目的:一方面,利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的手段,對(duì)二精丸防治AD的物質(zhì)基礎(chǔ)與作用機(jī)制進(jìn)行虛擬篩選,為后期實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ);另一方面,利用行為學(xué)、形態(tài)學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證的研究方法,研究二精丸對(duì)去卵巢聯(lián)合D-半乳糖與Aβ_1-40注射所致AD大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響及其物質(zhì)基礎(chǔ)與作用機(jī)制,兩者相互印證,共同指明二精丸防治AD的物質(zhì)基礎(chǔ)與作用機(jī)制。方法:1基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)二精丸防治AD物質(zhì)基礎(chǔ)與作用機(jī)制研究1.1二精丸化合物的獲取和篩選通過TCMSP數(shù)據(jù)庫、臺(tái)灣中醫(yī)藥資料庫、中國科學(xué)院化學(xué)數(shù)據(jù)庫三個(gè)數(shù)據(jù)庫、相關(guān)文獻(xiàn)調(diào)研和實(shí)驗(yàn)室獲取,對(duì)二精丸的化學(xué)成分進(jìn)行搜集。為了便于后期分析,將枸杞子和黃精中的化合物統(tǒng)一命名,并利用DS軟件中的ADMET Descriptors模塊,對(duì)所收集到的成分進(jìn)行類藥性篩選。1.2二精丸活性化合物的靶點(diǎn)預(yù)測(cè)利用PubChem數(shù)據(jù)庫,將所有的化合物都轉(zhuǎn)化為標(biāo)準(zhǔn)的Canonical SMILES格式,將SMILES格式文件導(dǎo)入Swiss Target Prediction平臺(tái),設(shè)置屬性為“homo sapiens”,預(yù)測(cè)活性化合物的潛在靶點(diǎn)并根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道補(bǔ)充未預(yù)測(cè)到...

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
abstract
英文縮略表
引言
第一部分 基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)二精丸防治AD物質(zhì)基礎(chǔ)與作用機(jī)制研究
    1 材料
    2 方法
        2.1 二精丸化合物的獲取和篩選
        2.2 二精丸活性化合物的靶點(diǎn)預(yù)測(cè)
        2.3 二精丸防治AD靶點(diǎn)的搜集
        2.4 通路的富集分析
        2.5 構(gòu)建成分-靶蛋白-信號(hào)通路網(wǎng)絡(luò)
        2.6 分子對(duì)接驗(yàn)證
    3 結(jié)果
        3.1 二精丸活性成分的篩選
        3.2 靶點(diǎn)預(yù)測(cè)
        3.3 基因功能和通路富集分析
        3.4 二精丸防治AD“活性成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建
        3.5 分子對(duì)接
    4 討論
    5 本章小結(jié)
第二部分 二精丸對(duì)去卵巢聯(lián)合D-半乳糖與Aβ1-40 注射所致AD大鼠的藥效學(xué)評(píng)價(jià)
    1 材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)藥物
        1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.3 試劑
        1.4 儀器
    2 試驗(yàn)方法
        2.1 黃精、枸杞含量測(cè)定
        2.2 藥物制備
        2.3 動(dòng)物造模、分組及給藥
        2.4二精丸對(duì)AD大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響——Morris水迷宮、新物體實(shí)驗(yàn)
            2.4.1 Morris水迷宮試驗(yàn)
            2.4.2 新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)
        2.5 二精丸對(duì)AD大鼠海馬形態(tài)學(xué)影響
        2.6 二精丸對(duì)AD大鼠海馬區(qū)Aβ1-40及p-tau404蛋白表達(dá)水平的影響
            2.6.1 免疫組化法測(cè)定AD大鼠海馬Aβ表達(dá)水平
            2.6.2 免疫組化法測(cè)定AD大鼠海馬p-tau表達(dá)水平
        2.7 二精丸對(duì)AD大鼠雌激素水平、海馬區(qū)ERβ表達(dá)的影響
            2.7.1 EKISA Kit測(cè)定AD大鼠海馬雌激素表達(dá)水平
            2.7.2 免疫組化法測(cè)定AD大鼠海馬雌激素受體表達(dá)水平
        2.8 二精丸對(duì)AD大鼠腦內(nèi)DA水平、海馬區(qū)D1 受體和TH表達(dá)的影響
