目的:觀察補(bǔ)腎填髓方干預(yù)Aβ_25-35影響的C6大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞中以BDNFmRNA標(biāo)靶的miRNA-206-3p表達(dá)的影響,探討補(bǔ)腎填髓法的抗癡呆作用及其可能的機(jī)制,為指導(dǎo)臨床應(yīng)用和開(kāi)發(fā)新藥提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:1.含藥血清的制備:將健康SD大鼠,隨機(jī)分為空白血清組和補(bǔ)腎填髓方組,各組動(dòng)物給予相應(yīng)藥物或生理鹽水灌胃。其中補(bǔ)腎填髓方低、高劑量組灌胃濃度為1:6,后取血、離心備用。2.C6細(xì)胞的培養(yǎng):將C6細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究,以β-淀粉樣蛋白(Aβ_25-35)處理制備阿爾茨海默病細(xì)胞模型。分為空白血清組、模型組、低劑量BSTSF組、高劑量BSTSF組。3.實(shí)時(shí)熒光定量PCR觀察各組BDNF mRNA及miRNA-206-3p mRNA表達(dá)的差異。4.Western Blot檢測(cè)各組BDNF蛋白的表達(dá)。結(jié)果:1.實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)BDNF mRNA、miRNA-206-3p mRNA比較:與空白血清組比較,模型組BDNF mRNA顯著下降(P<0.01);與模型組比較,補(bǔ)腎填髓方低、高劑量含藥血清組BDNF m...

【文章頁(yè)數(shù)】：48 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
英文縮略詞
前言
一、實(shí)驗(yàn)材料
    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    1.2 細(xì)胞系
    1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    1.4 實(shí)驗(yàn)試劑
二、實(shí)驗(yàn)方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)藥物及制備
    2.2 動(dòng)物分組及含藥血清的制備方法
    2.3 C6細(xì)胞培養(yǎng)
    2.4 Aβ寡聚體孵育
    2.5 實(shí)驗(yàn)分組及干預(yù)措施
    2.6 熒光定量RT-PCR檢測(cè)
        2.6.1 Trizol法提取神經(jīng)元中總RNA
        2.6.2 RNA的瓊脂糖凝膠電泳
        2.6.3 RNA反轉(zhuǎn)錄
        2.6.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)miR-206-3p mRNA
        2.6.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)BDNF mRNA
    2.7 免疫印跡 (Western blot)法檢測(cè)BDNF蛋白的表達(dá)
        2.7.1 蛋白提取
        2.7.2 蛋白濃度測(cè)定
        2.7.3 電泳
        2.7.4 轉(zhuǎn)膜
        2.7.5 封閉
        2.7.6 一抗孵育
        2.7.7 二抗孵育
        2.7.8 顯色 / 曝光
三、統(tǒng)計(jì)方法
四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.1 實(shí)時(shí)定量熒光PCR
        4.1.1 補(bǔ)腎填髓方對(duì)AD細(xì)胞模型中BDNF mRNA表達(dá)的影響
        4.1.2 補(bǔ)腎填髓方對(duì)AD細(xì)胞模型中miRNA-206-3p mRNA表達(dá)的影響
    4.2 補(bǔ)腎填髓方對(duì)AD細(xì)胞模型中BDNF蛋白表達(dá)的影響
五、討論
    5.1 AD發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí)
    5.2 含藥血清的制備
    5.3 AD細(xì)胞模型的建立
    5.4 BDNF、miRNA-206-3p與AD
    5.5 補(bǔ)腎填髓方與AD的治療
    5.6 補(bǔ)腎填髓方對(duì)AD細(xì)胞模型中BDNF、BDNF mRNA、miRNA-206-3p表達(dá)的影響
六、結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3746446