發(fā)布時(shí)間：2023-02-27 17:47

　　背景和目的:糖尿病腎病(diabetic nephropathy,DN)是一種常見的代謝類疾病,其和終末期腎功能衰竭(ESRF)存在密切的關(guān)系,目前關(guān)于DN病理和療法的研究在不斷增加,并取得了很多重要的成果。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)在一定因素刺激下,相關(guān)炎性因子表達(dá)量會(huì)提高,引發(fā)NF-κB活化,這會(huì)導(dǎo)致糖尿病腎病的病情加重,不過其作用機(jī)理和相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路還不是很明確。大量研究表明,參與炎癥反應(yīng)的單核巨噬細(xì)胞首先需要激活JAK/STAT信號(hào)通路并啟動(dòng)自身下游信號(hào)通路,導(dǎo)致巨噬細(xì)胞被激活并引發(fā)相關(guān)的炎性反應(yīng),這會(huì)增加此類患者的腎臟損害,因而在進(jìn)行治療時(shí)可以將其看作為相應(yīng)的靶點(diǎn)。近年來中藥治療DN受到人們的關(guān)注,芍藥苷(Paeoniflorin,PF)是白芍總苷的活性成分,其具有一定的抗氧化和提高機(jī)體免疫力的作用。在這項(xiàng)研究中,PF被用于鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的糖尿病模型和高糖刺激的RAW264.7小鼠巨噬細(xì)胞系,從整體,細(xì)胞等角度分析了JAK/STAT信號(hào)通路的變化情況,并深入分析了此信號(hào)通路在糖尿病腎病發(fā)生和發(fā)展過程中的作用,為這種疾病的防治起到參考作用。方法:第一部分:采用RAW264.7小鼠巨噬細(xì)胞系...

【文章頁數(shù)】：112 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
英文縮略詞(Abbreviation)
中文摘要
Abstract
引言
研究一 芍藥苷通過JAK2/STAT3信號(hào)通路抑制高糖誘導(dǎo)的RAW264.7巨噬細(xì)胞激活
    1.引言
    2.實(shí)驗(yàn)材料
        2.1 主要儀器
        2.2 主要試劑
    3.實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 主要試劑配制
        3.2 RAW264.7細(xì)胞系的復(fù)蘇、換液、傳代、凍存
        3.3 選取JAK2/STAT3基因沉默最佳的干擾序列
        3.4 Westernblotting檢測(cè)各組巨噬細(xì)胞的蛋白表達(dá)
        3.5 不同高糖刺激濃度對(duì)RAW264.7巨噬細(xì)胞及JAK2/STAT3表達(dá)的影響
        3.6 不同時(shí)間點(diǎn)高糖刺激對(duì)JAK2/STAT3激活及RAW264.7巨噬細(xì)胞活化的影響
        3.7 不同芍藥苷濃度對(duì)高糖刺激引起JAK2/STAT3激活及RAW264.7巨噬細(xì)胞活化的影響
        3.8 巨噬細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分組
        3.9 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)各組RAW264.7巨噬細(xì)胞的mRNA的表達(dá)
        3.10 ELISA法檢測(cè)各組巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子含量
        3.11 MCP-1趨化實(shí)驗(yàn)
        3.12 細(xì)胞免疫熒光
        3.13 統(tǒng)計(jì)分析
    4.結(jié)果
        4.1 PF對(duì)高糖環(huán)境中RAW264.7巨噬細(xì)胞活性的影響
        4.2 選取JAK2/STAT3基因沉默最佳的干擾序列
        4.3 RAW264.7細(xì)胞在不同高糖刺激濃度下P-JAK2及STAT3的表達(dá)
        4.4 不同時(shí)間點(diǎn)高糖刺激對(duì)P-JAK2、STAT3激活及RAW264.7細(xì)胞活化的影響
        4.5 不同濃度Paeoniflorin對(duì)高糖環(huán)境中RAW264.7細(xì)胞p-JAK2,p-STAT2蛋白表達(dá)的影響
        4.6 JAK2/STAT3基因沉默及PF干預(yù)對(duì)高糖刺激巨噬細(xì)胞遷徙能力的影響
        4.7 高糖刺激、PF干預(yù)對(duì)iNOS、TNF-α、IL-1β和MCP-1mRNA表達(dá)的影響
        4.8 高糖刺激對(duì)RAW264.7巨噬細(xì)胞培養(yǎng)基中分泌TNF-α、IL-1β、MCP-1的影響
        4.9 高糖刺激RAW264.7M1活化及JAK2/STAT3基因沉默、PF干預(yù)的影響
    5.討論
        5.1 巨噬細(xì)胞與糖尿病腎病
        5.2 JAK2/STAT3信號(hào)通路與糖尿病腎病
        5.3 PF治療與糖尿病腎病
    6.結(jié)論
    7.參考文獻(xiàn)
研究二 芍藥苷通過JAK2/STAT3信號(hào)通路抑制糖尿病小鼠腎組織炎癥作用與機(jī)制
    1.引言
    2.實(shí)驗(yàn)材料
        2.1 主要儀器
        2.2 主要試劑
        2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    3.實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 主要試劑配置
        3.2 動(dòng)物模型建立及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組
        3.3 實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的收集
        3.4 血糖指標(biāo)測(cè)定
        3.5 尿白蛋白排泄率測(cè)定
        3.6 病理形態(tài)學(xué)的觀察
        3.7 免疫組織化學(xué)染色
        3.8 蛋白印跡檢測(cè)各組腎組織的蛋白表達(dá)
        3.9 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)各組巨噬細(xì)胞的mRNA的表達(dá)
        3.10 統(tǒng)計(jì)分析
    4.結(jié)果
        4.1 各組小鼠一般情況
        4.2 各組小鼠一般指標(biāo)變化
        4.3 各組小鼠腎組織病理學(xué)改變
        4.4 各組小鼠腎組織CD68、p-JAK2與p-STAT3免疫組化改變
        4.5 各組小鼠腎組織p-JAK2/JAK2與p-STAT3/STAT3蛋白的表達(dá)
        4.6 各組小鼠腎組織TNF-α、IL1-β、MCP-1和iNOSmRNA表達(dá)
    5.討論
    6.結(jié)論
    7.參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3751169