目的:研究消癥化瘀法通過調控Wnt通路關鍵蛋白β-catenin和Cyclin D1影響肺癌干細胞(Lung Stem Cell,LSC)的增殖,探討消癥化瘀法治療肺癌的機制。方法:(1)人肺腺癌細胞系A549側群細胞(Side Population細胞,簡稱SP細胞)的分選及其干細胞特征鑒定的研究:通過流式細胞熒光激活分選技術(Fluorescence-activated cell sorting,FACS)對人肺腺癌細胞系A549中SP細胞和非SP細胞進行分選,并通過體外克隆形成實驗、MTT法觀察細胞增殖、流式細胞儀分析細胞的周期及分化和裸鼠體內成瘤實驗等方法,分析SP細胞亞群、非SP細胞亞群和總細胞的體內、外增殖能力、細胞分化能力以及體內成瘤能力。(2)消癥化瘀法通過調控Wnt通路關鍵蛋白β-catenin和Cyclin D1影響對肺癌干細胞的增殖的研究:培養(yǎng)人肺腺癌細胞系A549,采用流式細胞儀分選技術,篩選并鑒定其中具有干細胞特性的SP細胞,選用消癥化瘀法的代表方回生口服液,用回生口服液的含藥血清進行干預,設置回生口服液高、中、低劑量組(11.6g/kg,5.8g/kg,2....

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮略詞表
前言
1 人肺腺癌細胞系A549側群細胞SP細胞的分選及其干細胞特性鑒定的研究
    1.1 實驗材料
        1.1.1 實驗細胞株和動物
        1.1.2 主要的實驗試劑
        1.1.3 主要的儀器設備
        1.1.4 主要實驗試劑溶液的配置
    1.2 實驗方法
        1.2.1 人肺腺癌細胞系A549的培養(yǎng)與傳代
        1.2.2 人肺腺癌細胞系A549的凍存與復蘇
        1.2.3 流式細胞熒光激活分選技術(FACS)對人肺腺癌細胞系A549中SP細胞
        1.2.4 體外克隆形成實驗
        1.2.5 SP細胞分化實驗
        1.2.6 MTT法觀察細胞增殖能力
        1.2.7 流式細胞儀分析SP細胞和non-SP細胞的細胞周期
        1.2.8 裸鼠體內成瘤實驗
        1.2.9 統(tǒng)計學處理方法
    1.3 實驗結果
        1.3.1 人肺腺癌細胞系A549中SP細胞的分選
        1.3.2 體外克隆形成實驗
        1.3.3 SP細胞分化實驗
        1.3.4 MTT法觀察各組細胞增殖能力
        1.3.5 流式細胞儀分析SP細胞和non-SP細胞的細胞周期
        1.3.6 裸鼠體內成瘤實驗
    1.4 小結
2 消癥化瘀法通過調控Wnt通路關鍵蛋白β-catenin和CyclinD1影響對肺癌干細胞增殖的研究
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗細胞株和動物
        2.1.2 實驗藥物
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要儀器設備
        2.1.5 主要試劑溶液的配置
    2.2 實驗方法
        2.2.1 藥物血清的制備
        2.2.2 藥物干預下的裸鼠體內成瘤實驗
        2.2.3 流式細胞儀分析藥物干預下肺癌干細胞的細胞周期
        2.2.4 用Western Blot法檢測回生口服液對肺癌干細胞Wnt通路中β-catenin和CyclinD1蛋白表達的影響
        2.2.5 統(tǒng)計學處理方法
    2.3 實驗結果
        2.3.1 藥物干預下肺癌干細胞BALB／c裸鼠體內成瘤實驗
        2.3.2 藥物對肺癌干細胞細胞周期的影響
        2.3.3 藥物干預下對肺癌干細胞中β-catenin蛋白和CyclinD1蛋白表達的影響
    2.4 小結
3 討論
    3.1 中醫(yī)對肺癌的認識
        3.1.1 中醫(yī)對肺癌病名的認識
        3.1.2 中醫(yī)對肺癌病因病機的認識
        3.1.3 中醫(yī)對肺癌治法治則的認識
    3.2 化瘀消癥法的代表方回生口服液治療肺癌的研究
        3.2.1 中成藥回生口服液的出處和來源
        3.2.2 回生口服液的組方原理
        3.2.3 回生口服液中主要中藥的現(xiàn)代藥物化學及藥理研究
        3.2.4 回生口服液治療肺癌的前期臨床研究及實驗研究
            3.2.4.1 抑制肺癌細胞的增殖
            3.2.4.2 增強機體免疫調節(jié)能力
            3.2.4.3 抑制肺癌新血管生成
            3.2.4.4 聯(lián)合化療藥物發(fā)揮減毒作用
    3.3 現(xiàn)代醫(yī)學對肺癌干細胞的認識
        3.3.1 干細胞的概念
        3.3.2 腫瘤干細胞理論的提出及特點
        3.3.3 肺癌干細胞的發(fā)現(xiàn)
        3.3.4 分選肺癌干細胞的主要方法
    3.4 Wnt信號通路與肺癌干細胞關系
        3.4.1 β-catenin和CyclinD1蛋白的結構
        3.4.2 β-catenin和CyclinD1蛋白的生理功能
        3.4.3 β-catenin和CyclinD1蛋白是Wnt信號轉導通路的關鍵蛋白
        3.4.4 β-catenin和CyclinD1蛋白與肺癌干細胞之間的關系
4 結論
5 問題及展望
致謝
參考文獻
附錄1 綜述
    參考文獻
附錄2 在讀期間公開發(fā)表的學術論文



本文編號：3736581