酶(CK)的測定
        2.2.12 心臟組織病理檢查
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 H9c2細(xì)胞生長曲線
        2.3.2 CCK-8測定不同濃度的阿霉素對心肌細(xì)胞生存率影響
        2.3.3 不同濃度YQFM對H9c2細(xì)胞生存率影響
        2.3.4 細(xì)胞內(nèi)乳酸脫氫酶的測定
        2.3.5 細(xì)胞內(nèi)ATP水平的測定結(jié)果
        2.3.6 Hoechst染色法檢測阿霉素?fù)p傷心肌細(xì)胞的凋亡情況
        2.3.7 JC-1探針法檢測線粒體膜電位
        2.3.8 Western-blot檢測凋亡蛋白
        2.3.9 模型建立結(jié)果
        2.3.10 小鼠體重和心臟指數(shù)變化
        2.3.11 血清肌酸激酶的檢測
        2.3.12 HE(蘇木精-伊紅)染色
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
發(fā)表論文和參加科研情況說明
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡歷



本文編號(hào)：3813478