目的:觀察補腎填髓方干預Aβ_25-35影響的C6大鼠膠質(zhì)瘤細胞中以BDNFmRNA標靶的miRNA-206-3p表達的影響,探討補腎填髓法的抗癡呆作用及其可能的機制,為指導臨床應用和開發(fā)新藥提供理論和實驗依據(jù)。方法:1.含藥血清的制備:將健康SD大鼠,隨機分為空白血清組和補腎填髓方組,各組動物給予相應藥物或生理鹽水灌胃。其中補腎填髓方低、高劑量組灌胃濃度為1:6,后取血、離心備用。2.C6細胞的培養(yǎng):將C6細胞進行培養(yǎng),取對數(shù)生長期細胞進行實驗研究,以β-淀粉樣蛋白(Aβ_25-35)處理制備阿爾茨海默病細胞模型。分為空白血清組、模型組、低劑量BSTSF組、高劑量BSTSF組。3.實時熒光定量PCR觀察各組BDNF mRNA及miRNA-206-3p mRNA表達的差異。4.Western Blot檢測各組BDNF蛋白的表達。結(jié)果:1.實時熒光定量PCR反應BDNF mRNA、miRNA-206-3p mRNA比較:與空白血清組比較,模型組BDNF mRNA顯著下降(P<0.01);與模型組比較,補腎填髓方低、高劑量含藥血清組BDNF m...

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
英文縮略詞
前言
一、實驗材料
    1.1 實驗動物
    1.2 細胞系
    1.3 實驗儀器
    1.4 實驗試劑
二、實驗方法
    2.1 實驗藥物及制備
    2.2 動物分組及含藥血清的制備方法
    2.3 C6細胞培養(yǎng)
    2.4 Aβ寡聚體孵育
    2.5 實驗分組及干預措施
    2.6 熒光定量RT-PCR檢測
        2.6.1 Trizol法提取神經(jīng)元中總RNA
        2.6.2 RNA的瓊脂糖凝膠電泳
        2.6.3 RNA反轉(zhuǎn)錄
        2.6.4 實時熒光定量PCR檢測miR-206-3p mRNA
        2.6.5 實時熒光定量PCR檢測BDNF mRNA
    2.7 免疫印跡 (Western blot)法檢測BDNF蛋白的表達
        2.7.1 蛋白提取
        2.7.2 蛋白濃度測定
        2.7.3 電泳
        2.7.4 轉(zhuǎn)膜
        2.7.5 封閉
        2.7.6 一抗孵育
        2.7.7 二抗孵育
        2.7.8 顯色 / 曝光
三、統(tǒng)計方法
四、實驗結(jié)果
    4.1 實時定量熒光PCR
        4.1.1 補腎填髓方對AD細胞模型中BDNF mRNA表達的影響
        4.1.2 補腎填髓方對AD細胞模型中miRNA-206-3p mRNA表達的影響
    4.2 補腎填髓方對AD細胞模型中BDNF蛋白表達的影響
五、討論
    5.1 AD發(fā)病機制的認識
    5.2 含藥血清的制備
    5.3 AD細胞模型的建立
    5.4 BDNF、miRNA-206-3p與AD
    5.5 補腎填髓方與AD的治療
    5.6 補腎填髓方對AD細胞模型中BDNF、BDNF mRNA、miRNA-206-3p表達的影響
六、結(jié)論
致謝
參考文獻
綜述
    參考文獻



本文編號：3746446