目的:本課題旨在通過觀察黃芩苷對H2O2誘導(dǎo)的氧化受損心肌細胞中Wnt/β-catenin信號通路的調(diào)控作用及其心肌細胞保護作用,探討黃芩苷改善心肌細胞氧化損傷的分子機制。方法:先通過TOPFLASH/Renilla雙熒光素酶報告基因技術(shù),檢測黃芩苷對β-catenin/TCF轉(zhuǎn)錄活性的影響,明確黃芩苷對Wnt/β-catenin信號通路的調(diào)控作用。然后,用H2O2刺激H9c2大鼠心臟細胞,誘導(dǎo)心肌氧化損傷細胞模型,分別采用MTT法、Western Blot法檢測不同濃度的黃芩苷對H202刺激H9c2細胞誘導(dǎo)的心肌氧化損傷細胞模型的細胞活力、細胞凋亡相關(guān)指標和Wnt/β-catenin信號通路轉(zhuǎn)錄活性相關(guān)蛋白表達的影響,初步評價黃芩苷對心肌氧化損傷細胞模型中Wnt/β-catenin信號通路的調(diào)控作用及其心肌細胞保護作用。進而,通過siRNA沉默H9c2細胞中β-catenin的表達,觀察β-catenin表達下調(diào)對H9c2細胞氧化損傷的影響,并探討β-catenin在H9c2細胞氧化損傷中的作用。最后,用LiCl(β-catenin的穩(wěn)定劑)干預(yù)H9c2細胞,觀察黃芩苷對LiCl干預(yù)...

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
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中文摘要
Abstract
圖文摘要
Graphical Abstract
引言
實驗材料與方法
    1 實驗動物及細胞株
    2 中藥單體及配制
    3 質(zhì)粒
    4 試劑與耗材
        4.1 抗體
        4.2 試劑
        4.3 耗材
    5 儀器與設(shè)備
    6 實驗方法
        6.1 細胞株的培養(yǎng)方法
        6.2 SD乳鼠原代心肌細胞的獲取與培養(yǎng)
        6.3 細胞計數(shù)與鋪盤
        6.4 心肌氧化損傷細胞模型的建立及黃芩苷干預(yù)
        6.5 細胞轉(zhuǎn)染
        6.6 TOPFLASH/Renilla雙熒光素酶報告基因檢測
        6.7 蛋白提取與濃度測定
        6.8 蛋白印跡
        6.9 MTT
    7 統(tǒng)計學(xué)分析
實驗結(jié)果
    1 黃芩苷對Wnt/β-catenin信號通路活化程度的影響
        1.1 黃芩苷對Wnt3a活化的β-catenin/TCF轉(zhuǎn)錄活性的影響
        1.2 黃芩苷對Wnt/β-catenin信號通路激活劑活化的β-catenin/TCF轉(zhuǎn)錄活性的影響
        小結(jié)
    2 黃芩苷對H9c2細胞氧化損傷的保護作用及機制
        2.1 黃芩苷對H₂O₂刺激H9c2細胞誘導(dǎo)的心肌氧化損傷細胞模型的細胞活力的影響
        2.2 黃芩苷對H₂O₂刺激H9c2細胞誘導(dǎo)的心肌氧化損傷細胞模型中凋亡相關(guān)指標的影響
        2.3 黃芩苷對H₂O₂刺激H9c2細胞誘導(dǎo)的心肌氧化損傷細胞模型的Wnt/β-catenin信號通路的影響
        2.4 黃芩苷改善心肌細胞氧化損傷的機制探討
        小結(jié)
    3 黃芩苷對原代心肌細胞氧化損傷的保護作用及機制
        3.1 黃芩苷對H₂O₂刺激原代心肌細胞誘導(dǎo)的心肌氧化損傷細胞模型的細胞活力的影響
        3.2 黃芩苷對H₂O₂刺激原代心肌細胞誘導(dǎo)的心肌氧化損傷細胞模型的凋亡相關(guān)指標的影響
        3.3 黃芩苷對H₂O₂刺激原代心肌細胞誘導(dǎo)的心肌氧化損傷細胞模型的核內(nèi)β-catenin表達的影響
        小結(jié)
討論
結(jié)論
參考文獻
文獻綜述
    參考文獻
致謝
作者簡介



本文編號：3804012