艾葉為多年生草本植物艾（Artemisia argyi Lévl.et Vant.）的干燥葉,艾葉揮發(fā)油（Artemisia argyi essential oils,AAEO）是艾葉主要的有效成分群之一,主要含有桉油精、樟腦和龍腦等成分,本實驗所用AAEO通過水蒸氣蒸餾法提得。預實驗研究發(fā)現AAEO具有抑制肝癌SMMC-7721細胞增殖的作用,本課題將深入研究AAEO抗肝癌活性及其β-環(huán)糊精聚合物（β-cyclodextrinpoly mer,β-CDP）微球的制備與評價。實驗分為以下四部分:1.AAEO體外抗肝癌活性采用MTT法檢測細胞增殖抑制率。結果表明:在24、48和72 h的IC₅₀分別為353.83、330.88和295.50μg/mL,72 h增殖抑制率最高。通過流式細胞儀檢測細胞凋亡率。結果顯示:早期凋亡率隨著藥物濃度增加而增大,晚期凋亡率在AAEO濃度高于382.5μg/mL時驟增,最高可達到80.84%。熒光倒置顯微鏡觀察AAEO作用于SMMC-7721細胞后,細胞形態(tài)變化。結果表明:AAEO促進凋亡過程發(fā)生發(fā)展,細胞經歷了核呈致密斑塊或碎片狀... 

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
第一章 AAEO體外抗肝癌活性研究
    1 實驗材料
        1.1 實驗儀器
        1.2 實驗試劑
    2 實驗方法
        2.1 MTT法檢測細胞生長抑制率
            2.1.1 AAEO溶液的配制
            2.1.2 MTT溶液的配制
            2.1.3 實驗步驟
                2.1.3.1 鋪板給藥
                2.1.3.2 誘導培養(yǎng)
                2.1.3.3 檢測并計算抑制率
        2.2 AnnerxinV-FITC/PI雙染法檢測細胞凋亡率
            2.2.1 誘導培養(yǎng)
            2.2.2 細胞染色
            2.2.3 流式細胞儀檢測
        2.3 熒光顯微鏡觀察細胞凋亡形態(tài)
            2.3.1 誘導培養(yǎng)
            2.3.2 細胞染色
            2.3.3 熒光顯微鏡觀察
        2.4 PI單染法檢測細胞周期
            2.4.1 誘導培養(yǎng)
            2.4.2 細胞固定
            2.4.3 細胞染色
            2.4.4 流式細胞儀檢測
    3 實驗結果
        3.1 MTT法檢測細胞生長抑制率
        3.2 AnnerxinV-FITC/PI雙染法檢測細胞凋亡率
        3.3 熒光顯微鏡觀察細胞凋亡形態(tài)
        3.4 PI單染法檢測細胞周期
    4 討論與小結
第二章 AAEO體內抗肝癌藥效學研究
    1 實驗儀器、材料與試劑
        1.1 實驗儀器
        1.2 實驗試劑
        1.3 實驗動物及瘤株
    2 實驗方法
        2.1 AAEO小鼠體內急性毒性實驗
            2.1.1 AAEO溶液的配制
            2.1.2 實驗方法
        2.2 AAEO體內抗肝癌藥效學研究
            2.2.1 溶液的配制
            2.2.2 建立SMMC-7721肝癌小鼠模型
            2.2.3 分組給藥
            2.2.4 測量指標
            2.2.5 病理切片
    3 實驗結果
        3.1 AAEO小鼠體內急性毒性實驗
        3.2 AAEO體內抗肝癌藥效學研究
            3.2.1 荷瘤小鼠腫瘤體積和體重變化
            3.2.2 腫瘤重量及抑瘤率
            3.2.3 腫瘤病理學分析
    4 討論與小結
第三章 AAEO-CDP微球的制備及制劑評價
    1 實驗儀器、材料與試劑
        1.1 實驗儀器
        1.2 實驗試劑
    2 實驗方法
        2.1 AAEO-CDP微球的制備及多成分含量測定方法的建立