            2.8.1 EKISA Kit測(cè)定AD大鼠海馬DA表達(dá)水平
            2.8.2 免疫組化法測(cè)定AD大鼠海馬D1 受體和TH表達(dá)水平
        2.9 基于海馬蛋白質(zhì)組學(xué)二精丸防治AD的機(jī)制研究
            2.9.1 海馬組織全蛋白的提取
            2.9.2 海馬蛋白濃度的測(cè)定
            2.9.3 蛋白質(zhì)的提取、還原、烷基化、酶解及檢測(cè)
                2.9.3.1 Nanol液相色譜條件
                2.9.3.2 LTQ Orbitrap Elite質(zhì)譜條件
            2.9.4 數(shù)據(jù)分析方法
        2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 黃精、枸杞含量測(cè)定
            3.1.1 黃精含量測(cè)定結(jié)果
                3.1.1.1 黃精水分測(cè)定結(jié)果
                3.1.1.2 黃精葡萄糖測(cè)定結(jié)果
            3.1.2 枸杞含量測(cè)定結(jié)果
                3.1.2.1 枸杞水分測(cè)定結(jié)果
                3.1.2.2 枸杞葡萄糖測(cè)定結(jié)果
                3.1.2.3 枸杞甜菜堿測(cè)定結(jié)果
        3.2 陰道上皮脫落細(xì)胞涂片檢測(cè)結(jié)果
        3.3二精丸對(duì)AD大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響——Morris水迷宮、新物體實(shí)驗(yàn)
            3.3.1 Morris水迷宮試驗(yàn)結(jié)果
            3.3.2 新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4 二精丸對(duì)AD大鼠海馬神經(jīng)元的影響
            3.4.1 HE染色結(jié)果
            3.4.2 尼氏染色結(jié)果
        3.5 二精丸對(duì)AD大鼠海馬區(qū)Aβ1-40及p-tau404蛋白表達(dá)水平的影響
            3.5.1 海馬Aβ表達(dá)水平
            3.5.2 大鼠海馬p-tau404表達(dá)水平
        3.6 二精丸對(duì)AD大鼠雌激素水平、海馬區(qū)ERβ表達(dá)的影響
            3.6.1 大鼠血清雌激素含量
            3.6.2 大鼠海馬雌激素受體表達(dá)水平
        3.7 二精丸對(duì)AD大鼠腦內(nèi)DA水平、海馬區(qū)D1 受體和TH表達(dá)的影響
            3.7.1 EKISAKit測(cè)定去卵巢聯(lián)合D-半乳糖及Aβ1-40 所致AD大鼠海馬DA水平
            3.7.2 免疫組化法測(cè)定去卵巢聯(lián)合D-半乳糖及Aβ1-40 所致AD大鼠海馬D1受體表達(dá)水平
            3.7.3 免疫組化法測(cè)定去卵巢聯(lián)合D-半乳糖及Aβ1-40 所致AD大鼠海馬TH表達(dá)水平
        3.8 基于海馬蛋白質(zhì)組學(xué)二精丸防治AD機(jī)制研究的結(jié)果
            3.8.1 海馬蛋白總離子流圖
            3.8.2 二精丸對(duì)AD大鼠海馬蛋白組學(xué)影響
            3.8.3 差異蛋白GO分析結(jié)果
            3.8.4 String網(wǎng)絡(luò)分析
            3.8.5 KEGG數(shù)據(jù)庫信號(hào)通路富集分析結(jié)果
    4.討論
    5.本章小結(jié)
第三部分 二精丸防治AD的物質(zhì)基礎(chǔ)研究
    1 材料
        1.1 試驗(yàn)細(xì)胞
        1.2 試驗(yàn)藥物
        1.3 試驗(yàn)試劑
        1.4 儀器
        1.5 藥物的配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 二精丸單體化合物對(duì)PC12 細(xì)胞存活率的影響
        2.2 二精丸單體化合物對(duì)Aβ25-35 所致PC12 細(xì)胞AD模型存活率的影響
        2.3 二精丸單體化合物對(duì)Aβ25-35 所致PC12 細(xì)胞內(nèi)Ca2+的影響
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 二精丸單體化合物對(duì)PC12 細(xì)胞存活率的影響
        3.2 二精丸單體化合物對(duì)Aβ25³5 所致PC12 細(xì)胞AD模型存活率的影響
        3.3 二精丸單體化合物對(duì)Aβ25-35 所致PC12 細(xì)胞內(nèi)Ca2+的影響
    4 討論
    5 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
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答辯委員會(huì)成員



本文編號(hào)：3743676