心肌缺血再灌注是終止心肌壞死的方法之一,然而再灌注本身可能會加劇缺血后的心肌損傷。因此開發(fā)治療心肌缺血再灌注損傷的藥物具有重要意義。GX是由藏紅花酸經(jīng)結(jié)構(gòu)修飾后得到的化合物,本論文通過在細(xì)胞水平和動物水平兩個研究層面,觀察GX對心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及可能的作用機(jī)制。細(xì)胞水平上,首先利用藥物誘導(dǎo)建立H9c2心肌細(xì)胞建立缺氧/復(fù)氧損傷模型,通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察缺氧/復(fù)氧模型是否建立成功;利用CCK-8法檢測細(xì)胞存活率,Hoechst 33342染色法檢測細(xì)胞凋亡以及熒光探針法檢測細(xì)胞內(nèi)ROS水平,觀察GX對心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,10 μmol/L的GX可以明顯提高細(xì)胞存活率、改善心肌細(xì)胞凋亡以及降低細(xì)胞內(nèi)活性氧水平,說明GX在一定程度上可以改善由缺氧/復(fù)氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷。動物水平上,建立在體大鼠心肌缺血再灌注損傷模型（缺血時間為30 min,再灌注120 min）,設(shè)假手術(shù)組、模型組、陽性藥紅花黃色素組（20 mg/kg,i.v.）及GX高、中、低劑量組（9、6、3 mg/kg,i.v.）;利用TTC染色法測定心肌梗死面積;小動物超聲影像系統(tǒng)、PowerLa... 

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 課題研究背景
    1.2 心肌缺血再灌注損傷的發(fā)病機(jī)制
        1.2.1 氧自由基
        1.2.2 鈣離子超載
        1.2.3 炎癥反應(yīng)
        1.2.4 細(xì)胞凋亡
    1.3 心肌缺血再灌注損傷的防治策略
        1.3.1 臨床防治:IPC與RIPC
        1.3.2 藥理學(xué)防治
            1.3.2.1 抗氧化劑
            1.3.2.2 一氧化氮
            1.3.2.3 他汀類藥物
            1.3.2.4 鈣通道阻滯劑
            1.3.2.5 治療性淺低溫
    1.4 藏紅花的藥理作用研究進(jìn)展
        1.4.1 降血脂作用
        1.4.2 抗高血壓作用
        1.4.3 抗心肌梗死及對心肌缺血的保護(hù)作用
        1.4.4 抗心律失常作用
        1.4.5 其他心血管疾病的作用
    1.5 本課題來源、研究目的及意義
        1.5.1 課題來源
        1.5.2 研究目的與意義
    1.6 研究內(nèi)容
2 GX對H9c2心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的保護(hù)作用研究
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)部分
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑與儀器
            2.2.1.1 細(xì)胞來源
            2.2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
            2.2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.2.1 藥品和培養(yǎng)基的配制
            2.2.2.2 H9c2心肌細(xì)胞的培養(yǎng)
            2.2.2.3 H9c2心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧模型的建立
            2.2.2.4 藥物處理與分組
            2.2.2.5 CCK-8法檢測細(xì)胞存活率
            2.2.2.6 Hoechst 33342染色法檢測細(xì)胞凋亡
            2.2.2.7 熒光探針法檢測細(xì)胞內(nèi)ROS的含量
            2.2.2.8 數(shù)據(jù)處理
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 H9c2心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧模型的形態(tài)學(xué)分析
        2.3.2 GX對H9c2心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧后細(xì)胞存活率的影響
        2.3.3 GX對H9c2心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧后細(xì)胞凋亡的影響
        2.3.4 GX對H9c2心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧后細(xì)胞內(nèi)ROS水平的影響
    2.4 本章小結(jié)
3 GX對大鼠心肌缺血再灌注損傷的藥效學(xué)評價
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)部分
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            3.2.1.1 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑
            3.2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
            3.2.1.3 實(shí)驗(yàn)相關(guān)耗材
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            3.2.2.1 大鼠心肌缺血再灌注損傷模型的建立
            3.2.2.2 實(shí)驗(yàn)動物分組及處理
            3.2.2.3 大鼠MIRI的心電圖表現(xiàn)
            3.2.2.4 心肌梗死面積的檢測
            3.2.2.5 M型超聲心動圖檢測心功能
            3.2.2.6 血流動力學(xué)檢測心臟功能
            3.2.2.7 數(shù)據(jù)處理
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 大鼠MIRI模型建立成功的心電圖分析
        3.3.2 不同劑量GX對MIRI大鼠心肌梗死面積的影響
        3.3.3 不同劑量GX對MIRI大鼠心彩超的影響
        3.3.4 不同劑量GX對MIRI大鼠血流動力學(xué)的影響
    3.4 本章小結(jié)
4 GX對大鼠心肌缺血再灌注損傷相關(guān)因子的影響
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)部分
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            4.2.1.1 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑
            4.2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
            4.2.1.3 實(shí)驗(yàn)相關(guān)耗材
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            4.2.2.1 大鼠心肌缺血再灌注損傷模型的建立
            4.2.2.2 實(shí)驗(yàn)動物分組及處理
            4.2.2.3 實(shí)驗(yàn)動物取材及血漿生化指標(biāo)檢測
            4.2.2.4 GX對大鼠血漿中CK的影響
            4.2.2.5 GX對大鼠血漿中LDH活性的影響
            4.2.2.6 GX對大鼠血漿中SOD的影響
            4.2.2.7 GX對大鼠血漿中MDA的影響
            4.2.2.8 GX對大鼠血漿中炎癥因子的影響
            4.2.2.9 數(shù)據(jù)處理
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 GX對大鼠血漿中CK、LDH、SOD及MDA的影響
        4.3.2 GX對大鼠血漿中TNF-α、IL-6、IL-1β的影響
    4.4 本章小結(jié)
5 GX對心肌缺血再灌注損傷相關(guān)機(jī)制的研究
    5.1 引言
    5.2 實(shí)驗(yàn)部分
        5.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            5.2.1.1 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑
            5.2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        5.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            5.2.2.1 心肌組織總RNA的提取
            5.2.2.2 反轉(zhuǎn)錄
            5.2.2.3 Real-time PCR
            5.2.2.4 數(shù)據(jù)處理
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 RT-PCR檢測NOX2、NOX4基因的mRNA表達(dá)
        5.3.2 RT-PCR檢測TNF-α、IL-6及IL-1β基因的mRNA表達(dá)
    5.4 本章小結(jié)
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號：3727234