            2.1.1 β-CDP微球的制備
            2.1.2 AAEO-CDP微球的制備
            2.1.3 AAEO-CDP微球多成分含量測定方法的建立
                2.1.3.1 氣相色譜條件
                2.1.3.2 溶液的配制
                2.1.3.3 方法學考察
        2.2 BOX-響應曲面法
            2.2.1 單因素考察
            2.2.2 BOX-響應曲面實驗設計
            2.2.3 驗證實驗
        2.3 表征與質量評價
            2.3.1 外觀及形態(tài)
            2.3.2 粒徑及分布
            2.3.3 溶脹率(SR)
            2.3.4 β-CD的含量
            2.3.5 紅外光譜圖(IR)
            2.3.6 差示掃描量熱圖(DSC)
            2.3.7 包封率及載藥量
            2.3.8 體外釋藥研究
            2.3.9 藥物穩(wěn)定性研究
                2.3.9.1 影響因素實驗
                2.3.9.2 初步穩(wěn)定性實驗
    3 實驗結果
        3.1 AAEO-CDP微球的制備及多成分含量測定方法的建立
            3.1.1 專屬性
            3.1.2 線性關系與范圍
            3.1.3 最低檢測限及定量限
            3.1.4 精密度
            3.1.5 重復性
            3.1.6 加樣回收率實驗
        3.2 BOX-響應曲面法
            3.2.1 單因素考察
            3.2.2 BOX-響應曲面實驗設計
            3.2.3 BOX-響應曲面實驗結果分析
                3.2.3.1 包封率(Y1)
                3.2.3.2 產率(Y2)
                3.2.3.3 驗證實驗
        3.3 質量評價
            3.3.1 外觀和形態(tài)
            3.3.2 粒徑及分布
            3.3.3 溶脹率
            3.3.4 β-CD的含量
            3.3.5 紅外光譜圖(IR)
            3.3.6 差示掃描量熱圖(DSC)
            3.3.7 包封率及載藥量
            3.3.8 體外釋藥研究
            3.3.9 藥物穩(wěn)定性研究
                3.3.9.1 影響因素實驗
                3.3.9.2 初步穩(wěn)定性實驗
    4 討論與小結
第四章 AAEO及其β-CDP微球體內藥代動力學研究
    1 實驗儀器、材料與試劑
        1.1 實驗儀器
        1.2 實驗試劑
        1.3 實驗動物
    2 實驗方法
        2.1 色譜條件
        2.2 溶液的配制
        2.3 血漿樣品預處理
        2.4 方法學考察
            2.4.1 專屬性
            2.4.2 線性關系與范圍
            2.4.3 方法回收率
            2.4.4 精密度
            2.4.5 穩(wěn)定性
        2.5 AAEO體內藥代動力學實驗
            2.5.1 給藥方式
            2.5.2 樣品采集
            2.5.3 數據處理
    3 實驗結果
        3.1 方法學考察
            3.1.1 專屬性
            3.1.2 線性關系與范圍
            3.1.3 方法回收率
            3.1.4 精密度
            3.1.5 穩(wěn)定性
        3.2 體內藥代動力學結果及參數
            3.2.1 體內藥代動力學結果
