發(fā)布時間：2023-02-18 17:06

　　丹皮酚(paeonol,Pae)是從中藥牡丹根皮和徐長卿干燥根或全草中提取的主要活性成分之一,具有廣泛的藥理活性,然而其水溶性差,生物利用度比較低。前期課題組為了提高Pae的口服生物利用度,將其載進(jìn)納米乳給藥體系,制備了Pae納米乳。納米乳可提高Pae的生物利用度,改善Pae的吸收,然而納米乳提高Pae吸收的機(jī)制尚不明確�？诜幬锏奈詹课恢饕谛∧c,人結(jié)腸腺癌Caco-2細(xì)胞在一定的培養(yǎng)條件下,其形態(tài)學(xué)、標(biāo)志酶表達(dá)、轉(zhuǎn)運(yùn)及滲透特征均與小腸上皮細(xì)胞類似,被用于藥物經(jīng)正常腸上皮細(xì)胞吸收機(jī)制的研究。小腸上除大量的正常腸上皮細(xì)胞外,存在于小腸淋巴濾泡中的M細(xì)胞可在腸粘膜上形成通道,亦是納米微粒經(jīng)小腸吸收的主要途徑。Caco-2細(xì)胞與Raji B細(xì)胞共培養(yǎng)可形成黏膜濾泡相關(guān)上皮(FAE)單層細(xì)胞模型,此模型常被用來研究納米給藥系統(tǒng)經(jīng)M細(xì)胞攝取的機(jī)制。本課題在既往工作基礎(chǔ)上,建立Caco-2細(xì)胞和FAE細(xì)胞單層模型,探究Pae納米乳在腸上皮細(xì)胞模型上的攝取機(jī)制及轉(zhuǎn)運(yùn)特性,初步闡明納米乳提高Pae口服吸收機(jī)制,以期為Pae口服納米制劑的處方設(shè)計(jì)提供依據(jù),為納米乳給藥系統(tǒng)提高難溶性中藥活性成分的生物...

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
英文縮略詞對照表
前言
第一章 丹皮酚納米乳在Caco-2細(xì)胞和FAE細(xì)胞單層模型中的攝取特性研究
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 儀器
        1.2 試劑與細(xì)胞
        1.3 主要溶液的配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果
        2.1 Caco-2細(xì)胞的培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)觀察
            2.1.1 Caco-2細(xì)胞培養(yǎng)
            2.1.2 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
        2.2 毒性檢測
            2.2.1 丹皮酚納米乳對Caco-2細(xì)胞存活率的影響
            2.2.2 丹皮酚納米乳對Caco-2細(xì)胞膜完整性的影響
        2.3 Caco-2細(xì)胞樣品中丹皮酚含量測定方法的建立
            2.3.1 色譜條件
            2.3.2 樣品處理
            2.3.3 方法專屬性
            2.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
            2.3.5 日內(nèi)、日間精密度
            2.3.6 回收率實(shí)驗(yàn)
            2.3.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
        2.4 BCA法測Caco-2細(xì)胞蛋白含量
            2.4.1 Caco-2細(xì)胞總蛋白的提取
            2.4.2 細(xì)胞蛋白含量測定
        2.5 丹皮酚納米乳在Caco-2細(xì)胞中的攝取機(jī)制研究
            2.5.1 時間對Caco-2細(xì)胞攝取的影響
            2.5.2 濃度對Caco-2細(xì)胞攝取的影響
            2.5.3 溫度對Caco-2細(xì)胞攝取的影響
            2.5.4 香豆素-6示蹤納米乳在Caco-2細(xì)胞上的攝取
        2.6 FAE細(xì)胞單層模型建立及驗(yàn)證
            2.6.1 跨膜電阻值測定
            2.6.2 Galectin-9的表達(dá)
        2.7 FAE細(xì)胞樣品中丹皮酚含量測定方法的建立
            2.7.1 色譜條件
            2.7.2 樣品處理
            2.7.3 方法專屬性
            2.7.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
            2.7.5 日內(nèi)、日間精密度
            2.7.6 回收率實(shí)驗(yàn)
            2.7.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
        2.8 BCA法測FAE細(xì)胞單層模型的蛋白含量
            2.8.1 FAE細(xì)胞單層模型總蛋白的提取
            2.8.2 BCA法測FAE細(xì)胞單層模型蛋白濃度
        2.9 丹皮酚納米乳在FAE細(xì)胞單層模型中攝取機(jī)制的研究
            2.9.1 時間對FAE細(xì)胞攝取的影響
            2.9.2 濃度對FAE細(xì)胞攝取的影響
            2.9.3 溫度對FAE細(xì)胞攝取的影響
    3 討論
    4 本章小結(jié)
第二章 丹皮酚納米乳在Caco-2細(xì)胞單層模型中的轉(zhuǎn)運(yùn)特性研究
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 儀器
        1.2 試劑與細(xì)胞
        1.3 溶液的配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果
        2.1 Caco-2細(xì)胞單層模型的建立與驗(yàn)證
            2.1.1 跨膜電阻值測定
            2.1.2 堿性磷酸酶活性的測定
        2.2 丹皮酚納米乳的雙向轉(zhuǎn)運(yùn)研究
        2.3 丹皮酚納米乳對緊密連接蛋白ZO-1分布的影響
        2.4 外排抑制劑對丹皮酚納米乳轉(zhuǎn)運(yùn)的影響
        2.5 Westernblot法檢測緊密連接蛋白和外排蛋白的表達(dá)
    3 討論
    4 本章小結(jié)
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
個人簡歷
致謝



本文編號：3745357