物種組成鑒定研究是中成藥質(zhì)量評價體系的關(guān)鍵問題之一。傳統(tǒng)中成藥質(zhì)量評價方法包括性狀鑒別、顯微鑒別、理化技術(shù)等,對于形態(tài)相似的近緣物種和含有相同化學成分的物種難以區(qū)分,制劑中未知有毒有害或者瀕危珍稀物種成分無法檢測,因此,有必要結(jié)合分子生物學方法鑒定中成藥復雜的物種組成信息。馬兜鈴酸類物質(zhì)(AAs)由于具有不可逆轉(zhuǎn)的腎臟毒性被列為Ⅰ級致癌物,主要來自馬兜鈴屬、細辛屬等馬兜鈴科植物。目前,一些含AAs植物仍作為傳統(tǒng)藥物使用,對公眾健康的獲益—風險評估值得關(guān)注。本論文首先選取2015年版《中國藥典》收載的兩種含馬兜鈴科植物的清肺化痰中成藥——兒童清肺丸和止嗽化痰丸為研究對象,結(jié)合分子生物學及化學方法,以期建立一種準確、有效的中成藥物種組成鑒定研究方法;然后,采取相關(guān)分子生物學技術(shù)——TaqMan探針實時熒光PCR法,驗證重要組分是否存在,并以冬蟲夏草及易混品,澤瀉及近緣物種東方澤瀉為例開展方法測試研究。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:1.建立二代測序技術(shù)、TaqMan探針實時熒光PCR技術(shù)和液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)相結(jié)合的方法,開展中成藥兒童清肺丸的物種組成鑒定研究。二代測序結(jié)果顯示,除法半夏、橘紅、石膏和鍛靑...

【文章頁數(shù)】：134 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1 AAs抗腫瘤活性
    2 AAs及含AAs藥材的肝臟毒性
    3 AAs的腎毒性及致癌機制
    4 控制Ⅰ級致癌物AAs的方案
    5 結(jié)語及展望
    6 本課題研究的創(chuàng)新點、目的及意義
    參考文獻
第二章 中成藥兒童清肺丸物種組成鑒定研究
    1 引言
    2 材料與方法
    3 結(jié)果與分析
        3.1 實驗藥材及飲片基原物種的鑒定
        3.2 中成藥兒童清肺丸DNA質(zhì)量檢測
        3.3 中成藥兒童清肺丸PCR產(chǎn)物文庫構(gòu)建
        3.4 中成藥兒童清肺丸二代測序數(shù)據(jù)分析
        3.5 中成藥兒童清肺丸TaqMan探針實時熒光PCR的特異性
        3.6 中成藥兒童清肺丸AAI含量測定
    4 討論
    參考文獻
第三章 中成藥止嗽化痰丸物種組成鑒定研究
    1 引言
    2 材料與方法
    3 結(jié)果與分析
        3.1 實驗藥材及飲片基原物種的鑒定
        3.2 中成藥止嗽化痰丸DNA質(zhì)量檢測
        3.3 中成藥止嗽化痰丸PCR產(chǎn)物文庫構(gòu)建
        3.4 中成藥止嗽化痰丸二代測序數(shù)據(jù)分析
        3.5 中成藥止嗽化痰丸TaqMan探針實時熒光PCR的特異性
        3.6 中成藥止嗽化痰丸AAI含量測定
    4 討論
    參考文獻
第四章 基于便攜式和CFX96實時熒光PCR儀的冬蟲夏草及其混偽品鑒定研究
    1 引言
    2 材料與方法
    3 結(jié)果與分析
        3.1 樣品DNA質(zhì)量
        3.2 實時熒光PCR鑒定的靈敏度
        3.3 實時熒光PCR特異性鑒定研究
        3.4 TaqMan探針實時熒光PCR法快速鑒別冬蟲夏草標準流程
    4 討論
    參考文獻
第五章 基于DNA條形碼和實時熒光PCR法的澤瀉藥材鑒定研究
    1 引言
    2 材料與方法
    3 結(jié)果與分析
        3.1 樣品DNA濃度及純度
        3.2 樣品PCR擴增、鑒定情況
        3.3 東方澤瀉和澤瀉的種內(nèi)種間變異分析
        3.4 東方澤瀉和澤瀉的聚類分析
        3.5 TaqMan探針實時熒光PCR鑒定
    4 討論
    參考文獻
第六章 主要結(jié)論與展望
    1 主要結(jié)論
    2 展望
附錄
致謝
作者簡介



本文編號：3800452