            3.2.2 體內藥代動力學參數
    4 討論與小結
第五章 總論與展望
    1 總論
    2 展望
綜述
    1 環(huán)糊精
        1.1 環(huán)糊精概述
            1.1.1 環(huán)糊精結構與性質
            1.1.2 環(huán)糊精在醫(yī)藥應用
        1.2 β-環(huán)糊精聚合物微球
        1.3 β-環(huán)糊精聚合物微球制備方法
    2 AAEO的研究概況
        2.1 艾葉的本草考證
        2.2 AAEO的成分
        2.3 AAEO的藥理作用及其臨床應用
            2.3.1 抗炎作用
            2.3.2 抗菌作用
            2.3.3 抗病毒作用
            2.3.4 增強免疫作用
            2.3.5 鎮(zhèn)咳平喘作用
參考文獻
個人簡歷
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]艾葉揮發(fā)油對耳腫脹急性炎癥模型小鼠的抗炎作用研究[J]. 趙桂芝,王緒平,俞忠明,鄭純威,黃孝聞,壽旦.  浙江中醫(yī)雜志. 2016(04)
[2]艾葉揮發(fā)油對HBV的抑制作用[J]. 趙志鴻,王麗陽,鄭立運,耿楠,趙雪杰,李錦玉,王桂芳,張壯麗,張小俊.  鄭州大學學報(醫(yī)學版). 2015(02)
[3]艾葉揮發(fā)油提取工藝的優(yōu)化[J]. 趙志鴻,耿楠,黃勇勇,吳芳,李錦玉,王桂芳,張壯麗,張小俊.  中國醫(yī)藥導報. 2014(35)
[4]HS-SPME-GC-MS測定艾葉揮發(fā)性成分方法優(yōu)化[J]. 張小俊,趙志鴻,張壯麗,王桂芳,陳慧平,鄒敏.  中國實驗方劑學雜志. 2014(21)
[5]艾葉頂空萃取的揮發(fā)油指紋圖譜[J]. 張小俊,趙志鴻,張壯麗,王桂芳,陳慧平,鄒敏.  中成藥. 2014(06)
[6]艾葉乙酸乙酯提取物對HBV的抑制作用[J]. 趙志鴻,侯迎迎,鄭立運,王麗陽,王桂芳,張小俊,張壯麗.  鄭州大學學報(醫(yī)學版). 2013(06)
[7]河南駐馬店產艾葉揮發(fā)油的GC-MS分析[J]. 趙志鴻,黃勇勇,張小俊,王麗陽,張壯麗,王桂芳.  鄭州大學學報(理學版). 2013(02)
[8]響應曲面法優(yōu)化茴香油β-環(huán)糊精微球包合物的制備工藝研究[J]. 楊黎燕,楊欣雨,趙靈芝,尤靜.  食品工業(yè)科技. 2013(07)
[9]乳化溶劑揮發(fā)法及在微囊化制劑中的應用[J]. 舒丹丹,張淑娟,金麗娜,王鐵闖,李大吉.  北方藥學. 2012(04)
[10]艾葉揮發(fā)油治療大鼠變應性鼻炎的實驗研究[J]. 張樞,王宇,張宇.  中國免疫學雜志. 2011(09)

博士論文
[1]β-環(huán)糊精聚合物的合成、自組裝及作為藥物/基因載體的應用研究[D]. 熊青青.北京協(xié)和醫(yī)學院 2014
[2]環(huán)糊精聚合物微球及球形聚電解質刷選擇性吸附苯酚和重金屬離子的研究[D]. 陳晴川.華東理工大學 2013
[3]新型功能聚合物微球的制備、表征及其應用研究[D]. 潘元佳.復旦大學 2013
[4]用于新型抗癌藥物定向控制釋放的高分子載體的合成與表征[D]. 劉郁楊.西北工業(yè)大學 2003

碩士論文
[1]魚腥草揮發(fā)油抗淋巴瘤藥效學及其固體脂質納米粒的制備研究[D]. 榮曉哲.鄭州大學 2017
[2]艾葉揮發(fā)油納米結構脂質載體的制備及其抗乙肝病毒活性的研究[D]. 馮詩楊.鄭州大學 2017
[3]艾葉EA部位抗HBV活性成分分析[D]. 吳芳.鄭州大學 2016
[4]薏苡仁油交聯環(huán)糊精包合物的制備及質量研究[D]. 周云龍.揚州大學 2016
[5]莪術油交聯環(huán)糊精包合物制備工藝研究[D]. 謝飛.揚州大學 2015
[6]Rab27A/B在四種不同人肝癌細胞株中的表達[D]. 劉鼎.山西醫(yī)科大學 2015
[7]艾葉油的抗炎活性研究[D]. 李波.山西農業(yè)大學 2013
[8]聚β-環(huán)糊精載藥微球的制備及藥物釋放性能的研究[D]. 曹蕾.廣東藥學院 2009
[9]環(huán)糊精衍生物對丹皮酚包合特性研究[D]. 張榮發(fā).重慶大學 2009



本文編號：3732114