目的:研究消癥化瘀法通過(guò)調(diào)控Wnt通路關(guān)鍵蛋白β-catenin和Cyclin D1影響肺癌干細(xì)胞(Lung Stem Cell,LSC)的增殖,探討消癥化瘀法治療肺癌的機(jī)制。方法:(1)人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549側(cè)群細(xì)胞(Side Population細(xì)胞,簡(jiǎn)稱SP細(xì)胞)的分選及其干細(xì)胞特征鑒定的研究:通過(guò)流式細(xì)胞熒光激活分選技術(shù)(Fluorescence-activated cell sorting,FACS)對(duì)人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549中SP細(xì)胞和非SP細(xì)胞進(jìn)行分選,并通過(guò)體外克隆形成實(shí)驗(yàn)、MTT法觀察細(xì)胞增殖、流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞的周期及分化和裸鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)等方法,分析SP細(xì)胞亞群、非SP細(xì)胞亞群和總細(xì)胞的體內(nèi)、外增殖能力、細(xì)胞分化能力以及體內(nèi)成瘤能力。(2)消癥化瘀法通過(guò)調(diào)控Wnt通路關(guān)鍵蛋白β-catenin和Cyclin D1影響對(duì)肺癌干細(xì)胞的增殖的研究:培養(yǎng)人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549,采用流式細(xì)胞儀分選技術(shù),篩選并鑒定其中具有干細(xì)胞特性的SP細(xì)胞,選用消癥化瘀法的代表方回生口服液,用回生口服液的含藥血清進(jìn)行干預(yù),設(shè)置回生口服液高、中、低劑量組(11.6g/kg,5.8g/kg,2....

【文章頁(yè)數(shù)】：71 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮略詞表
前言
1 人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549側(cè)群細(xì)胞SP細(xì)胞的分選及其干細(xì)胞特性鑒定的研究
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株和動(dòng)物
        1.1.2 主要的實(shí)驗(yàn)試劑
        1.1.3 主要的儀器設(shè)備
        1.1.4 主要實(shí)驗(yàn)試劑溶液的配置
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549的培養(yǎng)與傳代
        1.2.2 人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549的凍存與復(fù)蘇
        1.2.3 流式細(xì)胞熒光激活分選技術(shù)(FACS)對(duì)人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549中SP細(xì)胞
        1.2.4 體外克隆形成實(shí)驗(yàn)
        1.2.5 SP細(xì)胞分化實(shí)驗(yàn)
        1.2.6 MTT法觀察細(xì)胞增殖能力
        1.2.7 流式細(xì)胞儀分析SP細(xì)胞和non-SP細(xì)胞的細(xì)胞周期
        1.2.8 裸鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)
        1.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法
    1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1.3.1 人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549中SP細(xì)胞的分選
        1.3.2 體外克隆形成實(shí)驗(yàn)
        1.3.3 SP細(xì)胞分化實(shí)驗(yàn)
        1.3.4 MTT法觀察各組細(xì)胞增殖能力
        1.3.5 流式細(xì)胞儀分析SP細(xì)胞和non-SP細(xì)胞的細(xì)胞周期
        1.3.6 裸鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)
    1.4 小結(jié)
2 消癥化瘀法通過(guò)調(diào)控Wnt通路關(guān)鍵蛋白β-catenin和CyclinD1影響對(duì)肺癌干細(xì)胞增殖的研究
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株和動(dòng)物
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要儀器設(shè)備
        2.1.5 主要試劑溶液的配置
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 藥物血清的制備
        2.2.2 藥物干預(yù)下的裸鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)
        2.2.3 流式細(xì)胞儀分析藥物干預(yù)下肺癌干細(xì)胞的細(xì)胞周期
        2.2.4 用Western Blot法檢測(cè)回生口服液對(duì)肺癌干細(xì)胞Wnt通路中β-catenin和CyclinD1蛋白表達(dá)的影響
        2.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 藥物干預(yù)下肺癌干細(xì)胞BALB／c裸鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)
        2.3.2 藥物對(duì)肺癌干細(xì)胞細(xì)胞周期的影響
        2.3.3 藥物干預(yù)下對(duì)肺癌干細(xì)胞中β-catenin蛋白和CyclinD1蛋白表達(dá)的影響
    2.4 小結(jié)
3 討論
    3.1 中醫(yī)對(duì)肺癌的認(rèn)識(shí)
        3.1.1 中醫(yī)對(duì)肺癌病名的認(rèn)識(shí)
        3.1.2 中醫(yī)對(duì)肺癌病因病機(jī)的認(rèn)識(shí)
        3.1.3 中醫(yī)對(duì)肺癌治法治則的認(rèn)識(shí)
    3.2 化瘀消癥法的代表方回生口服液治療肺癌的研究
        3.2.1 中成藥回生口服液的出處和來(lái)源
        3.2.2 回生口服液的組方原理
        3.2.3 回生口服液中主要中藥的現(xiàn)代藥物化學(xué)及藥理研究
        3.2.4 回生口服液治療肺癌的前期臨床研究及實(shí)驗(yàn)研究
            3.2.4.1 抑制肺癌細(xì)胞的增殖
            3.2.4.2 增強(qiáng)機(jī)體免疫調(diào)節(jié)能力
            3.2.4.3 抑制肺癌新血管生成
            3.2.4.4 聯(lián)合化療藥物發(fā)揮減毒作用
    3.3 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)肺癌干細(xì)胞的認(rèn)識(shí)
        3.3.1 干細(xì)胞的概念
        3.3.2 腫瘤干細(xì)胞理論的提出及特點(diǎn)
        3.3.3 肺癌干細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)
        3.3.4 分選肺癌干細(xì)胞的主要方法
    3.4 Wnt信號(hào)通路與肺癌干細(xì)胞關(guān)系
        3.4.1 β-catenin和CyclinD1蛋白的結(jié)構(gòu)
        3.4.2 β-catenin和CyclinD1蛋白的生理功能
        3.4.3 β-catenin和CyclinD1蛋白是Wnt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的關(guān)鍵蛋白
        3.4.4 β-catenin和CyclinD1蛋白與肺癌干細(xì)胞之間的關(guān)系
4 結(jié)論
5 問(wèn)題及展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄1 綜述
    參考文獻(xiàn)
附錄2 在讀期間公開(kāi)發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號(hào)：3736581